雷公藤甲素对小鼠睾丸支持细胞人白细胞分化抗原36蛋白表达及脂质代谢水平的影响

目的 研究雷公藤甲素影响睾丸支持细胞的人白细胞分化抗原36（CD36）蛋白表达及脂质代谢的作用与分子机制。方法 体外培养小鼠睾丸支持细胞系TM4细胞,CCK-8法检测雷公藤甲素（40、80、160、320、640 nmol·L^-1）作用24 h细胞存活率;流式细胞术测定雷公藤甲素（80、160、320 nmol·L^-1）作用24 h细胞凋亡率;氟硼二吡咯化合物（BODIPY）染色和油红O染色检测雷公藤甲素（80、160、320 nmol·L^-1）作用24 h细胞内脂滴聚积情况;试剂盒法检测雷公藤甲素（80、160、320 nmol·L^-1）作用24 h细胞内三酰甘油（TG）水平;TM4细胞经0.1 mmol·L^-1三磷酸腺苷（ATP）预处理3 h后,再与160 nmol·L^-1雷公藤甲素共处理24 h,用CCK-8法检测TM4细胞的存活率;Western blotting法检测雷公藤甲素（40、80、160、320 nmol·L^-1）作用24 h、或160 nmol·L^-1雷公藤甲素作用6、12、24、36、48 h后TM4细胞中CD36蛋白表达量;Western blotting法检测雷公藤甲素（40、80、160、320 nmol·L^-1）作用24 h蛋白激酶1（PKD1）及其磷酸化蛋白、组蛋白去乙酰化酶7（HDAC7）和叉头框蛋白O1（FOXO1）的蛋白表达水平。结果 与对照组比较,雷公藤甲素80、160、320、640 nmol·L^-1浓度组TM4细胞存活率显著下降（P<0.05、0.01）,半数抑制浓度（IC₅₀）为214.1 nmol·L^-1; 80、160、320 nmol·L^-1雷公藤甲素的细胞凋亡率分别为11.89%、23.17%、32.12%,与对照组比较差异显著（P<0.05、0.01）。BODIPY染色结果显示,与对照组比较,雷公藤甲素组细胞内的红色荧光强度显著下降（P<0.01）,油红O染色也显示,雷公藤甲素160 nmol·L^-1组细胞内脂滴数量明显低于对照组;与对照组比较,雷公藤甲素组TM4细胞内TG水平显著下降（P<0.01）。与雷公藤甲素组比较,使用ATP协同给药显著减轻了雷公藤甲素对TM4细胞存活率的抑制（P<0.01）。与对照组比较,80、160、320 nmol·L^-1的雷公藤甲素作用24 h后,TM4细胞的CD36蛋白表达量显著上升（P<0.01）,160 nmol·L^-1雷公藤甲素作用于TM4细胞6、12、24、36、48 h,CD36的表达水平随时间的延长先升高后降低,在24 h达到峰值（P<0.05）。与对照组比较,雷公藤甲素组TM4细胞中PKD1及其丝氨酸744-748位点磷酸化水平、HDAC7和FOXO1的蛋白表达均受到显著抑制（P<0.05、0.01）。结论 雷公藤甲素对睾丸支持细胞具有明显的损伤作用,损伤机制与其诱导的脂质代谢紊乱和ATP缺乏相关。CD36在损伤过程中表达量先升高后降低,其初期代偿性上升可能是一种细胞的应激性保护机制,PKD1/HDAC7/FOXO1信号通路的抑制介导了CD36表达的调控。