截短的丙型肝炎病毒核心区基因的克隆和表达

目的  克隆和表达截短的丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）核心区基因,为制备HCV核心区抗体准备抗原。方法  根据软件分析选取带有优势抗原表位的HCV核心区多肽,找出对应DNA序列,逆转录PCR扩增目的基因,并将其克隆到原核表达载体中进行诱导表达。表达的目的蛋白纯化后用间接ELISA法检测免疫活性。结果  获得了序列正确的HCV目的基因片段。表达的目的蛋白为可溶性蛋白,能被很好地纯化。使用该纯化蛋白检测各种样本,结果HCV阴性样本的平均吸光度（A）值为0.081,HCV阳性样本与阴性对照的A值之比均>2.1,乙型肝炎和梅毒阳性样本的A值都在0.101以下。结论 成功地克隆和表达了HCV核心区小片段基因,获得了具有良好抗原性的截短HCV核心区多肽。     

丙型肝炎核心抗原酶联免疫检测试剂的临床应用

目的评价1种国产丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)酶联免疫检测试剂的敏感性以及在临床应用效果。方法采用1种酶联免疫试剂盒(ELISA)检测HCV游离核心抗原,分别对2808名献血者、随机抽取的1099名门诊病人及244名抗-HCV阳性者血清作HCV-cAg检测,再进一步对献血者、门诊病人HCV-cAg阳性血清作HCV-RNA和抗-HCV检测,对244名抗-HCV阳性血清作HCV-RNA检测。结果献血者2808份血清,经HCV-cAg试剂检测出HCV-cAg阳性1例,此例血清HCV-RNA亦为阳性;随机抽取的1099份门诊病人血清标本,检测出HCV-cAg阳性8份,其中抗-HCV阳性5份(5/8),HCV-RNA阳性5份(5/6,有2份HCV-cAg阳性标本因血清不足未作RT-PCR和FQ-PCR);244名抗-HCV阳性的血清中检测出HCV-cAg阳性52份,HCV-RNA阳性49份(49/52),2种方法符合率为94.23%;另外,检测为HCV-cAg阴性的192份标本中,HCV-RNA阳性68份(68/192)。结论该HCV-cAg检测试剂在不同的临床样本中具有很好的应用价值。     

丙型肝炎病毒总核心抗原测定方法及临床应用

目的建立丙型肝炎病毒总核心抗原（总HCV-cAg）酶联免疫测定方法,并对相关的临床样品进行测定。方法通过对样品进行裂解处理,采用酶联免疫试剂盒（ELISA）检测总HCV-cAg,对201名抗-HCV阳性者血清进行总HCV—cAg检测,同时进一步作HCV-RNA检测,其中176例采用荧光定量PCR（FQ—PCR）,25例采用逆转录PCR（RT—PCR）检测HCV．RNA。结果共检测201份血清标本,其中经PCR测定HCVRNA阳性88人份,阳性率43．8％;总HCV—cAg阳性71份,阳性率35．3％。经统计学分析,总HCV—cAg检测和HCVRNA检测的阳性率的差异无统计学意义。结论建立的总HCV—cAg酶联免疫测定方法适合临床应用,尤其适合在缺少RT-PCR或荧光定量PCR的中小医院使用。