白芍单萜苷成分与生物合成相关基因的时空表达特性及其相关性研究

目的 揭示白芍不同发育时期不同组织部位中单萜苷含量及其生物合成基因的表达差异和两者之间的相关性。方法 通过HPLC测定白芍叶、花、果、根及根中不同部位(韧皮部、木质部、须根和根皮)在不同发育时期氧化芍药苷、白芍内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷含量。采用RT-PCR对筛选出来的8个白芍单萜苷生物合成相关基因进行相对含量测定。应用R语言分析4种单萜苷含量与各生物合成相关基因表达量的相关性。结果 芍药苷和苯甲酰芍药苷主要分布于根中,而氧化芍药苷和白芍内酯苷主要分布于花中。氧化芍药苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷主要分布于木质部中,白芍内酯苷主要在韧皮部和须根。4种单萜苷成分在根中花期和果期含量均较低,在黄枯期中最高,展叶期次之。单萜苷含量与其关键酶基因表达量相关性分析结果表明,HMGR2和IDI基因与芍药苷、苯甲酰芍药苷和氧化芍药苷含量呈高度正相关。结论 白芍单萜苷及其生物合成相关基因存在时空特异表达模式,甲羟戉酸途径是白芍中生物合成萜类骨架的主要途径。     

基于DNA熔解曲线分析技术的前胡及其混伪品快速分子鉴定

目的：本研究旨在建立熔解曲线分析方法以实现简便快速直观地鉴别前胡及其混伪品。方法：采用硅胶吸附柱法抽提前胡及其混伪品的总基因组DNA,筛选合适引物,对引物浓度、模板浓度、退火温度和循环次数进行优化,建立前胡及混伪品样品的DNA熔解曲线鉴别方法,并对该方法进行验证。结果：核糖体DNA第二内部转录间隔区（ITS2）为适合的鉴别引物,在引物浓度0.20～0.40μmol/L,DNA模板浓度0.62～15.58 ng/μL,退火温度为53～54℃,循环数为35～45时可获得稳定、均一、特异性的PCR扩增。随后对比熔解曲线熔解温度（Tm值）,即可实现前胡药材真伪及掺伪品鉴别,对掺伪品的检测限可低至5%。结论：本方法灵敏度高、特异性好、检测速度快、直观性强,通过进行熔解曲线Tm值比对即可区分不同前胡样品,在该药材的混伪品快速检测方面具有独特的优势。