18β-甘草次酸抑制肝癌细胞生长的实验研究

目的:探讨18β-甘草次酸(GA)对肝癌细胞生长的影响。方法:用不同浓度的GA或阿霉素(ADM)处理肝癌细胞(Hepa1-6)及正常肝细胞(AML-12)不同时间后,分析细胞的抑制情况及半数抑制浓度(IC_(50));根据IC_(50),选择合适浓度的GA处理Hepa1-6细胞一定时间后,检测细胞的凋亡情况。结果:低浓度GA对两种细胞增殖均无明显影响,当GA浓度8μg/m L时,对两种细胞的增殖均有明显的抑制作用,且抑制作用随药物浓度升高、作用时间延长而增加;ADM所有浓度对两种细胞的增殖均有抑制作用,且抑制作用随浓度升高而增加,但随时间延长而减弱。GA对Hepa1-6细胞的IC_(50)低于对AML-12细胞的IC_(50),当药物作用48 h时,GA对两种细胞的IC_(50)的差值最大,而ADM对Hepa1-6细胞的IC_(50)在任何时间都高于对AML-12细胞的IC_(50);选择25μg/m L的GA处理Hepa1-6细胞48 h(该条件下,Hepa1-6细胞的增殖抑制率为50%,而AML-12细胞的增殖抑制率为3.8%),Hepa1-6细胞的明显增加,且主要是早期凋亡(P0.05)。结论:GA能够抑制肝癌的生长,其机制可能与诱导肝癌细胞凋亡有关;在治疗肝癌方面,GA可能较ADM更为安全,毒副作用更小。     

射频消融术治疗原发性肝癌（附58例报道）

目的探讨射频消融术在无法实施手术的原发性肝癌患者中的临床应用效果。方法回顾性分析2007年9月至2011年3月期间我院收治的58例由于各种原因无法手术治疗的大肝癌（〉5cm）并接受射频消融治疗患者的临床资料,射频消融前后结合超声造影的方法,术后随访并定期复查血清甲胎蛋白水平和超声造影或者肝脏增强CT。结果58例中无一例发生与射频消融相关的死亡,22例达到完全消融（37．9％,22／58）。共51例（87．9％,51／58）获得随访,随访至2012年5月,随访时间（12．6±6．4）个月（2～21个月）,随访12个月以上患者有20例（39．2％,20／51）,有10例（19．6％,10／51）无肿瘤复发或者转移的迹象。22例达到完全消融的患者无瘤生存时间为（13．6±10．4）个月（3～21个月）;36例未能达到完全消融的患者中,有19例随访期间死亡,生存时间（8．3~6．1）个月（4～16个月）。结论由于各种原因不能接受手术的大肝癌患者,射频消融作为一种有效、安全治疗方法,部分能达到完全消融的效果,而部分作为姑息性治疗手段,能一定程度上减轻患者的疼痛,达到提高生活质量的目的。     

肝星状细胞与肝癌的研究进展

肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是威胁着人类健康的几大杀手之一,其死亡率仅次于胃癌和食管癌,位居第三位。肝硬化是HCC发生发展的主要危险因素,大量研究表明活化的肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）是肝硬化等慢性肝病发生发展过程中的主要影响细胞。近年来的研究发现HSCs能够向HCC细胞基质浸润,通过促进肝硬化癌变等多种机制参与肝癌的发生发展,在HCC的发生发展过程中扮演着非常重要的作用。     

胆囊巨大结石颈部嵌顿并急性胆囊炎行LC的临床体会

[摘 要] 目的 总结胆囊巨大结石颈部嵌顿并急性胆囊炎行腹腔镜胆囊切除术（LC）的临床经验。方法 回顾性分析2014年1月至2016年10月贵州省人民医院肝胆外科住院行LC的胆囊巨大结石颈部嵌顿并急性胆囊炎患者50 例临床资料。结果 50例患者均成功完成LC,无中转开腹病例,术后均无出血、胆漏等并发症发生,无死亡病例。患者于术后第1天进食低脂饮食并下床活动,第3天拔除腹腔引流管办理出院。术后随访,所有患者均无残石、腹痛、延迟性腹腔出血、胆漏和黄疸等并发症。结论 胆囊巨大结石颈部嵌顿并急性胆囊炎行LC是安全、可行的。     

完全腹腔镜巨脾切除术30例临床分析

[摘要] 目的 总结完全腹腔镜巨脾切除术的临床经验和技巧。方法 回顾性分析2014年1月至2016年8月于贵州省人民医院肝胆外科住院行完全腹腔镜巨脾切除术的30例患者临床资料。结果 除中转开腹3例,余27例患者均成功完成完全腹腔镜巨脾切除术,平均手术时间（131.50±3.52）min,平均出血量（188.00± 55.86）mL,术后胃肠功能恢复平均时间（38.27±3.06）h,无出血、胰漏等并发症发生,无死亡病例。结论 完全腹腔镜巨脾切除术是安全、可行的。     

活化的肝星状细胞在肿瘤微环境中的免疫调节作用

目的 研究活化的肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)在小鼠肝细胞癌发生发展中的免疫调节作用及肿瘤微环境的免疫功能变化.方法 于体外,用Brdu细胞增殖实验检测HSCs上清对肿瘤增殖的影响,用混合淋巴实验检测HSCs的免疫调节作用.体内实验采用皮下移植瘤模型,分为H22单纯注射组与H22+HSCs联合注射组.20 d后对荷瘤小鼠行瘤组织解剖测量移植瘤大小;用免疫组化法观察两组肿瘤中T细胞亚群浸润变化情况和接种肿瘤PD-L1的表达变化;用流式细胞术分析脾脏中T细胞亚群变化.然后,通过Tunel检测肿瘤组织单核细胞凋亡情况.结果 在体外实验,Brdu检测显示HSC:条件培养基(HSCs-CM)能明显诱导H22细胞的增殖,而混合淋巴实验则显示HSCs对T细胞增殖有明显的抑制作用.在体内实验,HSCs+H22组小鼠皮下移植瘤的形成时间与生长速度明显快于单纯接种H22组;肿瘤组织免疫组化检测显示HSCs+H22组浸润的T细胞及其亚型较单纯H22组有不同程度降低;HSCs+H22组脾脏亦显示T细胞及其亚型出现不同程度降低.TUNEL试剂盒检测显示HSCs+H22组肿瘤组织中单核细胞的凋亡数量增加,免疫组化分析显示HSCs+H22组肿瘤组织中PD-L1表达增加.结论 HSCs可通过免疫抑制作用在肿瘤微环境中促进肿瘤的发生、发展,这一发现可能为肝癌的治疗提供新的思路.

Abstract：

Objective To determine immune modulatory activity of activated hepatic stellate cells( HSCs) in hepatocellular carcinoma and immune response in tumor microenvironment. Methods Cell proliferation was measured by BrdU incorporation with a microtiter plate reader at 450 nm. The effect of HSCs on T cell proliferation was measured by MLR. Mouse hepatic cancer cell line H22 were implanted on the backs of BALB/c mice to establish the subcutaneous transplanted tumor model. Then the mice were sacrificed after 20 days for anatomical and size determination. Furthermore, Paraffin-embedded tissue was removed by serial tissue sectioning and immunohistochemically examined for expression of T lymphocyte subsets. T lymphocyte subsets in splenocytes were detected by FCM. Apoptotic mononuclear cells were evaluated by FITC-labeled Tunel assay. Results We determined that HSCsCM promoted hepatocellular carcinoma(HCC) cell line proliferation and HSCs inhibit T cell proliferation by MLR in vitro. We also examined normal immune mice to assess the immunosuppression of HSCs in the development of HCC. In the co-transplantation with HSCs group, T cells and their subtypes decreased obviously in the tumors and the spleen. The results showed that co-transplanted HSCs can induce more PD-L1 expression and more mononuclear cell apoptosis in tumor tissue. Conclusion Our results demonstrated that HSCs promote HCC progression partially because of their immune regulatory activity. Our data supply new information to support an integral role for HSCs in promoting HCC progression and suggest that HSCs may serve as a therapeutic target for HCC.     

熊胆对肝星状细胞免疫学特性影响的研究

目的:探讨熊胆是否能够抑制肝星状细胞的免疫抑制活性,增强免疫反应。方法:用熊胆水溶液给C57BL/6(B6;H2b)小鼠灌胃4周,通过Percoll密度梯度离心法从小鼠肝脏分离出肝星状细胞,用结蛋白和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)免疫组化法检测HSCs表达,用流式细胞仪检测肝星状细胞表面分子,用Brdu细胞增殖检测试剂盒检测T细胞增殖,以及用蛋白芯片检测肝星状细胞分泌的细胞因子。结果:熊胆能够减少HSCs的表达,下调肝星状细胞表面分子、影响肝星状细胞对多种细胞因子的分泌、逆转HSCs对T细胞增值反应的抑制作用。结论:熊胆能够抑制肝星状细胞的免疫抑制活性,增强免疫反应。     

活化的肝星状细胞促进调节性T细胞的表达

目的 越来越多的研究证实,活化的肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)具有免疫抑制功能.本研究观察了HSCs对T细胞介导的适应性免疫应答的影响及其与调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的关系.方法 分离培养小鼠HSCs,运用混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR),体外观察活化的HSCs对T细胞增殖和Treg细胞的影响.结果 活化的HSCs能导致树突状细胞(dendritic cells,DCs)介导的适应性免疫应答中T细胞的低反应性:抑制T细胞的增殖,同时诱导Treg细胞的表达.结论 活化的HSCs能通过促进Treg细胞表达而诱导适应性免疫应答中T细胞的活化无能,促进免疫耐受.     

误诊为腹腔间质瘤的嗜铬细胞瘤手术切除1例

嗜铬细胞瘤是来源于肾上腺髓质和交感神经系统的嗜铬组织的肿瘤,其85％位于肾上腺,位于肾上腺外的约为15％。现将我们诊断为腹腔间质瘤的1例嗜铬细胞瘤成功手术切除的经验总结,给术前未考虑到嗜铬细胞瘤而术中偶然发现的嗜铬细胞瘤的手术处理提供一些参考。     

熊胆对肝星状细胞免疫学特性的影响

目的通过研究熊胆对肝星状细胞免疫学特性的影响,以便从免疫学角度探讨熊胆与肝癌等多种慢性肝病的作用机制。方法从C57BL/6(B6;H2b)小鼠肝脏分离出肝星状细胞,加入熊胆水溶液处理3天后,用流式细胞仪检测肝星状细胞表面分子的表达、用蛋白芯片(mouse cytokine array panel)检测肝星状细胞分泌的细胞因子,以及用Brdu细胞增殖检测试剂盒检测T细胞增殖。结果熊胆下调了肝星状细胞表面分子的表达、影响了肝星状细胞对多种细胞因子的分泌、熊胆处理过的肝星状细胞对T细胞增殖有促进作用。结论熊胆能抑制肝星状细胞的免疫学特性,增强免疫反应,这可能是熊胆与肝癌等多种慢性肝病的作用机制之一。