广州城区大气细颗粒物对PC-12细胞IL-8表达的影响

目的 研究广州城区大气细颗粒物(PM2.5)对PC-12细胞IL-8表达的影响,并从p38 MAPK途径探索其作用机制,促进对PM2.5毒性的认识.方法 采集广州城区大气中的PM2.5,对PC-12细胞染毒,设对照组、不同浓度PM2.5组和SB203580+PM2.5组(用20 μ mol/L的SB230580预处理1h后再给予100μg/ml的PM2.5),Trizol法提取RNA用定量PCR法检测细胞IL-8表达情况,RIRP法提取细胞总蛋白,用Western blot法检测p38 MAPK的磷酸化改变.结果 定量PCR检测显示用25、50和100μg/ml的PM2.5染毒后PC-12细胞IL-8表达明显增高;Western blot结果显示PM2.5可磷酸化激活p38 MAPK信号分子,加入p38 MAPK抑制剂SB230580可以抑制PM2.5诱导的IL-8表达.结论 PM2.5可通过p38 MAPK途径诱导PC-12细胞表达细胞因子IL-8,这可能是其导致神经细胞毒性的机制之一.     

松针提取物α-蒎烯对肝癌HepG2细胞miR-221及其下游靶基因表达的影响

为探讨松针提取物α-蒎烯的抗肝癌作用及机制,该实验首先使用流式细胞技术检测α-蒎烯对HepG2细胞周期的影响,然后选取与G2/M期调控相关的miR-221,采用荧光定量PCR技术检测α-蒎烯干预对其表达的影响,同时通过Target Scan等在线生物信息学软件分析miR-221的靶基因,最后对相关靶基因的表达用定量PCR进行检测。结果显示,α-蒎烯呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,可阻滞细胞于G2/M期(P0.05),显著下调HepG2细胞内miR-221的表达(P0.05),生物信息学分析显示CDKN1B/P27和CDKN1C/P57可能是miR-221的下游靶基因,荧光定量PCR显示α-蒎烯处理后二者的表达显著上调(P0.001,P0.05)。上述结果表明,α-蒎烯可能通过阻滞细胞周期于G2/M期从而发挥抗肝癌作用,其对G2/M期的调控可能与下调miR-221表达和上调其靶基因CDKN1B/P27和CDKN1C/P57的表达有关。     

PM2.5对血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响及机制

目的:从大气细颗粒物PM2.5对血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响,研究PM2.5对血管内皮细胞的毒性。方法:体外培养血管内皮细胞株EA.hy926,用不同浓度的PM2.5染毒24 h后,用CCK-8法测细胞的活性,用DCFH-DA荧光标记法检测细胞内氧自由基生成情况,用流式细胞术检测细胞凋亡率,然后用Western blot法检测凋亡相关蛋白细胞色素C、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达变化。结果:CCK-8法结果显示PM2.5对血管内皮细胞有明显的毒性,在浓度大于25 mg/L时可使EA.hy926细胞活性显著下降;PM2.5染毒24 h后可见DCFH-DA荧光染色增强,说明细胞内有大量的氧自由基形成;流式细胞术和Western blot检测证实PM2.5可以通过上调细胞色素C表达和活化cleaved caspase-9和cleaved caspase-3而诱导EA.hy926细胞凋亡。此外,用N-乙酰半胱氨酸抑制氧自由基生成可以抑制血管内皮细胞凋亡,提示PM2.5引起的细胞凋亡与氧化应激有关。结论:PM2.5可导致血管内皮细胞氧化应激水平增强和凋亡增加,这可能是其影响心血管系统功能的机制之一。