缝隙连接增强肿瘤坏死因子-α的肝细胞毒性

【目的】 观察缝隙连接(GJ)功能改变对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)肝细胞毒性的影响?【方法】 使用3种不同的方法:(1)GJ抑制剂预处理;(2)高低密度接种细胞;(3)小分子RNA转染抑制缝隙连接蛋白32(Cx32)表达等3种不同的方法抑制GJ的功能,观察不同浓度TNF-α作用不同时间后对肝细胞毒性的影响?【结果】 TNF-α的肝细胞毒性呈浓度和时间依赖性;抑制剂预处理后,TNF-α的肝细胞毒性明显降低(P < 0.01);低密度接种细胞(细胞间无GJ形成)时,TNF-α的肝细胞毒性较高密度接种细胞(细胞间有GJ形成)明显降低(P < 0.01);抑制Cx32的表达后,TNF-α的肝细胞毒性明显降低(P < 0.01)? 【结论】 抑制由Cx32组成的GJ的功能后,TNF-α的肝细胞毒性明显降低,Cx32的表达对于TNF-α的肝细胞毒性作用具有重要的作用?     

异丙酚、依托咪酯和咪达唑仑对大鼠肾组织缝隙连接功能的影响

目的 评价异丙酚、依托咪酯以及咪达唑仑对大鼠肾组织缝隙连接(GJ)功能的影响.方法 离体实验大鼠肾小管上皮细胞NRK52E,以1.0×105/ml密度接种于6孔培养板(2 ml/孔),采用随机数字表法,将其分为4组(n=6):对照组(C组)、异丙酚组(P组)、依托咪酯组(E组)和咪达唑仑组(M组).C组采用含10％胎牛血清的DMEM-F12培养液培养,P组、E组和M组分别于培养液中加入异丙酚、依托咪酯和咪达唑仑,终浓度分别为15、8、4 μmol/L,孵育1h,采用细胞接种荧光示踪法测定GJ功能.在体实验健康SPF级雄性大鼠24只,2月龄,体重220 ～ 280 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=6):异丙酚组(P组)、依托咪酯组(E组)和咪达唑仑组(M组)分别腹腔注射异丙酚、依托咪酯和咪达唑仑100、6和5 mg/kg,对照组(C组)给予等容量生理盐水,连续3d.最后1次给药后30 min时取肾皮质,采用在体荧光示踪法测定GJ功能.结果 离体与在体实验:与C组比较,P组和E组GJ功能降低(P＜0.05),M组GJ功能差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚和依托咪酯可明显抑制NRK52E细胞及大鼠肾组织GJ功能,而咪达唑仑对其无影响.     

新药AD-08对两种痴呆动物模型学习记忆障碍和海马乙酰胆碱酯酶活性的影响

目的 研究抗阿尔采末病(Alzheimer's disease,AD)新药AD-08对动物学习记忆功能以及海马乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响.方法 采用侧脑室注射Aβ1-42蛋白的引起的痴呆大鼠模型和APP/PS1双转基因痴呆小鼠模型.SD大鼠分为正常组、模型组、多奈哌齐对照组、AD-08低、中、高剂量组.APP/PS1双转基因小鼠分为模型组、多奈哌齐对照组、AD-08低、中、高剂量组,以及用具有相同遗传背景的小鼠作为正常对照组.正常对照组及模型组动物每天固定时间灌胃给予相应剂量的药物溶剂(生理盐水);阳性药对照组和AD-08各剂量组动物分别给予相应剂量的药物.SD大鼠给药8 d,APP/PS1双转基因小鼠给药1个月,之后用Morris水迷宫方法对动物进行空间记忆能力测试.并用AChE活性试剂盒测定受试动物大脑海马组织的AChE活性.结果 与正常对照组相比,痴呆模型组大鼠和小鼠的空间学习记忆能力均明显降低(P＜0.05),海马组织中的AChE活性明显升高(P＜0.05).各剂量的AD-08均能够明显改善痴呆模型动物的空间学习记忆能力,并降低其海马组织AChE的活性(P＜0.05).所试剂量(0.7 mg·kg-1~10 mg·kg-1)的AD-08改善痴呆模型动物空间学习记忆能力的作用与多奈哌齐(1 mg·kg-1~3 mg·kg-1)相似(P＞0.05).结论 AD-08可以明显改善Aβ1-42所致的痴呆模型大鼠和APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠的空间学习记忆能力;其作用机制可能与抑制海马AChE的活性有关.     

Trx2、GSH和GSH-PX与大鼠肝移植术后肾损伤修复的相关性研究

【目的】 探讨线粒体型硫氧还蛋白(Trx2),谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)对肝移植术后急性肾损伤的保护作用。【方法】 建立大鼠肝移植模型,将雄性SD大鼠35只,随机均分为假手术组(n = 7)和移植后4 h组(n = 7),移植后8 h组(n = 7),移植后16 h组(n = 7)和移植后24 h组(n = 7)。假手术组只进行开腹和血管的分离,各移植组接受自体肝移植。观察大鼠自体肝移植后不同时期肾脏病理、活性氧水平、Trx2表达、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性。 【结果】 肝移植术后8h肾脏损伤最为严重,移植术后24 h肾脏损伤有所恢复。肝移植术后4 h开始,肾脏 ·OH、H2O2、MDA和LDH的含量明显增加,逐渐达到最高水平,术后24 h逐渐恢复正常。而具有保护作用的GSH以及GSH-PX的含量在肝移植术后4 h即开始明显下降,术后24 h逐渐恢复至正常水平。肾脏Trx2的表达在肝移植术后4 h反应性的增高,术后8 h达到最高峰,而后逐渐下降。相关性分析显示,肝移植术后肾脏GSH、GSH-PX的含量与肾损伤病理评分呈负相关(P < 0.01);肾脏Trx2蛋白表达与肾损伤病理评分呈正相关(P < 0.05)。【结论】 肝移植术后4 h即可发生明显的肾损伤,术后8 h最为明显,而后逐渐恢复。其损伤的严重程度与GSH和GSH-PX的含量呈负相关;与Trx2的表达呈正相关,Trx2表达的增加有利于抗氧化酶合成,减轻肝移植术后的急性肾损伤。     

大鼠肝移植术后肝脏损伤的动态观察及核因子E2相关因子2的作用研究

目的探讨大鼠肝移植术后肝脏损伤的规律以及核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)在其中所起的作用。方法将35只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机均分为假手术组、肝移植后4h组、肝移植后8h组、肝移植后16h组、肝移植后24h组,每组7只,其中假手术组只进行开腹和血管分离,其余各组建立大鼠原位肝移植模型。术后相对应时间点处死大鼠,检测各组大鼠肝脏病理学改变,氧化损伤和抗氧化物的含量变化,分析大鼠肝移植术后肝脏损伤的规律及特点。同时检验移植肝Nrf2蛋白的表达变化。结果肝移植术后8h,大鼠移植肝损伤最为明显,过氧化氢、羟自由基和丙二醛的含量明显升高,而抗氧化物超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、还原型谷胱甘肽的含量显著下降。随后,活性氧水平和抗氧化物活性逐渐恢复至正常水平,肝脏损伤逐渐修复。肝移植术后大鼠肝组织Nrf2蛋白的表达从术后4h即开始明显升高,肝移植术后8、16、24h肝组织Nrf2蛋白的表达均明显高于假手术组。结论大鼠肝移植术后8h肝脏损伤最为明显,而后逐渐恢复。移植肝的损伤程度与活性氧水平以及抗氧化物活性的下降趋势高度一致。而这一变化过程可能与Nrf2的高表达上调了抗氧化物的含量密切相关。