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1.
在癌变原理研究的实验系统中最经典的是动物诱癌模型,但是试验周期长,人力物力花费大,而且对细胞癌变过程中发生的复杂生物学现象难以进行直观的分析。嗣后,发展了哺乳动物细胞体外转化系统。由于动物试验和动物细胞体外转化获得的结论只具有相对参考价值,不可轻易地外推到人癌的发生情况,因此,采用人 相似文献
2.
不同电融合条件对小鼠卵丘细胞核移植重组胚融合和早期发育的影响 总被引:4,自引:1,他引:3
目的 研究不同电融合条件对来源于小鼠卵丘细胞核移植重组胚的融合和早期发育的影响,寻找最佳电融合参数。方法 将直径10~12mm的C57BL/6j小鼠卵丘细胞核注射到去核卵母细胞透明带下,构建供体核一卵母细胞复合体。在不同电融合条件下诱导两者问的融合,并对重组胚激活以及随后发育的早期阶段包括2细胞、4~8细胞和桑椹胚进行观察和计数。结果 电融合时电场强度或脉冲时间在一定范围内允许波动,变动范围分别是电场强度1000-2000kV/cm和脉冲时程40~160ms。低于容许范围的电融合参数会降低供体核一卵母细胞复合体的融合率.而高于容许范围的参数会导致供体核-卵母细胞复合体溶解乃至死亡。如果电融合参数在容许范围内,供体核-卵母细胞复合体的融合率无统计学差异,并且融合后重组胚的激活,以及发育至2细胞、4~8细胞和桑椹胚阶段的比率也无统计学差异。此外,脉冲重复次数以1~2次为佳。结论 优化的电融合参数是决定供体核-卵母细胞复合体融合与重组胚激活的关键因素。 相似文献
3.
运用蛋白质组学技术研究EB病毒诱导鼻咽癌细胞CNE2表达变化的蛋白质 总被引:2,自引:1,他引:1
【目的】寻找并鉴定CNE2细胞在EB病毒感染后表达发生变化的功能蛋白质,为阐明该病毒诱导鼻咽上皮细胞发生生物学变化的作用机制提供线索。【方法】分别从EB病毒感染后的CNE2细胞和未经感染的CNE2细胞中抽提总蛋白质,通过双向电泳分离。运用软件比较分析上述两组的蛋白质表达图谱,寻找表达有差异的蛋白质点。从凝胶上切下差异蛋白质点,通过基质辅助激光解吸,离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。【结果】图像分析显示,EB病毒感染后的CNE2细胞和未经感染的CNE2细胞之间存在一些明显差异的蛋白质点。通过MALDI-TOF-MS成功地鉴定了其中4个蛋白质点,EB病毒感染CNE2细胞后蛋白质GRP78和硫氧还蛋白过氧化物酶1表达上调,蛋白质肌动蛋白胞浆组分2和蛋白酶体。链表达下调。【结论】EB病毒感染鼻咽上皮细胞后引起生物学变化的分子机制可能包括:①诱导细胞大量合成蛋白质以促进增生.同时上调蛋白质GRP78的表达而抗凋亡;②提高细胞内氧化状态而诱导蛋白质硫氧还蛋白过氧化物酶1的表达,并可能通过该蛋白质调控NF-κB和AP-1来影响细胞生长。 相似文献
4.
人多聚免疫球蛋白受体转基因鼠的建立 总被引:5,自引:1,他引:4
目的 构建携带有多聚免疫球蛋白受体(pIgR)的转基因鼠,使其能以近乎自然的状态感染EBV,观察EBV在鼻咽部病变过程中的作用。方法 采用角质上皮特异性启动子ED—L2调控的pIgR基因,用显微注射方法将其导入受精卵中,使该基因能在F0代转基因鼠鼻咽部特异性表达。结果 PCR检测F0代pIgR基因阳性率达37.5%(6/16),Southem杂交F0代pIgR基因阳性率为12.5%(2/16)。结论 表达多聚免疫球蛋白受体的转基因动物有望成为研究EBV病毒致病机制的一种新的动物模型。 相似文献
5.
6.
EB病毒BNLF—1基因原代转基因小鼠发育及死因分析 总被引:3,自引:0,他引:3
通过基因重组,构建携带MLV启动子及EB病毒瘤基因BNLF-1的融合基因,经显微注射后共产生原代转基因小鼠12只,这些小鼠在生长发育上与同胞胎中的野生型小鼠并无显著差异,但其发育期死亡率却高得多(9/12)。对死亡小鼠的组织病理学诊断表明:肺、脾、肝、肾等器官均有程度不同的病变,有5只小鼠可确定为假结核病,存活的3只有1只眼部感染致盲。上述结果提示,这种小鼠可能因免疫系统异常而易受致病微生物感染。 相似文献
7.
目的克隆微小RNAhsa-miR-26a并构建其慢病毒表达载体。方法将PCR扩增得到的miR-26。前体序列和pIVTHM载体经双酶切后连接产生pIVTHM-miR-26a慢病毒表达载体,双酶切后测序鉴定。筛选阳性克隆。用pIVTHM-miR-26a、psPAX2和pMD2-G3质粒共转染包装细胞293FT,包装产生慢病毒,以293FT细胞绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达水平测定病毒滴度。结果经双酶切鉴定和测序证实,成功构建了miR-26a的慢病毒表达载体pIVTHM—miR-26a。倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293FT呈绿色荧光.并测得病毒滴度为5×10^5TU/ml。成功构建hsa—miR-26a的慢病毒表达载体,为深入研究miR-26a的生物学功能奠定了基础. 相似文献
8.
慢病毒介导的外源基因体外投递系统的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系,以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染)、超速离心浓缩和保存等,随后用病毒上清或浓缩后的病毒感染293FT细胞,24—48h后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产;将携带EGFP基因的病毒上清或浓缩后的病毒分别加入内含293FF细胞、小鼠ES细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)或小鼠睾丸生殖细胞的培养板孔内,感染6—12h后,用相应培养基替换感染液,数天后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功感染不同哺乳类细胞。结果按标准程序生产的携带EGFP基因慢病毒(病毒上清或浓缩后的病毒)成功高效率感染293FF细胞、MEFs或小鼠睾丸生殖细胞;用浓缩后的病毒(携带EGFP基因)感染小鼠ES细胞,亦可获得EGFP阳性的ES细胞克隆。结论熟练掌握了慢病毒包装、浓缩及鉴定等技术,同时针对不同哺乳类细胞建立了相应的慢病毒介导的外源基因体外传递系统,这些为相关后续研究打下了良好的基础。 相似文献
9.
目的建立人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR,研究其耐药机制,探讨小白菊内酯(PAR)逆转A549/GR耐药的机制。方法以吉非替尼为诱导剂,人肺腺癌细胞系A549为诱导对象,采用大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR。采用细胞毒实验(MTT)法测定细胞耐药指数,免疫印迹法(Western blotting)检测细胞耐药相关蛋白表达水平,进一步通过MTT法检测PAR对A549/GR的逆转倍数,Annexin V-FITC双标法检测PAR的促凋亡作用,Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果所建立的人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR耐药指数为18.7。A549/GR细胞中MDR和ABCG2耐药相关蛋白表达水平较A549升高。MTT结果显示PAR对耐药细胞A549/GR的逆转倍数为8.66。Annexin V-FITC凋亡检测结果显示PAR能有效促进A549/GR细胞凋亡,Western blotting检测显示PAR能有效降低survivin、Bcl-2两种抑制凋亡相关蛋白的表达。结论成功建立了人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR;PAR通过促进A549/GR细胞凋亡有效逆转其耐药。 相似文献
10.
【目的】 应用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,有效沉默鼻咽癌细胞CNE-2的CR-1基因表达,研究CR-1对鼻咽癌细胞生物学行为的影响&;#65377; 【方法】 构建针对CR-1的siRNA慢病毒表达载体[含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]&;#65377;利用包装细胞293FT生产慢病毒,感染鼻咽癌细胞CNE-2, 流式筛选GFP阳性细胞&;#65377;应用荧光定量PCR&;#65380;Western blot检测病毒感染后CNE-2细胞中CR-1基因的mRNA和蛋白表达,获得干扰CR-1基因的细胞群&;#65377;并用MTT法&;#65380;平板克隆形成实验及Boyden侵袭小室观察CR-1干扰后对CNE-2细胞生物学行为的影响&;#65377; 【结果】 PCR 和测序证实,成功构建了CR-1 shRNA的慢病毒载体pLVTHM-shCR-1&;#65377;荧光定量PCR 和Western blot结果表明,所获得的细胞中CR-1 mRNA及蛋白表达水平较阴性对照组&;#65380;空白对照组均显著降低(P < 0.05)&;#65377;CR-1干扰后的细胞生长明显减慢,克隆形成能力减弱,侵袭运动能力下降&;#65377; 【结论】 通过RNAi技术阻断CR-1的表达,可抑制CNE-2细胞的生长&;#65380;增殖&;#65380;迁徙,提示CR-1在鼻咽癌的发生&;#65380;发展过程中起重要作用&;#65377; 相似文献