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为了研究caveolin-1对胃癌细胞生物学行为的影响,探讨caveolin-1作为基因治疗的候选基因的可能性,用Lipofectin将caveolin-1基因稳定转染胃癌细胞系建立稳定表达caveolin-1的胃癌细胞系MGCS03/Cav-1,并将空载体转染MGC803作为对照(MGC803/pcl-neo)。采用免疫细胞化学及western blot检测转染及未转染的MGC803细胞中caveolin-1的表达情况。 相似文献
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细胞周期与PTCA术后再狭窄 总被引:2,自引:0,他引:2
球囊损伤后内膜增生部分是由于血管平滑肌细胞的增生和迁移所致 ,而血管平滑肌细胞的增殖受细胞周期调节蛋白控制。在球囊损伤模型中 ,细胞周期正调控蛋白、负调控蛋白在时间和空间上分别与血管平滑肌细胞增殖动力学呈正相关和负相关关系 ,即两者协同作用控制着血管平滑肌细胞的增殖与非增殖的平衡。以这些蛋白为目标 ,利用反义寡核苷酸、转基因技术有望限制增殖性血管疾病的发生和发展 ,同时也可据此研究药物作用的新机制 ,并为寻求防治心血管疾病新药提供新途径 相似文献
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酸性核糖体磷酸化蛋白P(0-2)的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
酸性核糖体磷酸化蛋白P0、P1、P2是位于真核生物核糖体60S大亚基上的三种核糖体磷酸化蛋白,它们在核糖体上共同组成一个独特的向外侧凸出的五聚体复合物核糖体茎区,此茎区与核糖体上的28 SrRNA的一个保守结构域共同形成一个GTPase相关位点,并在蛋白质翻译延伸过程起着重要的作用。此外,酸性核糖体磷酸化蛋白P0、P1、P2还与细胞凋亡、肿瘤和免疫性疾病的发生、发展密切相关。本文就这三个蛋白结构、功能及其相关作用机制作一综述。 相似文献
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Bcl-XL siRNA对肺腺癌细胞A549/DDP药物敏感性及凋亡的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨小干扰RNA沉默Bcl-XL对肺腺癌耐药细胞株A549/DDP药物敏感性的影响及其凋亡机制。方法:将Bcl-XL siRNA质粒载体转染至A549/DDP细胞,MTT、流式细胞仪检测细胞药物敏感性的改变;丫啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bcl-XL mRNA水平;Western-Blot检测Bcl—XL、caspase-3蛋白表达的变化。结果:分别用0.2、2、20、200μg/mL顺铂处理细胞48h,MTT显示转染Bcl-XL siRNA细胞组A570吸光度值较阴性siRNA细胞组和未转染对照组明显降低,细胞生长抑制率明显增高;用20μg/mL顺铂处理细胞48h,流式细胞仪检测,转染Bcl-XL siRNA组凋亡率较转染阴性siRNA组和未转染组增加;AO/EB染色显示转染Bcl-XL siRNA的细胞较转染阴性siRNA及未转染者凋亡率增加;转染Bcl-XL siRNA降低了Bcl-XL mRNA和蛋白水平,升高了caspase-3活性形式蛋白表达。结论:Bcl-XL siRNA特异性下调A549/DDP细胞Bcl-XL的表达,活化caspase-3蛋白,促进A549/DDP细胞凋亡,增强该肺腺瘤细胞对顺铂的敏感性。 相似文献
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目的:研究靶向Bcl-XL基因的小干扰RNA对胃腺癌MGC-803细胞Bcl-XL基因表达的作用及对药物敏感性的影响。方法:构建的Bcl-XLsiRNA载体或阴性siRNA并稳定转染到胃癌MGC-803细胞,G418抗生素筛选阳性克隆,克隆扩大培养,免疫荧光观察细胞蛋白表达。用不同浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,MTT观察细胞增殖的变化。用一种浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,流式细胞术观察亚G1细胞的比例。结果:免疫荧光结果表明,Bcl-XLsiRNA稳定转染组细胞中Bcl-XL蛋白的表达比阴性siRNA稳定转染组细胞Bcl-XL基因的表达均有明显的降低。当不同浓度的5-FU(13、130、1 300、13 000 mg.L-1)或DADS(20、35、50mg.L-1)处理细胞24 h后,MTT结果表明Bcl-XLsiR-NA细胞组A570吸光度值较阴性siRNA细胞组和未转染对照明显降低,细胞生长抑制率明显增高。5-FU或DADS药物的IC50值在Bcl-XLsiRNA细胞组有明显降低。使用5-FU(130 mg.L-1)或DADS(50mg.L-1)处理细胞24 h后,流式结果表明,Bcl-XL-siRNA细胞组较阴性siRNA和正常对照细胞组亚G1细胞比例有明显增高。结论:Bcl-XL siRNA下调了MGC-803细胞Bcl-XL基因的表达;Bcl-XLsiRNA能够促进MGC-803细胞凋亡,增强细胞对化疗药物的敏感性。 相似文献
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Rho GTPase在信号转导和细胞骨架中的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
Rho GTPases参与多种重要的细胞生命活动,如肌动蛋白细胞骨架的重构、细胞黏附、细胞运动、囊泡运输、转录激活、基因表达和细胞周期的调控等。当Rho GTPase蛋白水平改变,活性状态改变,效应蛋白丰度改变后,出现异常的Rho 信号,从而影响细胞骨架重组使细胞迁移。调节这些生物信号的转导通路非常复杂, 因此,Rho GTPases已成为近年来的研究热点。 相似文献
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目的构建真核细胞pCMV/cyto/myc-M-CSF载体,建立M-CSF胞质内稳定表达细胞系,为进一步研究M-CSF的胞内作用奠定基础。方法构建靶向定位载体pCMV/cyto/myc-M-CSF,PCR及双酶切鉴定后转染HeLa细胞,G418筛选阳性克隆,RT-PCR和免疫细胞化学鉴定M-CSF的表达及M-CSF的蛋白定位。结果重组质粒pCMV/cyto/myc-M-CSF用M-CSF特异性的引物进行PCR扩增,结果显示插入片段约为1 400 bp,双酶切后分别得到约5.0 kb和1 400 bp的两条带,M-CSF分子大小与预期一致。RT-PCR、免疫细胞化学结果表明转染M-CSF的HeLa细胞高表达M-CSF(P〈0.05),并且转染M-CSF的HeLa细胞表达的M-CSF蛋白定位于细胞质。结论成功构建了稳定高表达胞质M-CSF的HeLa细胞系。 相似文献
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目的 :筛选抗内皮细胞与单核细胞黏附的活性多肽。方法 :①以氧化型低密度脂蛋白 (ox LDL ,10 0mg/L)损伤的内皮细胞作为筛选的“靶”细胞 ,从XCX15肽文库 (X代表随机氨基酸 ,C为半胱氨酸 ,X15代表编码随机 15肽 )中 ,筛选能与受损内皮细胞特异性结合的多肽。②用ELISA法鉴定部分阳性克隆 ,经DNA序列测定确定其插入的氨基酸序列。③以计数法检测特异性噬菌体多肽对内皮细胞与单核细胞黏附率的影响。结果 :①从挑选鉴定的 14个克隆中 ,得到 6个阳性克隆 ,测序结果有两个克隆的外源多肽序列相同 ,4个克隆的外源多肽中含有亮氨酸 亮氨酸重复序列。②两个序列相同的克隆的噬菌体多肽 ,能明显降低内皮细胞与单核细胞的黏附率(分别降低 17.0 %和 17.6 % ,P <0 .0 1,n =4 )。结论 :从XCX15肽文库中 ,初步鉴定出 1个具有较明显地抗内皮细胞与单核细胞黏附作用的活性多肽 相似文献
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二烯丙基三硫诱导人髓样白血病HL-60细胞活性氧产生及其细胞毒性作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨二烯丙基三硫(DATS)诱导人白血病HL-60细胞产生活性氧(ROS)及其细胞毒性作用。方法: 用浓度为50、100、150、200 μmol/L DATS处理HL-60细胞1、3、6、12、24 h后,流式细胞计数法检测HL-60细胞内的ROS水平,NBT还原实验分析NADPH氧化酶的活性,分别用NADPH氧化酶特异性阻断剂apocynin与抗氧化剂NAC(N-acetyl-L-cystein)预处理30 min后,观察DATS对HL-60细胞产生活性氧的影响,分光光度法检测细胞质膜氧化产物丙二醛(MDA)与细胞蛋白氧化产物羰基化蛋白(protein carbonyl)。结果: DATS能诱导人白血病HL-60细胞产生ROS,当DATS处理细胞1-3 h 时,HL-60细胞产生ROS随DATS浓度的升高和处理时间的延长而升高,当浓度为150 μmol/L DATS处理细胞3h时,ROS的荧光强度达到最高峰,其后维持在一个较高水平。NADPH氧化酶活性与ROS的产生一致。HL-60细胞的脂质过氧化和羰基化蛋白浓度与DATS诱导ROS产生的趋势基本一致,都在3 h、150 μmol/L处理点达到最高值。应用NADPH氧化酶特异性阻断剂apocynin或抗氧化剂NAC后,能显著降低HL-60细胞ROS的产生和细胞损伤。结论: NADPH氧化酶是DATS诱导 HL-60 细胞产生ROS的主要酶系,ROS能氧化细胞质膜和蛋白质。 相似文献