人细小病毒B19主要抗原片段的表达及临床初步应用

我国临床人细小病毒B19(B19)感染的诊断和流行病学调查以及献血员筛查等方面的工作尚未广泛开展,原因之一是受诊断试剂和方法的局限.目前国际上商业B19抗体诊断试剂盒均以重组抗原为基础.本研究获取能表达B19结构蛋白VP1独特区和VP1/VP2共同区主要抗原片段,建立改良酶联免疫吸附法(ELISA),检测发病期患者和献血员血清中抗B19-IgM,并与德国IBL试剂盒平行比较.     

抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体的研制

目的应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的单克隆抗体。方法用脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原免疫雌性Balbc小鼠,取其致敏脾脏淋巴细胞与SP20小鼠骨髓瘤细胞融合。间接ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。检测McAb效价、抗体亚类和杂交瘤细胞核型。结果获得4株阳性杂瘤细胞株,选择一株制备腹水,ELISA效价为1∶2.4×106,中和试验效价1∶1.3×104,蛋白浓度为27.2mgmL。McAb与Ⅱ型Sabin株C抗原(ⅡC)、Ⅰ型Sabin株及Ⅲ型Phizer株D抗原(ⅠD、ⅢD)不发生交叉反应,具有高度特异性。结论成功的制备了针对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的McAb,为进一步研究IPV效力检测奠定了基础。     

S／D法处理凝血因子浓缩物类制品的病毒灭活验证

以水泡性口炎病毒(VSV)为指示病毒,验证应用有机溶剂／去污剂(简称S／D)法灭活血液制品中病毒的生产工艺．结果表明S／D法对于包膜病毒有显的灭活效果。     

人巨细胞病毒低基质蛋白pp65亲水性片段的克隆与表达

目的 为建立人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染检测方法，表达HCMV早期复制的标志物pp65蛋白，以制备相应的抗体。方法 将pp65全基因和其亲水性强、有抗原代表性的片段（pp65 hp）分别克隆到表达载体pET22b（＋）中诱导表达，并以免疫印迹考察重组蛋白的抗原性。结果 重组rpp65全蛋白表达量低于全菌体蛋白的5％，而rp65 hp蛋白获得高效表达，约为全菌体蛋白的40％，并与HCMV IgG抗体特异性结合。结论 亲水性pp65 hp片段有较好的抗原性，可以制备相应的抗体，来检测HCMV活动性感染。     

几种血液制品病毒灭活工艺的验证和评价

自1994年开始,我国各血液制品生产厂家均在血液制品病毒灭活工艺方面进行了研究和探索.笔者对不同厂家、不同制品和不同工艺进行了病毒灭活效果的验证,现对这些结果做一总结和评价. 1 材料与方法     

癌症患儿化疗前接种水痘减毒活疫苗的安全性和保护力

癌症患儿如感染水痘,死亡率为7%。在急性成淋巴细胞白血病患儿中,水痘带状疱疹病毒(VZV)肺炎的发生率为32%,死亡率为25%。癌症患儿的肝炎、胰腺炎和血小板减少症也与严重的播散性水痘感染有关。因此,对免疫抑制的儿童早期预防水痘是非常有用的。本文旨在评价对无水痘史的癌症患儿,于化疗前给予水痘减毒活疫苗(LAVV)的安全性和预防作用。1985年7月～1987年2月对46例患有不同恶性肿瘤且无水痘史的儿童(男26例,女20例,年龄7月龄～11岁)进行了研究。其中32例皮下接种550噬斑形成单位(PFU)的LAVV     

国产冻干水痘减毒活疫苗免疫效果观察

目的：观察国产冻干水痘减毒活疫苗的免疫效果。方法：在广西桂林市漳阳县和吉林省和龙市选择1—6岁健康易感儿童接种国产冻干水痘减毒活疫苗，进行安全性、免疫原性观察；同时，选择与疫苗接种密切接触的非接种进行疫苗株传播性观察。结果：410名观察对象接种水痘疫苗后无明显副反应。检测有效血清271份，血清抗体阳转率为98．89％，GMT为1:36.83％。该疫苗株接种不存在传播性。结论：接种国产冻干水痘减毒活疫苗安全、有效。     

人巨细胞病毒糖蛋白gp52的原核表达及初步应用

目的探讨以表达人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）中抗原性较强的蛋白片断代替全病毒抗原建立ＨＣＭＶＩｇＭ检测试剂盒的可行性。方法以聚合酶链反应扩增ＨＣＭＶ聚合酶辅助糖蛋白（ｇｐ５２）的有效抗原基因序列，导入带有高效转录启动子ｐＴｒｃ和６个串联组氨酸的原核表达载体ｐＴｒｃＨｉｓ，在大肠杆菌中表达，经金属鏊和亲和层析（ＩＭＡＣ）法纯化后，用酶联免疫吸附法检测新生儿血清，并与全病毒抗原检测进行比较。结果重组ｇｐ５２占大肠杆菌总蛋白的４０％，ＩＭＡＣ纯化后纯度达９４．５％。在４３份疑似ＨＣＭＶ感染的新生儿血清中阳性检出率为５１．２％，而用全病毒抗原检测阳性率只有２５．９％。结论ＨＣＭＶｇｐ５２蛋白具有良好的抗原性，可用于建立新一代的检测试剂盒。     

人巨细胞病毒gp52蛋白与pp65蛋白融合表达及初步应用

为提高HCMVIgM抗体检测试剂盒的敏感性及特异眭．本研究重组表达了HCMV糖蛋白gp52与磷蛋白DD65的嵌台抗原。从病毒及质粒中分别扩增gp52(氨基酸181～333,f1)及pp65(氨基酸261～373,f2)两个片段．以不同酶切位点插人到pTrcHi B载体上,筛选正确的重组质粒并在太肠杆菌中诱导表达融合蛋白rp52～65。SDE-PAGE结果显示表达蛋白占菌体总蛋白的30％,卧包涵体的形式存在,分子量为35000。以金属鳌合亲和屡析(IMAC)及分子筛方法纯化表达蛋白,纯度达到96％,回收率为252％。以间接法检测HCMV IgM阳性血清,敏感性达到904％(19／21),证明此融合蛋白具有良好的抗原性,可作为HCMV IgM抗体检测试剂盒的包被抗原。