恶性疟原虫FCCl／HN株MSAl全基因编码区的体外扩增

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSA1)是抗疟疫苗的候选抗原之一。据已知的MSAl基因序列，自行设计合成了四对引物。应用PCR技术，分四段从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组DNA中扩增出垒基因编码区序列。扩增产物经1．2％琼脂塘凝腔电泳鉴定．表明获得了正确的MSA1基因扩增片段。     

人血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及真核表达

【目的】为研究canstatin对动脉粥样硬化斑块的稳定作用，克隆人canstatin基因，并在COS7细胞中表达出具有生物活性的canstatin。【方法】利用RT-PCR技术，从人脐静脉血管内皮细胞中扩增canstatln cDNA，并定向克隆入真核表达载体pSecTas2C中。用脂质体转染法，将重组质粒pSccTag2C-canstatin转入COS7细胞。培养48h后，对转化的COS7细胞行PGR和Western-blot鉴定。用MTF法检测canstatin对人脐静脉血管内皮细胞增殖的抑制作用。【结果】从人脐静脉血管内皮细胞中扩增出canstatin cDNA片段。测序结果显示，克隆的canstatin cDNA长684bp，序列与献报道一致。从pSecTag2C-canstatin转化的COS7细胞中能特异地扩增出canstatin基因片段，Westem—blot结果显示，转化的COS7细胞中有特异的34kDa的canstatin表达。MTF检测显示，表达canstatin的COS7细胞上清能呈剂量依赖性地抑制脐静脉血管内皮细胞的增殖。【结论】构建了真核表达重组质粒pSecTag2C-canstatin，在COS7中表达出具有生物活性的人canstatin。     

恶性疟原虫红内期PF332抗原基因未知片段的体外扩增与克隆

根据恶性疟原虫FCCI／NH株PF332基因片段5’端巳知序列，设计台成了一条特异引物(SP)；报据PF332基因的结构特点，又设计合成了一条非特异引物(NSP)。应用低严谨PCR技术(LSPCR)，从恶性疟原虫FCC1／FN株基因组DNA中扩增出一系列PF332基因未知片段。利用T-A克隆法将一560bp大小的片段克隆入测序用PMD-18T载体。限制性内切酶酶切及PCR扩增鉴定表明重组正确。     

巨噬细胞移动抑制因子诱导血管生成相关基因的表达

【目的】研究巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对人血管内皮细胞表达血管生成相关基因的诱导作用。【方法】通过亚克隆，构建原核表达质粒pET22b—MIF，并转化人工程菌BL21（DE3）。用Ni-亲合柱分离纯化BL21（DE3）中经IPTG诱导表达的重组MIF。用巨噬细胞移动抑制试验鉴定复性的重组MIF的活性。分别用0、30、60、120ng／mL的重组MIF处理人血管内皮细胞12h，通过Real—time定量PCR检测人血管内皮细胞中VEGF165、FGFR3、MMP9、TGF—α、PDGF-α的mRNA表达。用体外血管生成试验检测重组MIF诱导人血管内皮细胞的成管腔作用。【结果】正确构建了重组质粒pET22b—MIF。经IPTG诱导，在大肠杆菌中以包涵体形式表达出重组MIF。复性的重组MIF对巨噬细胞移动的抑制水平达30％（P〈0．05）。重组MIF能特异地诱导HVECs中VEGF165、FGFR3、MMP9、TGF—α、PDGF-α表达，并能特异地诱导人血管内皮细胞形成管腔结构。【结论】在大肠杆菌中成功表达出MIF，MIF能特异地诱导人血管内皮细胞中血管生成相关基因的表达。     

人血管内皮生长因子（VEGF165）在大肠杆菌中的表达及鉴定

【目的】克隆人VEGF165基因，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达、纯化重组VEGF165(rVEGF165)蛋白。【方法】用PCR技术，从人心脏cDNA库中扩增VEGF165 cDNA，并定向克隆入原核表达载体pET-28a中。用IPTG诱导VEGF165在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。用HisTrap亲合层析柱纯化重组rVEGF165 Western—blot鉴定。根据人VEGF165的促血管内皮细胞增殖的特性，用MTT法检测重组VEGF165的生物学活性。【结果】从人心脏cDNA库中扩增出VEGF165 cDNA片段。克隆的VEGF165 cDNA长576bp，编码191个氨基酸残基，序列与献报道一致。SDS-PAGE电泳显示，经IPTG诱导，高效表达出25ku的rVEGF165，主要存在于包涵体中，约占菌体总蛋白的20％。MTT检测显示，复性后的rVEGF165能呈剂量依赖性地促进脐静脉血管内皮细胞增殖。【结论】克隆、测定了人VEGF165基因，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出rVEGF165。     

以重组CD74胞外片段抑制巨噬细胞移动抑制因子（MIF）功能域活性

目的：巨噬细胞移动抑制因子（MIF）第50-65位氨基酸残基（MIF50-65）是其生物活性功能域。MIF需与Ⅱ型穿膜蛋白CD74的胞外片段结合后引发信号传导反应。本文拟筛选能特异结合MIF50-65的CD74胞外截短体片段，并研究重组该CD74截短体对MIF50-65活性的抑制作用。方法：利用酵母双杂交实验筛选MIF50-65与CD7473-149、CD74109-149、CD74109-232、CD7473-232中特异结合的CD74截短体。利用原核表达系统，在大肠杆菌中诱导表达重组CD74截短体多肽。用GSTrap亲合柱纯化重组蛋白，通过体外血管生成实验鉴定重组CD74截短体对MIF的阻断作用。结果：只有MIF50-65与CD7473-232共转化的酵母可以在SD／-Leu-His-Trp-Ade培养基上生长，且α-x-gal底物反应为蓝色。构建了重组质粒pGEX-4T-CD7473-232，经IPTG诱导后特异表达出可溶性的重组蛋白。重组CD7473-232能特异地阻断MIF的促血管生成作用。结论：CD7473-232能与MIF50-65特异结合，并对MIF生物活性有抑制作用。     

纳米磁性干扰素脂质体在裸鼠移植性人肝癌靶向治疗过程中对VEGF和Caspase-3表达的影响

目的研究纳米磁性重组人干扰素-α2b脂质体在裸鼠移植性人肝癌靶向治疗过程中对移植瘤模型中瘤组织VEGF和Caspase-3表达的影响。方法30只荷瘤裸鼠随机分成5组,每组6只,尾静脉注射给药〔生理盐水组,NS组:0IUIFN.(200μl)-1;游离干扰素组,IFN组:10000IUIFN.(200μl)-1;脂质体干扰素组,IL组:1000IUIFN.(200μl)-1;磁性空白脂质体组,ML组:0IUIFN.(200μl)-1;磁性干扰素脂质体组,MIL组:1000IUIFN.(200μl)-1〕,在肿瘤部位施加30min外磁场(5000GS),共进行3次,治疗后d30处死动物,测瘤体积、称瘤重并计算抑制率。采用RT-PCR法检测各组肿瘤组织VEGF和Caspase-3mRNA表达,Westernblot法检测各组肿瘤组织VEGF和Caspase-3蛋白表达。结果MIL对人肝癌移植瘤有明显抑制作用,抑瘤率为62.50%,高于IFN(27.61%)和IL(28.17%);RT-PCR显示MIL的VEGF mRNA表达明显低于对照组和其它实验组(P<0.01),而MIL的Caspase-3mRNA表达明显高于对照组和其它实验组(P<0.01);Western blot显示MIL的VEGF蛋白表达明显低于对照组和其它实验组(P<0.01),而MIL的Caspase-3蛋白表达明显高于对照组和其它实验组(P<0.01)。结论在外加磁场作用下,MIL在体内有明显的靶向治疗肿瘤效果:通过下调VEGF、上调Caspase-3在mRNA和蛋白方面的表达,能够抑制肿瘤血管增生和促进肿瘤细胞凋亡,从而进一步抑制肝癌的生长与转移。     

尼莫地平治疗高原反应性头痛47例

目的 观察尼莫地平治疗高原反应性头痛的有效性和安全性。方法 以快速进藏人员为研究对象，采取区组随机法将高原反应性头痛患者94例随机分为对照组和治疗组各47例。对照组采取休息、减少活动等常规治疗；治疗组在常规治疗基础上，口服尼莫地平片20 mg, tid,治疗3 d于第4天进行疗效评估，随访1周。采用数字评定量表(NRS)评定治疗效果，同时统计尼莫地平主要不良反应低血压的发生率。结果 治疗组完成观察45例，有效率84.44%,控制率88.89%;对照组完成观察46例，有效率41.30%,控制率58.70%,两组有效率和控制率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组低血压发生率为4.3%,对照组为2.1%(P>0.05)。结论 尼莫地平对高原反应性头痛有明显效果，且安全性较高。