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[目的]观察基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达水平对人卵巢癌细胞生长的影响.[方法]采用质脂体法将正、反义TIMP-1表达载体体外转染到卵巢癌A2780细胞中,用G418筛选稳定表达外源基因的克隆并用RT-PCR鉴定后扩大培养.以未转染组细胞作为对照,分别用直接计数法、四氮唑蓝(MTT)比色法、平皿克隆形成试验测定3组细胞的增殖活性,利用流式细胞术检测肿瘤细胞周期与凋亡的变化.[结果]与对照组相比,转染TIMP-1对卵巢癌细胞A2780呈现增殖抑制效应:生长曲线示增殖速度减慢(P<0.01);在平皿上的集落形成能力下降(38±3.05)%;MTT法结果显示增殖抑制率增加(P<0.01);细胞周期显示G0/G1期比例增加(58.41±0.94)%.转染反义TIMP-1对卵巢癌细胞A2780呈现促增殖效应:生长曲线示增殖速度加快(P<0.01);在平皿上的集落形成能力增强(59±2.08)%;MTT显示增殖抑制率减小(P<0.01);细胞周期显示G0/G1期比例减小(44.82±0.31)%.[结论]体外转染TIMP-1基因提高TIMP-1的表达可抑制卵巢癌细胞的增殖,TIMP-1可能成为卵巢癌基因治疗的一个新靶点. 相似文献
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华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]探讨华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡的影响。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)观察华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响;采用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)及AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡情况;采用逆转录—多聚酶链反应技术(RT-PCR)检测华蟾素注射液对HepG-2细胞TopoⅠ、TopoⅡmRNA水平表达的影响。[结果]华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖具有抑制作用,其抑制效应具有时间和浓度依赖性;华蟾素注射液作用HepG-2细胞后可见凋亡形态学变化,部分细胞体积变小,染色质浓缩边集,呈时间和浓度依赖性(P〈0.05);PT-PCR法检测表明华蟾素注射液抑制HepG-2细胞TopoⅠ、TopoⅡmRNA表达,表现浓度依赖性。[结论]华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,可能通过下调TopoⅠ、TopoⅡ表达实现的。 相似文献
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过氧化酶存在溶酶体内,即A颗粒中,但事实上有A颗粒过氧化酶可为阴性;没有A颗粒,此酶也可为阳性。如淋巴细胞有A颗粒,但颗粒中没有此酶所以阴性;此外原粒细胞在光镜下,没A颗粒,但是此酶的溶酶体在生成中,所以过氧化酶可为阳性。过氧化酶对FAB白血病及MDS分型转型有重要价值,成为FAB白血病及MDS分型必不可少的 相似文献
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目的:探讨高糖(HG)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)活性氧簇(ROS)、JAK2/STAT5信号通路与金属蛋白酶1组织抑制剂(TI MP-1)之间的关系及对其凋亡的影响。方法:在HG培养条件下的RMC中,根据是否使用DPI(NADPH氧化酶特异性抑制剂,可抑制ROS产生)和AG490(JAK2特异性抑制剂)刺激24 h,将RMC分为HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组四组。采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,RT-PCR检测各组RMC Bcl-xl、Cyclin D1、P27kip1、JAK2和TI MP-1 mRNAs的表达,Western blot检测胞浆中JAK2、STAT5及相应磷酸化蛋白的表达。结果:HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组的细胞总凋亡率分别为:(10.69±0.26)%、(20.52±0.51)%、(24.56±0.36)%和(26.01±0.28)%;加入AG490和(或)DPI后RMC总凋亡率明显升高(P<0.01),Bcl-xl、Cyclin D1、JAK2和TI MP-1 mRNAs表达显著减少,P27k... 相似文献
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[目的]探讨姜黄素对人肝癌SMMC7721细胞株的生长凋亡作用及机制。[方法]用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响;应用流式细胞术检测不同浓度姜黄素对SMMC7721细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。[结果]姜黄素对SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用,在6.25~50μmol/L范围内成剂量依赖性,与对照组相比差异具有显著性意义,P〈0.01。姜黄素6.25、12.5、25、50μmol/L诱导SMMC7721细胞24 h的凋亡率为6.3%、7.2%、37.3%、72.3%,线粒体膜电位下降为6.3%、13.8%、47.8%和87.9%。[结论]姜黄素可通过诱导细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,并与线粒体膜电位降低相关。 相似文献
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目的:探讨高糖(葡萄糖25mmol/L)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)对血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:用高糖培养基体外培养未转染及分别用pcDNA3空载体、人反义TIMP-1基因重组真核表达载体转染的RMC24h,将细胞分为未转染组、空载体组及反义组,并设正常培养条件下的RMC作为正常对照组。RT-PCR检测各组RMC TIMP-1、VEGF及TGF-β1mRNA的表达。Western印迹检测胞质中TIMP-1、VEGF及TGF-β1蛋白的表达。免疫荧光检测各组RMC胞质中VEGF的表达。结果:高糖培养条件下未转染组及空载体组RMC大鼠TIMP-1、VEGF及TGF-β1mRNA表达均较对照组明显增加(P<0.01),而此两组间相应指标表达差异无统计学意义;反义组大鼠TIMP-1、VEGF mRNA表达较未转染组显著降低(P<0.01),而TGF-β1 mRNA表达则无变化。Western印迹也得到相同的结果。免疫荧光检测发现,未转染组及空载体组VEGF荧光表达较对照组显著增强,反义组荧光则较未转染组明显减弱。结论:高糖可促进RMC TIMP-1、VEGF及TGF-β1表达增加。在高糖条件下,TIMP-1可能位于VEGF上游,促进其表达;而TGF-β1表达并不受TIMP-1调控,高糖可能通过其他途径上调其表达。 相似文献
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目的通过对非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血生存素(Survivin)mRNA及细胞角蛋白19(CK19)mRNA的检测;探讨其对NSCLC诊断的临床价值和意义。方法采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测55例非小细胞肺癌患者、60例对照组的外周血Survivin mRNA和CK19 mRNA的表达情况。结果 Survivin mRNA和CK19 mRNA在NSCLC组的阳性率显著高于对照组(P〈0.01)。阳性表达率与临床TNM分期有关(P〈0.01),与性别、年龄、病理组织类型无关(P〉0.05)。Survivin mRNA和CK19 mRNA联合检测,高于任一单一指标的检测(P〈0.05)。结论外周血Survivin、CK19 mRNA可作为早期辅助诊断NSCLC及微转移的一个有价值的肿瘤标志物。联合检测有较高的检出率。 相似文献
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[目的]研究一种简便、快速的能获取较高病毒滴度的体外培养方法.[方法]用质脂体转移法将逆转录病毒载体pLXIn转染到包装细胞PA317中,用G418筛选出抗性克隆,扩大培养,再收集上清,并测定病毒滴度.比较不同方法产生病毒的多少,为提高病毒滴度而进一步感染靶细胞奠定良好的实验基础.[结果]改良后的新方法(低温32℃、无CO2条件以及反复冻融法)较常规方法(37℃、5% CO2)可提高病毒滴度至少10倍.PTs,Ptas和PLXIn组病毒颗粒数分别提高到1.3×105CFU/ mL、1.2×105CFU/ mL、1.5×105 CFU/ mL.[结论]逆转录病毒滴度测定新方法简便、快捷,能获取较高病毒滴度. 相似文献