转化胆甾醇发酵液中4AD、ADD及胆甾醇的气相色谱法测定

报道了一个同时测定转化胆甾醇发酵液中雄甾-4烯-3,17二酮(4AD)、雄甾-1,4二烯-3,17二酮(ADD)和胆甾醇的气相色谱内标法。使用FID检测器。玻璃柱长1.6m,内径3mm,内装涂有2％OV-17的60～80目Cromosorb W(AW-DMOS)担体。进样口温度285℃,柱温275℃。以氮作载气,流量50ml/min,用丙酸睾丸酮作内标物。在实验条件下,发酵液中各主要成分和杂质分离良好,便于定量。结果表明,4AD、ADD和胆甾醇的浓度与Ai/As的线性范围:4AD为0.1～1.8mg/ml(γ=0.9993);ADD为0.1～1.8mg/ml(γ=0.9994);胆甾醇为0.2-3.6mg/ml(γ=0.9991)。平均回收率依次为97.91±2.34(SD)％,95.88±1.21(SD)％,100.3±1.93(SD)％。变异系数分别为2.39％、1.26％、1.92％。     

人参皂苷Rd的研究进展

人参皂苷Rd是二醇型人参皂苷在人体肠道内的主要代谢产物之一,具有广泛的生物活性.对心脑血管、神经系统、免疫系统等作用独特;在镇痛、神经保护作用方面,人参皂苷Rd相对于其他单体皂苷也较强.人参皂苷Rd的结构复杂,化学合成至今尚未成功,需从植物药中提取以满足医疗和科研的需要,但因植物中人参皂苷Rd的量较低,从植物中提取的方法 难以满足需要.因此,国内外在有效获取人参皂苷Rd方面也进行了大量研究.对人参皂苷Rd的生物活性、制备方法 等研究进行了详细综述.     

酶的动力学常数Km和的电脑计算程序及其在黑根霉11α-羟化酶上的应用

一、引言众所周知,研究酶反应的速度规律即酶反应动力学是酶研究中的主要内容之一,又当酶或细胞被固定化以后,考虑到酶旦白质的结构发生的变化,以及由于载体的影响而使酶和底物的亲和力发生改变,因此对固定化酶的动力学常数的测定就更具有意义。     

热带假丝酵母产辅酶Q10发酵条件的研究

目的以热带假丝酵母作为辅酶Q10的生产菌,研究不同的发酵条件对辅酶Q10产量的影响,以获得比较高的辅酶Q10产量。方法用酒精提取,用紫外分光光度法检测。结果葡萄糖是较好的碳源,大豆蛋白胨是较好的氮源,磷酸盐不同的比例对细胞生长及辅酶Q10合成的影响较显著,添加硫酸锰对辅酶Q10的合成有一定的促进作用。发酵初始pH8．0,接种量为4．0％,250mL三角瓶装液量为40mL,发酵时间为72h,葡萄糖4．0％,大豆蛋白胨5．0％,辅酶Q10产量达到70ug·mL^-1。结论热带假丝酵母作为高产辅酶Q10菌种具有较好的实用性以及进一步提高产量的潜力和广阔的应用前景。     

核苷类抗病毒药物研究策略

世界卫生组织调查结果表明 :人类传染病中由病毒引起的病症逐年增多[1] ,其主要原因在于病毒寄宿在活体细胞内复制繁殖 ,不仅难以被杀灭 ,而且易突变 ,从而会反复侵犯肌体并导致传播。病毒可致持续性感染 ,在人体表现为病毒潜伏或慢性感染。病毒感染的疾病种类多 ,危害大 ,如肝炎、获得性免疫缺陷病 (AIDS)等 ,严重危害人类的健康。虽然免疫学的发展为我们提供了有效防治某些病毒感染的方法 ,但由于许多病毒没有或难以找到合适的疫苗 ,新病毒株的不断被发现 ,病毒的变异较快 ,使原疫苗失败及与肿瘤相关的病毒不宜采用免疫方法防治等原因 ,…     

那西肽产生菌S.actuosus选育及发酵条件的优化

目的　提高那西肽产量。方法　介绍那西肽产生菌活跃链霉菌S .actuosus(Z10 ) 的诱变育种 ,诱变的方法有紫外线、亚硝基胍及两者的联合诱变 ,并对高发酵单位菌种优化发酵条件和测定其生化曲线。结果　通过紫外线及亚硝基胍联合诱变获得高产菌株Z12 ,该菌种进行 4次传代试验显示稳定 ,经发酵条件优化后在培养基中添加 2 %黄豆粉 ,0 .0 1%硫酸锰可以提高那西肽产量。菌种Z12 相对于出发菌种Z10 提高那西肽产量达 5 8.9%。结论　通过紫外线及亚硝基胍联合诱变可以筛选到高活力菌种     

不同构建策略对D-氨基酸氧化酶表达的影响及发酵调节

目的 构建不含编码β-内酰胺酶编码基因的D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase,DAAO)工程菌,对不同构建策略构建的重组菌进行发酵调节研究.方法 采用分子生物学手段,利用不同的策略、不同的毕赤酵母宿主菌,构建DAAO工程菌;利用微生物发酵和调节手段,对工程菌的发酵条件进行优化.结果 获得了表型不同的3株重组菌(Muts的PDK13和PDGA10,Mut 的PDG27),它们的最佳生长条件基本相似,诱导表达条件却不相同,在Basal salts培养基内,当生长时间为36 h,诱导培养基起始pH为6.0、甲醇浓度为0.5%时,最有利于DAAO表达.在菌体密度相同的条件下,Mut 表型(PDG27)甲醇代谢快,诱导24 h,DAAO活力达到最高;Muts型(PDK13和PDGA10)甲醇代谢慢,诱导36 h,DAAO活力达最高;通气量一定时,菌体密度增加,DAAO表达量增加,菌体增加到一定程度表达量反而下降,表明通气量应随菌体密度的增大而增加.结论 Muts型重组菌对通气量要求低且更有利于高密度发酵.     

非核糖体含硫多肽类抗生素生物合成基因的研究进展

非核糖体含硫多肽类（non-ribosomal thiopeptide）抗生素是多肽类抗生素中的一个重要家族,包括硫链茵丝肽（Thiostrepton）、那西肽（Nosihepted）、短杆菌肽S（Gramicidin S）和环孢霉素（Cyclosporine）等。     

基因工程酵母菌来源的D-氨基酸氧化酶分离纯化

目的以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。方法采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经Sephacryl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12000U／mL。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50％硫酸铵沉淀酶回收率可达85％以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达90％,SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40％。     

D-氨基酸氧化酶在毕赤酵母中的表达及快速纯化

目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶（DAAO）的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸（GL-7ACA）。方法通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞,利用PCR方法筛选阳性转化子,再经甲醇诱导筛选出高表达菌。结果高表达重组菌（PHD12）摇瓶发酵单位达到2000IU／L,发酵罐内达到22500IU／L。并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化,以60％的总收率获得纯化产物。纯化产物保持良好的转化CPC-Na活性。结论利用基因工程表达组氨酸标记蛋白,可简化基因工程的下游工序。