重组人胰岛素样生长因子1的制备

目的：建立人胰岛素样生长因子1(IGF—1)基因大肠杆菌高效表达系统及rhIGF—1的初步纯化方法。方法：将人IGF—1基因克隆人原核表达质粒载体pBV220，重组质粒转化大肠杆菌DH5α，温度诱导表达，Western Blot对表达产物进行鉴定。超滤离心纯化rhIGF-1，纯化产物行高效液相色谱分析。H^3-TdR掺人法测定所制备rhIGF—1的促细胞增殖活性。结果：成功构建了重组质粒pBV—IGF—1，聚丙烯酰胺凝胶电泳可见与预期7．5ku大小相符的蛋白条带，Western Blot证实该条带即为rhIGF—1。超滤离心一步纯化后rhIGF—1纯度即可达95％以上。H^3-TdR结果显示，所制备的rhIGF—1可促进体外培养成肌细胞增殖。结论：成功建立了rhIGF-1的制备及纯化方法，表达产物经体外试验证实具有促细胞增殖的生物活性。     

pUC-T载体的构建

目的：构建具有较高连接效率和检出效率的克隆载体。方法：在质粒pUC18的多克隆位点内引入特异的DNA片段，酶切后得到3’末端具有突出T碱基的线性化pUC—T载体。结果：经连接效率实验，此载体具有很高的重组率。结论：成功获得了pUC—T载体；利用了质粒pUC18的多克隆位点，为亚克隆提供了丰富的酶切位点；具有蓝白斑筛选标记，提高了重组子的检出效率。