五味子乙素对HK-2细胞缺氧损伤的保护作用

卢爱龙 1, 谭小月 2, 张勉之 3△, 吴银娜摘要： 目的 探讨五味子乙素 （Sch B） 对氯化钴 （CoCl2） 诱导的人类近端肾小管上皮 （HK-2） 细胞缺氧损伤的保护作用及其可能机制。方法 取离体培养 HK-2 细胞, 随机分为 4 组。对照 （C） 组： 细胞未经任何处理。CoCl2组 （化学乏氧组）： 加入 600 μmol/L 的 CoCl2 处理 24 h。Sch B 预保护（CoCl2+ Sch B）组： 分别加入终浓度为 1 μmol/L 和 10 μmol/L Sch B 预处理 2 h 后, 其余操作同 CoCl2 组。Sch B 组： 分别加入终浓度 1 μmol/L 和 10 μmol/L Sch B 处理 2 h。CCK-8 试剂盒检测各组细胞活性; AnnexinV-FITC/PI 双标记流式细胞仪检测各组细胞凋亡率; Western Blot 检测各组缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白表达; RT-PCR 检测各组 HIF-1α和诱导型一氧化氮合酶（iNOS） mRNA 表达。结果 与对照组相比, CoCl2组细胞活性明显降低, 细胞凋亡率、 HIF-1α蛋白表达量和 iNOS mRNA 表达量显著增加, HIF-1α mRNA 表达量差异无统计学意义; Sch B 预保护组较 CoCl2组细胞活性显著增加, 细胞凋亡率、 HIF-1α蛋白表达量、 HIF-1α及 iNOS mRNA 表达量均显著减少; Sch B 组与对照组细胞活性、 细胞凋亡率差异无统计学意义, Sch B 组几乎不表达 HIF-1α蛋白。结论 Sch B 可能通过抑制 HIF-1α蛋白和 iNOS mRNA 的表达减少 HK-2 细胞的凋亡, 从而对 HK-2 细胞缺氧损伤起保护作用。     

五味子乙素对顺铂所致小鼠急性肾损伤的干预作用

目的 观察五味子乙素(Sch B)对顺铂所致急性肾损伤(AKI)小鼠的干预作用及可能机制.方法 将25只BALB/c小鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组以及高、低剂量Sch B干预组和Sch B对照组.高、低剂量Sch B干预组灌胃Sch B橄榄油20 mg/kg或100 mg/kg;Sch B对照组灌胃Sch B橄榄油 100 mg/kg;空白对照组和模型组灌胃等体积橄榄油;各组均连用5 d.实验第3天模型组和高、低剂量Sch B干预组单次腹腔注射顺铂 20 mg/kg复制小鼠AKI模型;空白对照组与Sch B对照组腹腔注射1 mL/kg生理盐水.实验结束后测定血肌酐(SCr)水平;用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡情况;苏木素-伊红(HE)染色观察肾小管上皮细胞形态变化,并进行肾小管损伤评分;用免疫组化法检测肾组织中p53蛋白含量;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肾组织p53蛋白表达.结果 与空白对照组比较,模型组SCr (μmol/L:86.77±10.97比14.37±0.81)、肾小管损伤评分(分:9.67±1.20比1.00±0.45)、肾小管上皮细胞凋亡数(个/200倍视野:20.00±2.13比2.30±0.40)均升高(P<0.05或P<0.01),p53蛋白含量(个/400倍视野:13.40±2.66比57.30±3.82)、p53蛋白表达〔吸光度(A值)比值:0.79±0.09比1.42±0.09〕均降低(均P<0.01).与模型组比较,高、低剂量Sch B干预组SCr(μmol/L:21.98±5.52、37.45±5.04)、肾小管损伤评分(分:5.67±0.76、6.17±0.65)、肾小管上皮细胞凋亡数(个/200倍视野:10.60±1.05、11.60±1.45)均下降(均P<0.01),p53蛋白含量(个/400倍视野:42.40±3.67、45.90±2.31)、p53蛋白表达(A值比值:1.36±0.16、1.25±0.11)均升高(均P<0.01).HE染色显示:模型组肾小管上皮细胞出现融合、空泡变性、蛋白管型,肾小管腔萎缩或扩张等病理表现;高、低剂量Sch B干预组肾组织病理改变较模型组减轻.结论 Sch B对顺铂所致AKI有保护作用,其机制可能与其降低SCr和p53蛋白表达水平,抑制肾小管上皮细胞凋亡有关.