皱落假丝酵母脂肪酶的研究

对皱落假丝酵母(SIPI 2.230)的培养基及发酵条件的全面研究,发现在培养基中加入少量表面活性剂 Tween-80及脂类物质(豆油、麻油、亚麻油和橄榄油等),皆可明显地提高脂肪酶的发酵单位。该菌的培养基组     

甘油激酶的纯化与性质的研究

由嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus SIPI1.687)的粗提取液,经液-液双相抽提、DEAE-Toyopearl 650 M 离子交换柱层析及 SIPI-Ⅱ蓝色(?)料配基层析等分离提纯,可得甘油激酶(81U/mg),PAGE 鉴定为单带。用 Sephacryl 400凝胶过滤测得分子量为209,000道尔顿,SDS-PAGE 测定结果表明该酶由四个分子量均为50,000道尔顿的相似亚基组成。酶作用最佳 pH 9.4,pH 5.8～11.2时稳定;最佳温度为50℃,有较好的热稳定性。以甘油为底物时米氏常数为6.25×10~(-5)M。     

α—磷酸甘油脱氢酶的提纯及性质的研究

应用液-液双水相提取、DEAE-纤维素层析及SIPI-I红色染料配基层析等方法提纯兔肌匀浆粗提取液中的α-磷酸甘油脱氢酶,其比活15u/mg蛋白,为原酶的50倍,总收率约50％。并对其分子量、米氏常数、酶作用的最适pH、最适温度,对pH和热的稳定性等性质作了测定。     

甘油激酶纯化工艺的改进研究

由嗜热脂肪芽胞杆菌(BacillusStearothermophilus SIPl1.687)的菌体,经细胞破壁,酸沉淀,DEAE-Toyopearl 650M离子交换层析及ys-Ⅱ染料配基层析等分离提纯,酶的回收率为35.5％,比活30.8u/mg蛋白,纯化倍数16.5倍,SDS-PAGE鉴定为单带,并除去了几乎所有的NADH氧化酶,由此纯化的酶经冷冻干燥后,10℃存放11个月活力未见明显损失,与其它自制的三个酶可组成测定血清甘油三酯酶联试剂盒,甘油三酯浓度在60—960mg/dl内呈直线并过原点。     

蛋白质层析用介质

本文对目前国内外经常用于蛋白质层析介质的载体作了简单介绍,并阐述了根据蛋白质基本结构设计层析用介质的方法及有关技术。     

心肌黄酶的提纯工艺及其部分性质的研究

通过热变性处理、硫酸铵分级沉淀、DE-AE-Toyopear1650M柱层析及K_2BP-Agarose染料配基层析等方法从猪心肌组织匀浆提取液中分离与纯化了心肌黄酶。应用此工艺,酶活力的总回收率为16.9％,纯化倍数为26.4。用Sephadex G-100凝胶过滤法测得心肌黄酶的分子量为85,000道尔顿;以NADH为底物时其米氏常数为1.0×10~(-3)M;最适作用PH为10.6,在pH5-10时稳定;最适作用温度为65℃,有较好的热稳定性,在75℃保温3小时仍可保留80％的酶活性,提纯的酶溶液在4℃保存六个月未见活性明显损失。     

国产染料配基层析介质分离纯化甘油激酶α-磷酸甘油脱氢酶和心肌黄酶

以国产Sepharose 4 B和活性染料制备的YS一Ⅱ染料配基层析介质,分离提纯了甘油激酶、α-磷酸甘油脱氢酶和心肌黄酶,可使纯度分别提高6.6、2.9和3.3倍,收率为83.3、43.6和81.9%,所含的NADH 氧化酶和乳酸脱氢酶几乎全部可除去,各酶冻干后在10℃存放可稳定半年以上。所得的上述三个酶与自制的脂酶可组成血清甘油三酯酶联试剂盒。