不同性激素对P-糖蛋白表达水平及甲磺酸伊马替尼转运的影响

目的：探讨在ABCB1（1199G/A）重组细胞模型中不同性激素对P-糖蛋白（P-gp）表达水平及甲磺酸伊马替尼转运的影响。方法：将构建的ABCB1_1199G/wt和ABCB1_1199A/mut重组质粒稳定转染入HEK293细胞中,采用RT-PCR和Western Blot分别检测不同性激素对P-gp mRNA和蛋白的表达水平;采用HPLC检测性激素对甲磺酸伊马替尼累积量的影响。结果：浓度梯度的性激素（雌酮、雌三醇雌二酮、黄体酮和睾酮）刺激ABCB1_1199G/wt 和ABCB1_1199A/mut重组细胞后,雌酮和雌三醇能刺激P-gp mRNA和蛋白表达水平,且雌三醇上调ABCB1_1199A/mut mRNA的表达水平显著高于ABCB1_1199G/wt;雌酮和雌三醇可降低甲磺酸伊马替尼在细胞内的累积量,产生对伊马替尼的耐药性。结论：雌酮和雌三醇增加了细胞内P-gp的表达,并促进P-gp介导甲磺酸伊马替尼的转运能力。     

基于TCGA数据分析黑色素瘤中的可变剪切事件及预后模型建立

[目的]探讨可变剪切事件与黑色素瘤预后的相关性。[方法]471例黑色素瘤患者的临床信息下载自TCGA数据库,与患者对应的可变剪切事件下载自TCGA SpliceSep数据库。采用单因素Cox回归分析筛选预后相关的可变剪切事件;采用Lasso回归分析构建预后模型,并计算黑色素瘤患者的风险值,对高低风险组绘制生存曲线,ROC曲线和风险曲线;随后采用单因素和多因素Cox回归分析进行独立预后分析。采用Metascape在线工具对预后相关的可变剪切基因进行富集分析。[结果]设置阈值为P<0.05,筛选得到的预后相关的可变剪切事件共有1238例。Lasso回归表明,采用MTMR14│63114│ES和BATF2│16723│AP的可变剪切事件PSI值作为预后模型,高风险组患者的生存时间减少,死亡人数增加。此外,预后模型作为独立预后因子可准确预测黑色素瘤患者的预后状况。与预后相关的可变剪切基因富集的生物学功能主要包括细胞死亡的调节,蛋白复合体组装的调节,GTP酶活性的调节,核质运输和DNA修复。[结论]预后相关的可变剪切事件可作为预后模型,较准确地预测黑色素瘤的预后状况。     

PD-L1胞外域密码子优化及原核表达纯化

目的 获取活性的PD-L1胞外域蛋白。方法 本研究基于大肠杆菌的原核表达系统,通过稀有密码子优化,将PD-L1胞外域优化后的基因序列转入pET-28a(+)载体中,诱导其以可溶性状态在细菌上清裂解液中表达,再通过SDS-PAGE考马斯亮蓝染色对所得蛋白进行检测分析。结果 在密码子优化前,改变温度或者IPTG浓度等诱导条件,目的蛋白始终在包涵体中表达,无法得到保持生物活性、可溶性的PD-L1胞外域蛋白;密码子优化后,通过摸索诱导条件,发现在16℃,0.1mmol/L IPTG的诱导条件下,诱导12h,成功在细菌上清裂解液中得到可溶性的PD-L1胞外域目的蛋白,经镍离子螯合纯化树脂纯化后,获得了保持生物活性及结构的PD-L1胞外域目的蛋白。结论 成功获取活性的PD-L1胞外域蛋白为SELEX筛选识别PD-L1胞外域特异性DNA/RNA 适体提供实验基础,为通过DNA/RNA 适体与PD-L1结合从而阻断PD-1/PD-L1信号通路导致的肿瘤的免疫逃逸提供了新的临床思路。     

TLR4基因多态性对索拉菲尼治疗肝癌的影响及相关分子机制

目的：研究TLR4基因多态性对索拉菲尼治疗肝癌的影响并探讨其相关分子机制。方法：CCK-8法检测索拉菲尼对各细胞的抑制率，并计算索拉菲尼在不同组细胞的IC₅₀；Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞使用索拉菲尼后的凋亡情况，再与未使用索拉菲尼时各组细胞的凋亡率进行比较；Western-blot检测TLR4信号通路蛋白JNK、P-JNK、ERK及P-ERK的表达水平。结果：与野生型细胞株相比，突变型细胞株能够显著性促进索拉菲尼对肝癌细胞HepG2的抑制率，并且索拉菲尼在突变型细胞组的IC₅₀值显著性低于野生型细胞组，流式凋亡检测表明，索拉菲尼对突变型细胞株的促凋亡作用较野生型细胞株更强。Western blot结果表明野生型细胞株中P-JNK和P-ERK的表达水平较突变型细胞高，差异具有显著性（P<0.05）。结论：TLR4基因多态性可以通过调控JNK及ERK信号通路来促进肝癌细胞HepG2对索拉菲尼的敏感性。     

肝纤维化分子机制及治疗研究进展

肝纤维化由慢性肝炎造成,若治疗不及时将发展成为肝硬化、肝癌。目前,临床上尚无理想的治疗药物。随着肝纤维化分子机制逐渐得以阐明、基因技术不断发展,使肝纤维化的治疗成为可能。目前,肝纤维化治疗主要是通过抑制肝星状细胞（HSC）活化、增殖,抑制细胞外基质（ECM）的合成,促进ECM的降解,诱导活化HSC凋亡。本文就肝纤维化的分子机制和治疗进行综述,为以后的研究提供参考。     

氯雷他定纳米混悬剂冻干粉制备及其溶出度考察

摘 要 目的：制备氯雷他定纳米混悬剂冻干粉,并考察体外溶出度和稳定性。方法: 采取反溶剂沉淀法制备氯雷纳米混悬剂冻干粉,采用纳米粒度仪、透射电镜进行形态表征,筛选出最优的冻干保护剂;利用HPLC法考察体外溶出度和稳定性。结果:制备所得氯雷他定纳米混悬剂复溶后平均粒径为175.6 nm,多相分散系数（PDI）为0.200,zeta电位为-56.3 mV;透射电镜观察到氯雷他定纳米混悬剂冻干粉成类球形;以10%蔗糖做冻干保护剂极易复溶,复溶后粒径和PDI最优;冻干粉的体外累积溶出度显著高于原料药,且在4℃条件下稳定性良好。结论:纳米混悬剂冻干粉制备方法简便,有望成为氯雷他定新型给药方式。