一种用于基因表达谱分析的基因芯片方法

目的：通过研究SLE患者外周血基因表达谱的改变，建立一种新型的基因芯片技术用于分子发病机理的研究。方法：提取总RNA，逆转录合成单链cDNA、双链cDNA，体外转录合成生物标记的cRNA与基因芯片进行杂交，通过抗体的检测标记荧光染料Cy3，基因芯片扫描仪进行图像扫描。结果：该方法有较高的重复性和稳定性，SLE患者与正常对照组相比较，鉴定出94个基因存在表达差异。结论：该方法能在较少起始标本量的情况下，有效地进行SLE致病基因的筛选，更好的理解SLE发生的分子机理，并且可在其它疾病研究中推广应用。     

白塞氏病相关抗原的重组表达及抗原性初步分析

目的：探讨Kinectin的抗原性，为下一步研究Kinectin在白塞氏病中的意义奠定基础。方法：从人Hep2细胞抽提RNA，利用RT—PCR扩增能覆盖Kinectin全长的3个片段，其位置分别相当于氨基酸22—510(kin—5)，503-994(kin-M)和920-1346(kin-3)。将扩增的PCR片段克隆到pET42—a( )载体中，诱导表达的融合蛋白用白塞氏病病人血清进行Western blot分析。结果：构建的3个表达Kinectin部分片段载体(pET／kin—5、pET／kin-M和pET／Kin-3)具有正确的阅读框架，DNA测序符合率为99％，能在大肠杆菌中表达相应的肽段。8份阳性血清中，用Western blot分析发现，6份血清与kin-M反应，5份血清与kin-3反应，只有一份血清与kin-5有反应。结论：成功地构建表达覆盖Kinectin全长的3个载体，并初步发现Kinectin的抗原性可能主要位于其中间段和羧基端。     

系统性红斑狼疮发病机制的研究现状和趋势

系统性红斑狼疮（SLE）是一种复杂的自身免疫性疾病,以抗核抗体为代表的自身抗体的产生、免疫复合物沉积及多系统损害为特征,临床表型具有相当大的异质性。SLE的发病机制长期以来是风湿免疫研究领域的难点。最近，数个独立的、样本量达数千例的SLE患者全基因组扫描的病例对照研究相继发表在2008年初的《新英格兰医学杂志》和《自然·遗传学》上。上述研究除了为发现SLE易感基因提供了直接证据外，同时为从基因组水平认识SLE的发病机制提供了重要线索。     

OAS异构体对系统性红斑狼疮合并感染或疾病活动鉴别诊断的初步研究

目的探讨2′,5′-寡腺苷酸合成酶(OAS)异构体对系统性红斑狼疮(SLE)活动或感染的鉴别诊断作用。方法用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测SLE活动组(34例),SLE合并感染组(28例),正常对照组(29名)的OAS1、OAS2、OASL的mRNA表达。结果SLE活动组与正常对照组相比OAS1、OAS2、OASL的表达均明显增高(P<0.01),感染组3者表达均较SLE活动组为低(P<0.01)。SLE合并感染组与正常对照组相比OAS1的表达仍增高(P=0.000)、OAS2的表达增高不明显(P=0.124)、OASL的表达则明显降低(P=0.01)。Logistic回归显示OASL表达减低构成SLE合并感染的预测因子(P<0.01)。结论初步提示OAS异构体表达格局,特别是OASL,可能成为SLE活动和感染鉴别诊断的参考指标。     

以急进性肺间质病变为突出表现的无肌炎的皮肌炎

目的了解以急进性肺间质病变为突出表现的临床无肌炎的皮肌炎的临床特点转归和治疗。方法回顾分析本院1998—2005年住院的成人特发性皮肌炎/多发性肌炎(DM/PM)202例,按临床无肌炎的皮肌炎(CADM)、典型DM、PM进行分组,有无合并临床肺间质病变(ILD)进行分层。对随访的145例DM/PM行生存分析和COX回归,分析预后和危险因素。横断面研究用Logistic回归分析ILD相关的预测因子。结果①存在临床ILD是DM/PM预后的最重要危险因素,OR为4．826(95%CI为1．60～14．56．P=0．005)；而亚临床ILD与无ILD的DM/PM生存曲线差异无统计学意义。②CADM、典型DM、PM之合并临床ILD存在不同的病情经过。CADM-ILD呈急进性ILD的临床模式,其6个月存活率仅为40．8%,中位数存活时间仅为10．2个月；而典型的DM-ILD呈现“次急进性”(sub-rapid progressive)的临床模式,5年存活率为54．0%,中位数存活时间为90个月；PM-ILD则为慢性经过,5年和10年存活率分别为72．4%和60．3%,中位数存活时间可达10年,部分DM-ILD和个别PM-ILD患者也可呈现急进性ILD的疾病模式。③Logistic回归显示：四肢近端肌力OR 3．374(95%CI 1．729～6．583,P＜0．01)和血沉OR 1．025 (95%CI 1．002～1．049,P=0．032)与临床ILD呈正相关,血白蛋白水平OR 0．877(95? 0．792～0．970,P= 0．011)则与临床ILD呈负相关。④随访CADM(28例)的病程为3～80个月,其中CADM-ILD超过半数在1年内死亡(12/21)；而病程＞24个月的CADM(8/28例)预后良好。对于无ILD的CADM,主要予中小剂量的激素(＜0．5～1mg·kg~(-1)·d~(-1))治疗,而CADM-ILD则多接受较大剂量的激素(≥1～2mg·kg~(-1)·d~(-1)),且多联用包括硫唑嘌呤、环磷酰胺、环孢素、霉酚酸酯在内的细胞毒药物,但对呈急进性ILD者缺乏疗效。⑤DM/PM随访病例的病死率为24．8%(36/145例),ILD及其并发症作为直接死因的占69．4%(25/36例),与ILD无直接相关的感染占25．0%(9/36例)。纵隔(皮下)气肿,气胸发生率占所有DM/PM-ILD的9．3%(8/86例),也是提示预后不良指征之一。结论ILD是DM/PM的常见并发症,也是最重要危险因素。本文提出了一个新的DM/PM疾病分类模式：即DM/PM是皮损、肌炎和ILD三个维度上相组合的立体疾病谱。CADM是该疾病谱的组成部分,CADM-ILD可呈急进性,是疾病谱中特殊的临床表型。     

FasL诱导EAE小鼠淋巴细胞凋亡的实验研究

为了解FasL在诱导EAE淋巴细胞凋亡中发挥的作用 ,我们用髓鞘碱性蛋白 (MBP )致敏小鼠 ,建立动物模型 实验性自身免疫性脑脊髓膜炎 (EAE )。分析了EAE动物淋巴细胞膜上Fas及FasL分子的表达水平 ,检测了分泌的细胞因子 ;用FasL分子诱导了EAE淋巴细胞凋亡。结果表明 ,应用MBP致敏KM小鼠 ,成功地建立了EAE模型 ,KM小鼠的发病率为6 8 3% ,发病程度为 1～ 2分 ;小鼠特异性淋转比对照组高 ,并与发病评分成正比 ;细胞因子分泌水平提示以Th2为主 ;EAE淋巴细胞Fas和FasL的表达及凋亡显著高于对照组 ;FasL诱导淋巴细胞凋亡剂量依赖曲线表明 ,在一个较小的浓度范围内呈现正相关 ,若加入单抗可部分阻断FasL诱导的凋亡。结果提示Fas FasL在EAE动物淋巴细胞凋亡中起了重要作用。     

晚发性强直性脊柱炎19例临床分析

强直性脊柱炎(AS)是一种原因未明、以中轴关节慢性炎症为主的全身性疾病,主要发生于青壮年男性,绝大多数于40岁前发病,45岁以后发病者称为晚发型强直性脊柱炎(Late-onsset ankylosing spondylitis,LAS).LAS临床上相对少见,国内外报道不多~([1～4]),容易误诊,为提高对LAS的认识,现将我院收治的19例LAS临床资料整理报告如下: 资料与方法     

血清丙种球蛋白Fc段唾液酸化水平及其临床意义

目的 建立丙种球蛋白(IgG)Fc段唾液酸化水平的检测方法,并探讨血清IgG-Fc段唾液酸化在系统性红斑狼疮(SEE)尤其是神经精神狼疮(NPSLE)中的临床意义.方法 采用基于亲和素的夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测75例SLE患者(进一步分为NPSLE和非NPSLE 2个亚组),30例类风湿关节炎(RA)患者,32例幼年特发性关节炎(JIA)患者和41名健康对照者血清唾液酸化IgG,同时记录SLE患者临床资料,计算SLE疾病活动指数(SLEDAI),分析唾液酸化IgG的临床意义.结果 唾液酸化的IgG在RA组为(0.82±1.81)mg/mg/ml,JIA组为(0.69±1.30)mg/ml,健康对照组为(0.64±1.09)mg/ml,组间差异无统计学意义(P=0.82),SLE组为(0.12±0.17)mg/ml,唾液酸化水平明显降低(P<0.01),其中NPSLE组为(0.03±0.03)mg/ml,较其他组显著下降(P<0.01);健康对照组IgG唾液酸化的程度为(4.64±5.90)%,显著高于非NPSLE组的(1.88±2.16)%和NPSLE组的(0.29±0.47)%(P<0.01).唾液酸化的IgG占总IgG的百分数与SLEDAI负相关(r=-0.43,P<0.01).结论 SLE患者的IgG-Fc段唾液酸化水平较健康人群显著降低,且与狼疮活动度负相关,尤其在神经精神累及患者的IgG-Fc段唾液酸化水平下降尤为突出,提示唾液酸化的IgG有可能成为一种新的生物治疗手段.     

系统性红斑狼疮相关基因IFIT1的功能初探

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)相关基因IFIT1的功能。方法 首先将IFIT1从穿梭表达克隆转入真核表达克隆，然后转导进入Jurkat细胞系，用有限稀释法筛选单克隆；再用CD3和CD28刺激单克隆，检测膜分子的表达、细胞凋亡、增生、细胞因子分泌等免疫生物学指标；最后应用RNAi技术，下调IFIT1的表达，检测细胞因子分泌，比较分析IFIT1的功能。结果 IFIT1的过表达在T细胞中能诱导白细胞介素(IL)-4和IL-10的分泌增加，下调IFIT1的转录水平后能部分下调IL-4和IL-10表达，而与细胞膜分子的表达、细胞的增生、凋亡无关。结论 SLE相关新基因IFIT1在细胞因子的产生中起了重要作用，可能与Th1/Th2的失衡有关。     

寡腺苷酸合成酶家族基因的定表达与系统性红斑狼疮的临床特征

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中寡腺苷酸合成酶(OAS)1、OAS2和OASLmRNA的实时定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动度的相关性。方法收集144例SLE患者、27例非SLE患者与59名正常对照人群的临床资料,取外周血抽取总RNA并反转录成cDNA,运用sybrgreendyeⅠ实时定量聚合酶链反应(PCR)法在ABIPRISM7900H基因测序仪上检测患者组和对照组的OAS1、OAS2的OASLmRNA表达水平的差异,并与病情活动度进行分组比较,分析其意义。结果①SLE患者的总体OAS1mRNA定量表达水平显著高于非SLE对照组和正常对照组,差异有非常显著性(P=0郾016,P=0郾000);OAS2mRNAP定量表达水平高于正常对照组(P=0郾015);而OASLmRNA定量表达水平与非SLE对照组和正常组之间差异无显著性(P=0郾698,P=0郾396)。②SLE活动组的OAS1和OASLmRNA定量表达水平均显著高于SLE非活动组,差异有非常显著性(P=0郾011,P=0郾001)。但SLE活动组的OAS2表达水平与SLE非活动组之间差异无显著性(P=0郾109)。③SLE患者组的OAS2和OASLmRNA定量表达水平与SLEDAI积分呈正相关性(P=0郾001,P=0郾006)。④SLE患者的肾、肺、脑、血液等器官的有无受累与OAS1、OAS2和OASLmRNA表达水平无相关性。⑤SLE患者组和正常对照组组内的OAS1、OAS2和OASL表达水平