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1.
目的:采用条件性基因敲除技术构建造血系统间隙连接蛋白43(Cx43)基因敲除(Cx43~(-/-))小鼠模型,并探讨Cx43在维持造血细胞自我更新及功能稳定中的作用。方法:将引进的2对转基因小鼠Cx43 loxP/loxP和Lyz-Cre/+杂交,选取F1雌性子代Cx43 loxP/-_Lyz-Cre/+与雄性Cx43 loxP/loxP合笼回配,提取所获得子代小鼠鼠尾组织基因组DNA,采用PCR方法鉴定小鼠基因型,RT-PCR方法筛选Cx43~(-/-)小鼠,同时分析小鼠不同器官中Cx43基因的表达差异;该类小鼠经5-氟尿嘧啶(5-FU;125 mg/kg)处理,在化疗前及化疗后第5、10和15天经眼球取血分析其血象变化。Cx43~(-/-)及Cx43~(+/+)小鼠予7.5 Gy(~(60)Co-γ)的致死量照射,剂量率1 Gy/min,照射后6 h分别给予事先准备就序的骨髓细胞,每只3×10~6细胞于尾静脉注入,2周后处死小鼠检测造血是否重建:分离股骨切片后,收集骨髓细胞进行细胞表型分析(选用的单抗为CD45R、Gr-1、CD4、 CD8a、TCRαβ、Mac-1、抗sIgM、TER119、Sca-1及CD117);同时进行体外造血细胞集落实验观察造血细胞的体外增殖能力。结果:本研究通过2种转基因小鼠间杂交和回交,成功获得造血系统选择性Cx43基因敲除小鼠;该类小鼠骨髓及外周血细胞无Cx43表达,参与造血的组织,如肝脏和脾脏中Cx43表达也显著下调(P0.01),而心脏和肾脏的Cx43表达则无影响,小鼠成年后外周血象分析并无明显异常,但应急代偿能力下降,经5-FU处理后,其造血功能恢复显著减缓,处理15 d后,Cx43~(+/+)小鼠造血功能已接近正常水平,而Cx43~(-/-)小鼠仍无明显的恢复迹象,血红蛋白、白细胞及血小板仍处低位,2者差别有统计学显著性(P0.01);体外集落试验也证实Cx43~(-/-)小鼠造血干/祖细胞的增殖能力下降,其CFU-GM或CFU-E集落数均明显少于Cx43~(+/+)小鼠(P0.01),但流式细胞术结果显示,Cx43~(-/-)小鼠骨髓中Lin~-/c-Kit~+/Sca-1~+细胞亚群数量与Cx43~(+/+)小鼠相比差异并无统计学显著性;Cx43~(-/-)小鼠在化疗或移植后其骨髓造血功能重建均延迟,且化疗15 d后骨髓切片及涂片均证实其骨髓中造血细胞增生程度明显降低,脂肪组织显著增多,而且T、B细胞发育也有异常。此外,其外周血中CD4~+CD8~+细胞比例比野生型小鼠增多(P0.05),但CD4~+T细胞显著减少(P0.01),尤其是TCRαβ亚群细胞减少最为明显(P0.01)。同样,Cx43~(-/-)小鼠外周血中CD45R~+sIgM~-细胞亚群比例与野生型小鼠相比显著减少(P0.01)。结论:骨髓中Cx43基因表达在造血干/祖细胞发育(尤其是应急状态时)具重要作用,敲除Cx43基因后造血干/祖细胞增殖减缓,造血及免疫重建功能受损。 相似文献
2.
3.
目的探讨私立学校初中新生的情绪状况及性别差异,为开展心理健康教育提供依据.方法采用Zung氏焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS),对青岛市某私立学校初一新生228人进行整群抽样测查,匹配市区公立学校初一新生239人作同期对照,并做统计分析.结果观察组有15.79%处于焦虑状态(女生检出率较高),高于对照组(9.21%),差异有显著性(χ2=4.65,P<0.05);观察组SAS均分高于对照组及常模,其中独生子女SAS均分高于对照组(P<0.05).观察组中23.25%处于抑郁状态(男生检出率高),明显低于对照组(32.22%)(χ2=4.67,P<0.05),但SDS均分不低于对照组.焦虑和抑郁同时存在率也以观察组较高(12.28%),与对照组差异有显著性(χ2=4.27,P<0.05).结论私立学校初一新生存在以女生为主的较高焦虑检出率、以独生子女为主的较高焦虑水平以及以男生为主的抑郁检出率和较高抑郁水平,社会、学校和家庭要根据中学生的年龄和性别特点开展心理健康教育工作. 相似文献
4.
5.
目的:观察高压氧联合利伐沙班在预防断指再植术后血管危象方面的效果。方法选取2009年11月-2011年11月本院收治的81例断指再植患者,将其随机分为对照组(44例)与研究组(37例)。对照组44例术后采取肝素钠、山莨菪碱预防术后血管危象的发生,研究组37例术后采用高压氧联合利伐沙班预防血管危象。结果研究组的血管危象发生率低于对照组。结论高压氧联合利伐沙班能够减少断指再植术后血管危象的发生,增加断指再植的成活率。 相似文献
6.
慈雪萍周东明杨勇等 《中华临床医师杂志(电子版)》2014,(2):239-243
目的结肠癌的发生与结肠慢性炎症密切相关。TIPE2(tumor necrosis factor-α-induced protein 8-like 2)是一种炎症和免疫平衡的调节因子。本实验旨在构建表达TIPE2的腺病毒载体,并初步观察其对结肠癌细胞增殖的影响。方法将TIPE2-cDNA定向克隆至转移质粒pShuttle-CMV多克隆位点,然后与病毒骨架质粒pAdc68重组,在HEK293细胞中包装成完整病毒并复制扩增、纯化,获得表达TIPE2的重组腺病毒载体,命名为Adc68-TIPE2。实时荧光定量PCR及Western blot检测病毒感染后TIPE2在结肠癌细胞系HT29及SW620中的表达,MTT法检测TIPE2对结肠癌细胞增殖的影响。结果重组腺病毒载体Adc68-TIPE2构建成功。病毒感染后TIPE2可在结肠癌细胞系HT29及SW620中高效表达。以不同浓度Adc68-TIPE2(分别为108 vp/ml、109 vp/ml、1010 vp/ml)感染HT29及SW620细胞48 h后,HT29细胞的增殖率分别为93%、71%、14%。与空载体相比差异有统计学意义(P<0.05);SW620增殖率分别为89%、53%、10%。与空载体相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功构建表达TIPE2的腺病毒载体Adc68-TIPE2,Adc68-TIPE2可抑制结肠癌细胞增殖。 相似文献
7.
目的对SD大鼠天然抗日本血吸虫感染机理进行初步研究。方法用免疫印迹技术分析正常SD大鼠血清(NRS)、感染SD大鼠血清(IRS)对日本血吸虫成虫可溶性抗原(AWA)的识别;并用间接ELISA方法检测NRS抗AWA、日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)、日本血吸虫可溶性肺期童虫抗原(SSA)的IgG抗体及亚类;并观察了NRS、去补体血清对体外培养的童虫的杀伤作用。结果NRS可识别AWA中的75、47、34.5和23ku的抗原分子.IRS则主要识别分子质量为62~86、54.7、47、34.5、30.3和23ku的特异性条带;NRS抗AWA、SEA、SSA特异性IgG1抗体水平明显高于正常昆明鼠血清中相应的抗体水平,而IgG2b则无明显增高;SD大鼠去补体血清在体外对童虫的杀伤作用低于正常血清,培养48h童虫的死亡率分别为41.0%和76.2%。结论SD大鼠血清中存在天然抗日本血吸虫感染的抗体,此抗体在SD大鼠血清的杀伤机制中起重要作用。 相似文献
8.
用噬菌体多肽库筛选日本血吸虫表膜抗原的模拟表位 总被引:4,自引:1,他引:4
为探索可用于诊断的模拟表膜抗原。采用纯化的兔抗表膜抗原IgG作探针 ,免疫筛选噬菌体随机十二肽库 ,经 3轮生物淘洗后 ,随机挑选 30个噬菌体克隆 ,用ELISA检测其与筛选抗体的特异性结合 ,选择两个阳性克隆进行DNA序列测定 ,并用斑点ELISA比较检测正常人和日本血吸虫病患者血清各 10份。结果显示 ,随机挑选的 30个克隆中有 9个噬菌体克隆与筛选的抗体有特异性的结合反应。DNA测序结果显示 ,两个阳性噬菌体克隆 (携带的抗原表位 )所演绎的氨基酸序列与GenBank已知的氨基酸序列无同源性。斑点ELISA结果显示两个抗原表位可被血吸虫病患者血清呈特异性识别 相似文献
9.
目的 :为了解战备坑道内的储水水质 ,确保战时饮用水的安全、卫生。方法 :对沿海某海岛自然通风坑道的 8个水井储水的感官性状、毒理学、细菌学指标分别进行了检测评价。结果 :(1)感官性状指标 :8个坑道的储水水样颜色均 <15度 ,浑浊度 <3度 ,无异臭及异味 ;(2 )毒理学指标 :氟化物在卫生标准范围内 ,未检出氰化物、砷、汞及 6价铬等 ;(3)细菌学指标 :有 2个坑道水样细菌学总数超标 ,菌落数 >10 0个 /ml,其余 6个水样合格 ,合格率 75 %;有 5个水样大肠菌群 >3个 /L ,仅有 3个水样合格 ,合格率 37 5 %;(4 )总评价 :根据生活饮用水大肠菌群指标要求 ,有 4个水源属一级水源水 ,水质良好 ,1个坑道水质超过二级 ,不宜作为生活饮用水水源。结论 :坑道储水的主要问题是微生物的污染 ,其原因主要是水源注入水及储存期间未采取有效的消毒措施 ,因此 ,对坑道水源要定期消毒和检测 ,加强监督。 相似文献
10.
南京夏秋季海产品中副溶血性弧菌的污染监测及其毒力与耐药性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的了解南京市夏秋季海产品中副溶血性弧菌(Vibro parahaemolyticus,VP)的污染状况以及分离菌株的毒力与药物敏感性。方法自农贸市场与饭店采取海产品样品,参考国标法(GB/T4789-2008)对样品进行检测,用科玛嘉弧菌显色培养基进行分离培养,对紫红色菌落进行PCR鉴定,对分离菌株进行神奈川试验与药物敏感试验。结果在296份样品中共检出副溶血性弧菌237株,检出率为80.1%,其中冷冻与保鲜海鱼类检出率为96.4%,贝壳类产品检出率为80.8%,鲜活鱼虾类检出率为6.7%,鲜海带类检出率为40.9%,海蜇类检出率为66.7%。VP种属特异性的基因tlh的PCR鉴定与显色培养基的鉴定结果一致;237株VP神奈川试验阳性69株;常用抗生素出现不同程度耐药,完全不耐药的分别为头孢曲松、头孢呋肟、万古霉素、美满霉素、奥复星、麦迪霉素、先锋霉素Ⅴ、丁胺卡那霉素、诺氟沙星、丙氟哌酸、复达欣等。结论南京夏秋季海产品中存在严重的副溶血性弧菌污染,分离菌株含毒力占29.1%,对16种抗生素存在不同程度的耐药。显色培养基用于海产品中副溶血性弧菌的快速检测与PCR检测结果一致。 相似文献