丙型肝炎病毒总抗原检测用于病程监测的研究

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)总抗原检测方法在丙肝病程监测方面的临床意义。方法对来本院就诊的40位丙肝患者于治疗前、治疗1个月时、治疗3个月时、治疗6个月(停药)时,停药6个月后等不同时期进行采血,收集血清或血浆标本,用抗-HCV检测试剂盒(酶联免疫法)、HCV核酸(RNA)扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒、HCV总抗原检测试剂盒(酶联免疫法)进行检测。结果从患者确认感染丙肝到治疗结束抗-HCV检测均呈阳性,而HCV-RNA检测和HCV总抗原检测会随着病程的变化而变化。本次共检测了189例标本(40位患者不同时期标本总例数),其中HCV-RNA阳性51例,该51例阳性标本中,HCV总抗原检测阳性44例,阳性检出率为86.27%;138例HCV-RNA阴性标本,有3例HCV总抗原检测为阳性(2.2%)。2种方法比较,差异无统计学意义(χ2=1.6,P>0.05)。HCV总抗原检测其OD值会随着病程的变化而相应改变,可以较好地反应丙肝患者的病程状况。结论 HCV总抗原检测方法在丙肝病程监测方面具有很好的临床意义,适合在缺少荧光定量PCR检测能力的中小医院使用,可在一定程度上替代HCV-RNA检测,对抗-HCV阳性患者作进一步的验证检测或补充,更好地应用于丙肝患者的病程监测。     

截短的丙型肝炎病毒核心区基因的克隆和表达

目的  克隆和表达截短的丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）核心区基因,为制备HCV核心区抗体准备抗原。方法  根据软件分析选取带有优势抗原表位的HCV核心区多肽,找出对应DNA序列,逆转录PCR扩增目的基因,并将其克隆到原核表达载体中进行诱导表达。表达的目的蛋白纯化后用间接ELISA法检测免疫活性。结果  获得了序列正确的HCV目的基因片段。表达的目的蛋白为可溶性蛋白,能被很好地纯化。使用该纯化蛋白检测各种样本,结果HCV阴性样本的平均吸光度（A）值为0.081,HCV阳性样本与阴性对照的A值之比均>2.1,乙型肝炎和梅毒阳性样本的A值都在0.101以下。结论 成功地克隆和表达了HCV核心区小片段基因,获得了具有良好抗原性的截短HCV核心区多肽。     

丙型肝炎病毒核心区多肽的抗原表位分析和原核表达

目的 分析HCV核心区多肽的抗原表位,选择具有优势抗原表位的多肽用原核表达载体表达,并获得该表达载体的稳定表达菌株. 方法 根据软件分析选取带有优势抗原表位的HCV核心区多肽,找出对应DNA序列,逆转录PCR扩增目的基因,克隆到原核表达载体中进行诱导表达.表达的目的蛋白用His Bind Columns纯化,用ELISA法检测其免疫活性. 结果 获得了序列正确的HCV-core基因和表达良好的该基因原核表达载体pET-28a-core,该表达载体表达的目的蛋白可被很好地纯化并具有良好的HCV抗原活性. 结论 成功地重组了HCV核心区蛋白,获得了HCV抗原性良好的HCV核心区抗原.