杆状病毒介导LacZ基因转染体外培养的人虹膜色素上皮细胞

目的：研究重组杆状病毒(baculovinus)载体介导β—半乳糖苷酶基因(LacZ)对体外培养虹膜色素上皮(IPE)细胞的转染和表达情况。方法：将质粒pCMV—β中的CMV—LacZ表达盒插入杆状病毒表达栽体pFast BacI的Eco RI／Hind Ⅲ位点，构建重组质粒pBac—β，并利用Bac—to—Bac表达系统在Sf9细胞中产生出重组杆状病毒BV—β。将MOI为200的BV—β感染经酶消化加显微法分离培养的IPE细胞，24h后进行X-gal染色。在显微镜下观察IPE中LacZ表达阳性的情况，记录阳性细胞所占的百分比。结果：限制性酶切分析及测序结果表明，我们已成功构建表达质粒pBac—β及重组杆状病毒BV—β。X-gal染色证实杆状病毒介导LacZ在细胞中的表达呈蓝色，弥漫于整个胞浆。感染后24h时表达阳性率达85％。结论：重组杆状病毒可有效介导报告基因在体外培养的IPE细胞中表达，为利用杆状病毒构建可供移植的基因工程化虹膜色素上皮细胞提供了实验依据。     

线粒体DNA继发突变对Leber遗传性视神经病变的影响

Leber遗传性视神经病变是一种多发于青壮年的母系遗传性疾病,可导致双眼严重的急性无痛性、且一般是永久性的双侧中心视野缺失.3个线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)原发突变ND4 G11778A、ND1 G3460A和N06 T14484C是其致病的主要因素,但家族问及家族内不同成员之间的表型差异表明存在其他的修饰因子,包括核及线粒体遗传修饰因子、环境因素.本综述主要阐述mtDNA继发突变对LHON表型表达的影响.     

中国Leber遗传性视神经病变G11696A突变两个家系分析

目的对两个中国Leber遗传性视神经病变(Leber’shereditary optic neuropathy,LHON)家系的临床和分子遗传学特征进行分析。方法眼科临床检查发现在这两个家系中只有先证者1人出现视力障碍,发病年龄分别为10岁和17岁。对这两个家系先证者使用24对有部分重叠的引物进行线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)全序列扩增分析。结果没有发现mtDNAG11778A、G3460A和T14484C3个常见的突变位点,而发现了与LHON相关的ND4G11196A同质性突变位点的存在,在167名正常对照只发现1例G11696A突变。结论线粒体DNA全序列分析发现两个家系呈现独特的mtDNA多态性,都属于东亚单体型D4。不完全外显率和正常对照频率(1/167)表明G11696A突变本身不足以导致LHON的发生,说明其它因素在这两个LHON家系的表型表达中也起一定的作用。在这些家系mtDNA中缺乏影响重要功能突变位点的存在,排除了线粒体背景对LHON临床表型的影响。因此,核修饰基因、环境因素可能对两个中国G11696A突变家系的外显率和发病严重程度起促进作用。     

线粒体DNA继发突变对Leber遗传性视神经病变的影响

Leber遗传性视神经病变是一种多发于青壮年的母系遗传性疾病,可导致双眼严重的急性无痛性、且一般是永久性的双侧中心视野缺失.3个线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)原发突变ND4 G11778A、ND1 G3460A和N06 T14484C是其致病的主要因素,但家族问及家族内不同成员之间的表型差异表明存在其他的修饰因子,包括核及线粒体遗传修饰因子、环境因素.本综述主要阐述mtDNA继发突变对LHON表型表达的影响.     

应用神经轴突示踪技术研究人类视觉神经通路胚胎发育

目的 :应用神经轴突示踪方法 ,研究人类视觉神经通路在胚胎期 12w时的发育情况。方法 :取 12w胎龄的胚胎 ,浸泡在 4 %的甲醛缓冲液中固定后 ,分别在视束、上丘臂和视皮质下植入DiI染料 (DiI,1,1’ dioctadecyl 3,3,3’ ,3’ tetramethylin docarbocyanineperchlorate)。于室温下放置 4w ,待DiI晶体充分扩散后 ,根据神经轴突方向切片 ,通过共焦激光扫描显微镜观察并记录结果。结果 :大体标本观察可见到 ,视网膜神经纤维投射已到达外侧膝状体、上丘。切片观察发现 :外侧膝状体处尚未出现分层现象 ;上丘处 ,来自视网膜的神经纤维位于上丘臂的背侧 ;视皮质下已存在板层结构 ,板层内神经元呈多种形态。结论 :通过神经轴突示踪技术发现 ,12w时视网膜的神经纤维投射已经到达外侧膝状体和上丘 ,视皮质下存在板层结构。这说明人类视觉神经通路发育存在“等待期”。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β在实验性近视中的研究进展

bFGF(碱性成纤维细胞生长因子，basic fibmblast growth factor)和TGF-β(转化生长因子-β，transfbmling growth factor-β)是体内分布广泛、具有多种生物学功能的两种细胞因子。近年的研究发现，实验性近视发生发展过程中视网膜及巩膜的bFGF和TGF-β含量发生改变，而外源性的bFGF和TGF-β也可影响近视的形成，表明bFGF和TGF-β与近视具有密切的关系。其可能的机制为：在异常的视觉环境中，视网膜上的hFGF和TGF-β含量发生变化，作为信号，传递到巩膜，进而影响巩膜细胞的增殖及细胞外基质的降解，使巩膜重新塑形，眼轴过度延长，形成近视。本研究就这两种生长因子和近视的相关研究做一论述。     

人脐血干细胞移植术治疗肝炎后肝硬化的临床应用与观察

目的观察人脐血干细胞移植术对肝炎后肝硬化失代偿期患者的治疗效果及分析。方法使用产妇分娩后的脐带血,经一系列处理后得到脐血干细胞并于24 h之内经股动脉由肝固有动脉输注入肝硬化患者的肝脏组织内。结果所有患者术后精神、腹水、食欲等相关临床症状及黄疸、腹水等体征均有所改善,肝功能检查白蛋白、总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血氨指标均已达到正常标准,与术前相比可见明显好转（P〈0.05）。结论术后患者临床症状得到明显的改善,相关生化指标有明显好转趋势,说明本治疗方法有效。     

甲状腺相关性眼病研究治疗新进展

甲状腺相关性眼病(TAO)是眼眶病中最常见的疾病,大部分与甲状腺疾病相关,属于自身免疫性疾病。部分TAO有自愈倾向,尽管大多数TAO球后组织都有特征性的改变,但临床上只有30%～50%的患者出现明显眼部症状,3%～5%的患者视力累及。TAO具体的发病机制尚未明确。目前认为细胞因子,特别是TNF-α,是疾病主要的调节因子。而眼眶内成纤维细胞抗原的表达,是发病的关键因素。经过长期的临床研究,根据疾病活动性和严重程度,已经总结出相应有效的治疗方案。通过免疫学、病理学、分子生物学的研究,可以进一步明确TAO的发病机制。为指导各种有效新药物的开发,找到更合理、更有效的治疗开辟道路。     

葡萄膜黑色素细胞体外培养的初步报告

人眼葡萄膜黑色素细胞和很多眼病有关 ,体外培养黑色素细胞 ,对于观察、了解黑色素细胞的生理以及研究其在眼科疾病和屈光不正、尤其在近视的发生机制方面有着重要的意义。虽然胡诞宁等人已于 1993年成功培养人眼葡萄膜黑色素细胞[1,2 ] ,但文献迄今上尚未见黄种人黑色素细胞培