对有效的抗肿瘤单抗药物的探索

文章综述了单抗药物用于临床肿瘤治疗的研究进展。开发一个成功的抗肿瘤单抗药物应从以下几方面考虑：(1)选择特异的肿瘤抗原；(2)制备人源化单抗以降低单抗药物的免疫原性；(3)利用抗体工程改造抗体结构以延长半衰期；(4)改进给药方式以提高抗体药物在肿瘤组织的局部浓度；(5)提高单抗药物的抗肿瘤活性；(6)进一步提高单抗药物的选择性。还简述了单抗药物抗肿瘤的可能机制及单抗药物的前景展望。     

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)与绿色荧光蛋白(GFP)在转基因烟草中的融合表达

构建人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达的植物表达载体pCA1302NSF-tPA。将重组载体转入根瘤农杆菌GV3101中，通过叶圆盘法转化烟草。转化植株经PCR鉴定整合有t-PA基因，通过荧光显微镜可检测到绿色荧光蛋白(GFP)的表达。     

海胆黄多糖SEP的制备及其抗肿瘤作用研究

建立荷瘤小鼠模型，以不同剂量的SEP经腹腔注射给药后检测荷瘤小鼠的肿瘤生长情况、脾指数、胸腺指数、脾淋巴细胞增殖和抗氧化酶活性研究海胆黄多糖SEP的抗肿瘤活性。结果：SEP高、中、低3个剂量组均可显著抑制S180实体瘤的生长，其抑瘤率分别为46．9％、41．7％和40．7％；SEP能显著提高荷瘤小鼠的脾指数和胸腺指数，明显促进脾淋巴细胞的增殖，显著降低小鼠血清中丙二醛含量和提高超氧化物歧化酶活性。结论：SEP具有明显的抗肿瘤活性，其作用可能是通过免疫调节和抗氧化作用实现的。     

SMYD3调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖机制的研究

目的：通过转染技术抑制或增强SMYD3基因的表达,以探讨SMYD3对乳腺癌MCF-7细胞增殖的调控机制机制。方法：以MTY法和软琼脂克隆形成实验研究抑制或增强SMYD3基因表达对细胞增殖的影响,以RT-PCR法和Western印迹法检测MCF-7细胞经转染后,胞内SMYD3、ERK／MAPK通路相关蛋白及其磷酸化产物,以及凋亡和细胞周期调控相关蛋白表达水平的变化。结果：用针对SMYD3基因的shRNAs表达质粒转染MCF-7细胞后,其SMYD3基因mRNA和蛋白表达水平下调,细胞生长受到抑制,细胞中ERK1／2、CyclinD1和CDK4蛋白水平明显下调;软琼脂克隆形成实验显示,增强SMYD3基因表达能明显促进MCF-7细胞克隆形成。结论：SMYD3可通过激活ERK／MAPK信号转导通路和上调细胞周期相关蛋白CyclinD1和CDK4的水平提高肿瘤细胞的增殖能力。     

人结缔组织生长因子单克隆抗体的制备及鉴定

用纯化的人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)免疫BalB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备CTGF单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),获得2株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系7C7和8A11。两株细胞染色体众数分别为95条和91条;单抗亚类鉴定结果显示2株单抗均为IgG1型;间接ELISA法测定7C7和8A11腹水效价分别为:1.3×105和8.1×104;相对亲和力:7C7>8A11。CTGF单克隆抗体的制备为相关实验研究和临床诊断提供了条件。     

乙酰肝素酶稳定表达细胞株的建立

目的:在真核细胞中表达人乙酰肝素酶(HPA)并建立该酶的稳定表达细胞株。方法:构建包含人乙酰肝素酶全长编码序列的真核表达载体pcDNA-hpaFL,转染CHO-K1细胞,G418筛选稳定表达细胞株。通过RT-PCR,Western-blot分析与鉴定蛋白的表达;用荧光HPLC法检测蛋白的活性。结果:在CHO-K1细胞中成功地表达出有活性的人乙酰肝素酶,并获得该酶的稳定表达细胞株。结论:成功地建立了人乙酰肝素酶稳定表达细胞株,为其抑制剂的筛选及其功能的研究奠定了基础。     

乌索酸通过抑制miR-21表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制

探讨乌索酸通过调控miR-21表达从而诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制。采用MTT方法检测乌索酸对肝癌细胞增殖的抑制作用;qPCR检测肝癌细胞中miR-21的表达水平及乌索酸对HepG2细胞中miR-21表达的调控作用;转染miR-21 mimics进HepG2细胞中上调miR-21的表达后,MTT、流式细胞检测法、RT-PCR方法分别分析miR-21在乌索酸对细胞的增殖、凋亡以及对凋亡相关基因的调控过程中的作用。结果显示,与肝正常细胞L-02以及肝癌SMCC-7721、Bel-7402细胞相比较,乌索酸对肝癌HepG2细胞的增殖抑制效果最强,且HepG2细胞中miR-21的表达水平最高。乌索酸可下调HepG2细胞中miR-21的表达,且在24 h的下调作用最强。miR-21的表达上调可以部分抵消乌索酸对HepG2细胞的抑制增殖及促进凋亡,部分抵消下调凋亡抑制基因Bcl-2、survivin表达和上调促凋亡基因Bax表达的作用。结果提示,乌索酸通过抑制miR-21的表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡。     

海洋放线菌N331生物碱活性组分的研究

目的 对海洋放线菌N331发酵液中的抗菌活性成分进行研究.方法 采用大孔树脂吸附、硅胶柱层析分离纯化抗菌活性成分,并对其理化性质和生物活性进行初步研究.结果 从海洋放线菌N331的发酵液中分离到一种结晶状活性组分,鉴定为生物碱类物质,由几种极性相近的化合物组成;其对金黄色葡萄球菌敏感茼及其耐药菌的最小押菌浓度均为4μg·mL-1,对口腔上皮癌KB细胞和肺癌A549细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为2.0,3.0μg·mL-1,与顺铂的抗肿瘤效价相当.结论 海洋放线菌N331能产生抗茸及细胞毒性较强的生物碱类活性物质.     

丹参酮ⅡA滴丸制备工艺的研究

研究新药丹参酮ⅡA滴丸的制备工艺,确立最佳工艺条件.设计正交实验考察滴丸制备工艺中各影响因素.以聚乙二醇4 000为基质,二甲基硅油为冷凝液,滴制工艺为滴制温度80℃,冷凝液5～25 ℃梯度冷却,滴距4 cm,滴速60滴/min.该工艺制得的滴丸成型性好,丸种差异小,崩解时限为17 min,符合药典规定.该工艺适合丹参酮ⅡA滴丸的制备,且适宜工业化生产.     

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)在转基因烟草中的表达

实验室构建了携带有人组织型纤溶酶原激活剂（tissue plasminogen activator，t-PA）植物表达载体并转化人根瘤农杆菌GV3101。该农杆菌以叶盘法转化烟草，建立表达t-PA的转基因烟草体系。通过对转化植株进行Southern blotting，RT-PCR，Western blotting和纤维蛋白琼脂糖平板（fibrin-agarose plate assay，FAPA）法检测，结果显示，在转基因烟草中成功地表达出有活性的人t-PA。