儿科病毒感染性疾病和抗病毒治疗

儿科病毒感染性疾病种类繁多，临床表现多样，然而获准用于临床抗病毒的药物除外，抗人类免疫缺陷病毒(HIV)药仅为11种(美国食品和药物管理局)，远没有抗生素那么多。HIV感染在我国每年以40％的速度递增，2002年初SARS病毒在我国的肆虐，均要求我们加深对病毒性疾病和抗病毒药物的认识。     

4年间我院儿科临床大肠埃希菌耐药性变迁分析

目的：监测我院4年间儿科临床分离的大肠埃希菌的耐药情况，了解其耐药性发生和发展的规律，以指导儿科临床合理选用抗大肠埃希菌药物。方法：2001年1月-2004年12月从儿科临床标本分离的84株大肠埃希菌按照分离时间分为2001-2002年组（2001年1月-2002年12月）48株和2003-2004年组（2003年1月-2004年12月）36株，分别比较两组产超广谱B内酰胺酶（ESBLs）和对22种抗菌药物敏感性试验结果。结果：ESBLs检测结果：2001-2002年组产ESBLs株检测率为37．5％（15／40），2003-2004年组产酶株捡出率为46．9％（15／32），经x^2检验，P〉0．05，无显著性差异。药物敏感性实验结果：2003-2004年组比2001-2002年组耐药率明显升高，22种抗生素中除外亚胺培南未发现耐药菌外，其他抗生素耐药率均有不同程度增高，增幅为（16．7％-88．9％），经x^2检验，均有极显著性差异（P〈0．01），其中耐药率上升最快的5种抗生索分别为头孢曲松、头孢唑啉、头孢嚷肟、头孢拉定、头孢呋辛。耐药率上升较慢的5种抗生素分别为阿米卡星、头孢西丁、头孢哌酮／舒巴坦、头孢他定和四环素。结论：儿科临床大肠埃希菌耐药性发展迅速，以对头孢类抗生素耐药性上升最为显著，且呈多重耐药趋势。治疗上不宜选用头孢类抗生索和复方磺胺甲嗯唑，应选用头孢西丁、加酶抑制剂复合抗生素以及亚胺培南。     

实时定量PCR技术与短时培养法检测尿样本HCMV的比较

目的建立实时定量PCR系统定量检测尿样本中HCMV并与短时培养快速诊断半定量法比较。方法根据HCMVul123基因保守区设计特异性引物和taqman探针,以GAPDH为内参照校准所检测样本的细胞数,建立实时定量PCR检测系统,定量检测132份尿标本中HCMV拷贝数与短时培养结果比较,并同时分析19例接受更昔洛韦治疗前后尿排毒量的变化。结果132份尿标本实时定量PCR结果:短时培养(-)组HCMVDNA为(83±155)拷贝/5×105细胞(n=16例),( )组为(571±231)拷贝/5×105细胞(n=26例),( )组为(792±303)拷贝/5×105细胞(n=35例),( )组为(1126±416)拷贝/5×105细胞(n=16例),( )组为(2201±1043)拷贝/5×105细胞(n=9例);19例38份更昔洛韦治疗前后尿样本中3例治疗前后短时培养结果无改变,而实时定量结果明显改变。结论实时定量PCR法比短时培养法更适于评价抗病毒疗效,而短时培养法判断HCMV是否为活动感染优于实时定量PCR法。     

儿科临床分离大肠埃希菌耐药性分析

目的：监测我院4年间儿科临床分离的大肠埃希菌的耐药情况，了解其耐药性发生和发展的规律，以指导儿科临床合理用物。方法：对2001年1月-2004年12月儿科临床标本分离的84株大肠埃希菌，按照分离时间分为2001—2002年组48株和2003—2004年组36株，分别比较两组产超广谱口内酰胺酶（ESBLs）和对22种抗菌药物敏感试验结果。结果：ESBLs检测结果：2001—2002年组产ESBLs株检出率为37．5％（15／40），2003—2004年组产ESBLs株检出率为46．9％（15／32），差异无显著性（P〉0．05）。药物敏感试验结果：2003—2004年组比2001—2002年组耐药率明显升高，22种抗菌药物中除亚胺培南外，其他抗菌药物耐药率均有不同程度增高，增幅为16．7％～88．9％，差异极显著（P〈0．01）。结论：大肠埃希菌在儿童感染中耐药性发展迅速，以对头孢菌素类抗菌药物耐药性上升最为显著，且呈多重耐药趋势。     

The Effects of Allitridin on the Expression of Transcription Factor T-bet／GATA-3 in Mice Infected by Murine Cytomegalovirus

Human cytomegalovirus (HCMV) is a widely distributedspecies specificβ herpes virus that causes severe and fataldiseases. In China, HCMV seropositive rate in pregnantwomen reached up to 90% 96% [1]. Indeed, most hu man cytomegalovirus infections are subc…     

小鼠巨细胞病毒全身播散型感染模型的建立

目的 用小鼠巨细胞病毒(MCMV)Smith株建立BALB/c小鼠全身播散型感染模型.方法 15只BALB/c小鼠随机分为3组,于腹腔内接种0.2 ml不同浓度小鼠巨细胞病毒悬液(分别为5×104、5×103,5×103PFU);另5只设为正常对照组.各组分别于接种7 d后处死小鼠,取小鼠唾液腺分离病毒并观察小鼠主要脏器组织病理损害.结果 从接种MCMV 5×103 PFU组小鼠唾液腺分离出小鼠巨细胞病毒,小鼠肝、肺、肾和心脏组织病理损害明显.结论 建立小鼠巨细胞病毒全身播散型感染模型,可为抗巨细胞病毒药物筛选、疗效评估和疾病发病机制和疾病预后评估提供一个良好动物模型.     

改良脑脊液处理方法和优化PCR检测系统对结核性脑膜炎患儿的诊断价值

目的 改良脑脊液样本处理方法和优化PCR检测系统，提高结核性脑膜炎诊断阳性率。方法 建立微波-碱性非离子型表面活性剂-氯仿法，并用二甲基亚砜(DMSO)优化结核杆菌插入序列IS 6110 PCR检测系统；分别用微波-碱性非离子型表面活性剂-氯仿法和简易氯仿法处理1998年7月至2004年11月间华中科技大学同济医学院同济医院收集的108份脑脊液样本，经5%DMSO优化的PCR诊断系统扩增，将结果进行比较。结果 微波-碱性非离子型表面活性剂-氯仿法处理脑脊液模板PCR诊断结核性脑膜炎阳性率为88%，简易氯仿法为71%,假阳性率均为0。结论 微波-碱性非离子型表面活性剂 氯仿法和5%DMSO优化的IS 6110 PCR检测系统可有效提高结核性脑膜炎诊断的阳性率。 Abstract Objective To improve the diagnosing level of tuberculosis meningitis (TBM) by means of modified preparation of cerebrospinal fluid (CSF) and optimized IS6110 PCR system.Methods Establishing the modified template preparing method of microwave/ alkaline nonionic detergent/ chloroform and using dimethyl sulphoxide (DMSO) to optimize the PCR system of tubercle bacillus(TB) gene IS6110.Preparing the template from 108 CSF specimens with the microwave/alkaline nonionic detergent/ chloroform method and amplifying IS 6110 gene with DMSO modified system,comparing with the simple chloroform method.ResultsThe modified IS 6110 PCR assay with microwave/alkaline nonionic detergent/chloroform method showed the positive rate of 88%,while the rate of simple chloroform method was 71%.Both false positive rates were 0%. Conclusion The method of preparing the template with the microwave/alkaline nonionic detergent/chloroform method and modifying TB IS 6110 PCR system with 5%DMSO is an effective way to increase the positive rate of TBM diagnosis. Key words Tuberculosis meningitis;Cerebrospinal fluid;Dimethylul sphoxide;Polymerase chain reaction     

体外三步法诱导胚胎干细胞定向生成神经干细胞的实验研究

目的 探讨体外定向诱导胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)生成高纯度神经干细胞(neural stem cells，NSCs)的方法。方法 模拟体内神经细胞分化发育的不同阶段及微环境，以脑星形胶质细胞为支持细胞，用全反式维甲酸(All-trans retinoic acid，ATRA)等分三阶段诱导ESCs定向生成NSCs。形态学观察及畸胎瘤形成试验对ESCs的全能性进行鉴定；形态学观察结合免疫组织化学、流式细胞术和RT-PCR检测胚胎干细胞标志OCT-4和神经干细胞标志Nestin蛋白和(或)基因表达对诱导全过程进行动态监测；NSCs分化试验对所诱导的NSCs的分化潜能进行检测。结果(1)体外培养的小鼠ESC-D3细胞在胚胎成纤维饲养层细胞上连续传代培养，仍保持向三胚层分化的能力；(2)随着诱导的进行，OCT-4表达逐渐减弱并消失，而Nestin表达逐渐增强，经三步法最终可诱导形成纯度高达90％以上的Nestin阳性细胞；(3)所诱导生成的细胞在NSCs选择性培养基中反复传代，仍表现为Nestin阳性和具有生成神经球的能力，在含血清培养基中可进一步分化为神经元、星形神经胶质细胞和少突胶质细胞。结论采用星形胶质细胞作为诱导基质，模拟体内神经分化过程的三步诱导法，可诱导ESCs生成较高纯度的NSCs，并能较好维持其干细胞特性和具有进一步分化的能力。     

多重聚合酶链反应系统快速诊断结核和其他细菌感染

目的探讨多重聚合酶链反应(PCR)系统用于诊断细菌感染,并区分结核和其他细菌感染。方法多重PCR系统检测129份临床样本包括脑脊液108份、胸水10份、腹水11份,与培养结果比较,分别评估该系统检测普通细菌和结核杆菌敏感性和特异性。结果本系统检测临床样本中普通细菌和结核杆菌的敏感性均达100%,特异性分别为86%和81%。结论多重PCR系统可成功地用于临床快速诊断细菌感染,并有效区分结核和其他细菌感染。     

大蒜新素对人巨细胞病毒即刻早期、早期和晚期基因转录水平的影响

目的 研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期(ie)、早期(e)和晚期(1)基因在转录水平的影响,探讨大蒜新素抗HCMV效应的作用机制.方法 建立HCMV AD169株(MOI =2.5)感染细胞和大蒜新素(9.6 mg·L-1)处理感染细胞模型,并用相应剂量(2.3 mg·L-1)的更昔洛韦(GCV)作比较,用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞感染后0.5,2,4,6,12,24h病毒u1122,ul123,ul54,ul83 mRNA水平的动态变化.结果 大蒜新素处理组ul122,ul123 mRNA的表达量始终明显低于感染对照组(P＜0.05),而更昔洛韦处理组ul122 mRNA在0.5 ～6 h与病毒对照组无明显差异.大蒜新素对AD169 ul122,ul123 mRNA的抑制率在感染后24h分别为75.2%,70.4%.2药物处理组ul54 mRNA表达量始终低于病毒对照组(P＜0.05),大蒜新素和更昔洛韦对ul54 mRNA的抑制率在感染后24h分别为45.4%,27.2%.在感染后6h各组ul83 mRNA表达明显增多,以病毒感染对照组变化最为明显.大蒜新素和更昔洛韦对ul83 mRNA的抑制率在感染后24h分别为45.9%,26.2%.结论 大蒜新素可显著抑制HCMV AD169毒株ie基因(ul122和ul123)的转录,导致其mRNA表达明显降低,对e基因(ul54)和l基因( ul83)转录水平亦有所抑制,表明病毒ie基因可能是大蒜新素抗HCMV作用的主要环节.