重组SHH腺病毒纤维蛋白 缓释支架对神经干细胞增殖与分化的影响

目的研究包含重组SHH腺病毒纤维蛋白缓释支架对神经干细胞(NSCs)增殖与分化的影响。方法实验分组:FG-SHH组(将NSCs种植于重组SHH腺病毒-支架组)和对照组(controls)[以培养板、重组SHH腺病毒转染组(SHH)、纤维蛋白胶支架组(FG)为对照组];体外分离培养并鉴定NSCs,构建重组SHH腺病毒纤维蛋白缓释支架,用免疫荧光和免疫印迹方法测定转染效率; MMT法检测细胞增殖活力;免疫荧光和免疫印迹法检测上述各组细胞表达神经细胞相关蛋白:β微管蛋白(β-tubulinⅢ)、髓磷脂碱性蛋白(MBP)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达状态。结果体外培养的NSCs高表达nestin;转染重组SHH腺病毒后NSCs可稳定表达SHH;FG-SHH支架促NSCs增殖能力较强,并且FG-SHH组β-tubulinⅢ及MBP阳性细胞率和蛋白表达水平均高于对照组(P0.05),FG-SHH组GFAP的阳性细胞率和蛋白表达水平低于对照组(P0.05)。结论重组SHH腺病毒纤维蛋白缓释支架可以促进NSCs的增殖及其向神经元和少突胶质细胞分化,并抑制星形胶质细胞分化。     

基于电子医疗数据库的药物流行病学安全性研究的特点及要求

药物流行病学研究在评估药物与不良事件之间的相互关系中起着重要的作用,而随着电子医疗数据库的发展,传统的药物流行病学研究方法 已不能完全满足当今药物警戒工作的需求。基于对电子医疗数据库的认识及对FDA相关指南的理解,本文拟对利用电子医疗数据库进行的药物流行病学安全性研究的一般特点及FDA提出的数据采集要求进行介绍,以期对我国的药物流行病学研究及药物警戒工作提供相关的技术参考。     

TG2基因修饰的鼻粘膜间充质干细胞向神经样细胞分化的研究

目的:研究重组transglutaminase 2(TG2)腺病毒转染对鼻粘膜骨髓间充质干细胞(EMSCs)向神经样细胞分化影响。方法:利用贴壁筛选法分离培养和扩增EMSCs,通过免疫荧光方法分析EMSCs的纯度,采用免疫荧光和免疫印迹方法测定转染效率。实验分组:重组TG2腺病毒转染EMSCs(ad EMSCs)组、重组GFP腺病毒转染EMSCs组(GFP-EMSCs)和空白对照组(control),诱导细胞向神经样细胞分化,倒置显微镜观察分化过程中细胞形态的变化。免疫荧光和免疫印迹方法检测诱导后EMSCs的轴突膜蛋白(GAP-43),微管相关蛋白(MAP2)和髓磷脂碱性蛋白(MBP)的表达情况。向大鼠脊髓内注射ad EMSCs,2周后取脊髓。结果:实验数据表明转染TG2腺病毒的EMSCs可稳定表达TG2。诱导7 d后,ad EMSCs组细胞呈现双极和多极的典型神经样细胞形态,并且GAP-43,MAP2和MBP的表达水平较对照组高。移植入体内2周的ad EMSCs存活良好且部分细胞表达GAP-43。结论:TG2基因修饰有利于EMSCs在体外向神经样细胞分化,并且具有良好的可移植性。     

高效凝胶色谱法测定太子参均一多糖分子量

目的:建立太子参均一多糖的分子量分析方法。方法:应用高效凝胶渗透色谱法,色谱柱为Waters UltrahydrogelTM1000(7.8×300mm)GPC柱,流动相为0.1mol/L硝酸钠溶液,柱温35℃,示差折光检测器(检测器温度35℃),流速0.6ml/min。结果:根据建立的方法测定,得到多糖的高效凝胶色谱图,计算出太子参均一多糖分子量为22374Da。结论:方法准确可行,为太子参均一多糖分子量的测定提供了科学依据。     

七氟烷麻醉致认知障碍模型老龄小鼠肠道菌群变化及NLRP3炎性小体作用机制

目的探讨七氟烷麻醉致认知功能障碍模型老龄小鼠肠道菌群变化及NLRP3炎性小体的作用机制。方法将18只14月龄雄性SPF级C57BL/6J鼠按照体质量相匹配原则分为对照组和七氟烷组, 每组9只。七氟烷组小鼠接受3%七氟醚麻醉, 2 h/d, 持续3 d。造模24 h后, 收集2组小鼠的粪便进行16S rRNA测序, 随后进行Morris水迷宫实验检测小鼠的认知能力。用Western blot检测小鼠海马突触相关蛋白、NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3 inflammasome, NLRP3)炎性小体相关蛋白, 结肠NLRP3炎性小体相关蛋白的表达。高尔基染色法观察海马区树突棘的数量。qPCR法检测小鼠结肠组织及海马组织炎性细胞因子白介素1β(interleukin-1β, IL-1β)、白介素18(interleukin-18, IL-18)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)mRNA的表达。用GraphPad Prism 7软件进行统计分析, 组间比较采用t检验。结果 (1)Morris水迷宫结...     

氯倍他索对大鼠神经干细胞自发分化的影响

目的:研究氯倍他索(Clo)对神经干细胞自发分化的影响,为Clo治疗中枢性神经损伤提供医学理论基础。方法:利用无血清悬浮法分离培养及鉴定大鼠NSCs;选取第三代NSCs,以含10%胎牛血清完全培养基贴壁诱导分化7 d,培养基中各加入同体积二甲基亚砜、2. 5、5μmol/L的Clo;免疫荧光染色和Western Blot方法检测NSCs分化后轴突膜蛋白(GAP-43)、酸性胶质蛋白(GFAP)、髓磷脂碱性蛋白(MBP)表达情况,进一步探讨Clo的作用机制。结果:分离培养的NSCs高表达Nestin; Clo作用组表达GAP-43和MBP较对照组明显提高(P 0. 05),GFAP表达水平低于对照组(P 0. 05),Clo作用组表达音猬因子(SHH)和锌指蛋白(Gli 1)均高于对照组(P 0.05)。结论:Clo可在体外通过SHH信号通路促进NSCs向神经元细胞和少突胶质细胞分化,与此同时Clo可抑制NSCs向星形胶质细胞分化。     

氯倍他索促进鼻粘膜间充质干细胞成神经样细胞分化

目的:研究氯倍他索(Clo)对鼻粘膜外胚层间充质干细胞(EMSCs)向神经样细胞分化的影响。方法:贴壁筛选法分离培养EMSCs,免疫荧光法鉴定体外扩增的EMSCs;MTT法检测Clo对EMSCs增殖能力的影响;成神经样细胞诱导实验分为Clo组、音猬因子(SHH)组和空白对照组,采用全反式维甲酸(ATRA)诱导各组细胞向神经样细胞分化;倒置显微镜观察细胞形态的变化;免疫荧光和免疫印迹方法检测神经元细胞相关蛋白。结果:体外分离培养的EMSCs高表达间充质干细胞和神经嵴源干细胞标志物Vimentin和Nestin。各组EMSCs成神经样细胞诱导7 d后,Clo组和SHH组EMSCs呈现双极和多极的典型神经样细胞形态并且高表达神经元细胞相关蛋白。Clo组EMSCs表达SHH和SMO的水平明显高于空白对照组,与SHH组比较差异无统计学意义(P0.05);Clo可促进EMSCs分泌内源性脑神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)。结论:Clo可通过激活SHH信号通路和上调内源性神经营养因子水平促进EMSCs向神经样细胞分化。     

超声测量舌根至甲状软骨夹角预测喉镜暴露困难的临床研究

目的 ：应用超声测量气道组织结构评估喉镜暴露困难的危险因素。方法 ：选择300例在气管插管全麻下实施择期手术的患者,麻醉诱导前通过超声测量舌体宽度、舌体厚度、颏舌骨距离、甲状舌骨距离、舌根至甲状软骨夹角等评价指标,麻醉诱导后进行喉镜下声门暴露的Cormack-Lehane (C-L)分级,1、2级定义为非暴露困难组,3、4级定义为暴露困难组。分析各评价指标和C-L分级的相关性。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果：舌根至甲状软骨夹角为预测喉镜暴露困难的独立危险因素,最佳点为43°夹角,此时敏感度为96.2%,特异度为83.6%,AUC为0.866 [95%CI:0.769～0.962]。结论：超声测量舌根至甲状软骨夹角可作为评估困难气道的指标。