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1.
目的改构α-防御素-1(HNP-1)使其成为一端带J链的改构体J-HNP-1分子,并探索建立能有效表达和分泌J-HNP-1,其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳动物细胞表达系统。方法利用重组PCR技术,使HNP-1一端带上J链;将J-HNP-1 DNA片段插入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-HisC中,构建出C端带Myc和6×His的rpcDNA3.1(-)/Myc-HisC/J-HNP-1;将此重组真核表达载体导入COS-7细胞,分别从mRNA和蛋白质水平分析J-HNP-1的表达情况,并同步检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性。结果采用RT-PCR法从被转染的细胞中扩增出1条约786bp的片段,其大小与预测相符;采用Western印迹法,用抗His抗体检测到细胞可溶性蛋白及培养上清在相对分子质量约24×103处有强反应条带显示;细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性检测显示,经rpcDNA3.1(-)/Myc-HisC/J-HNP-1转染的COS-7细胞的可溶性蛋白和培养上清均有明显的抗菌活性。结论α-防御素-1(HNP-1)被成功改构成杀菌肽J-HNP-1;所建立的J-HNP-1哺乳动物细胞表达载体系统能有效表达和分泌活性J-HNP-1。 相似文献
2.
目的:探讨中药祛湿解毒软坚汤治疗囊肿性痤疮的疗效及安全性。方法将139例囊肿性痤疮随机分为观察组70例和对照组69例。观察组口服祛湿解毒软坚汤,每天1剂,对照组口服阿维A胶囊每次10 mg,每天3次,疗程均为6周,对比分析两组的治疗效果、安全性及停药1个月时复发情况。结果治疗6周时观察组总有效率为90.0%(63/70),对照组为85.5%(40/69),两组比较,差异无统计学意义(P〉0.05);停药1个月时两组总有效率分别为85.7%(60/70)和66.7%(33/69),观察组的疗效显著高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.01);观察组不良反应率为8.6%(6/70),对照组为37.7%(26/69),观察组安全性显著优于对照组,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论祛湿解毒软坚汤治疗囊肿性痤疮疗效肯定,安全性高,复发率低。 相似文献
3.
目的将α-防御索-1(HNP-1)基因与J链基因重组为一种新的杀菌肽分子J-HNP-1,观察J-HNP-1在细胞内的表达及分泌情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法分别从pCH-J质粒和pBabeNco-HNP-1质粒中扩增出J链和HNP-1;进行重组PCR,获取J-HNP-1 DNA片段.并插入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-HisC中;用脂质体转染法将此重组真核表达载体导入COS-7细胞。然后应用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测His-tag标签基因。结果用抗His抗体检测到细胞可溶性蛋白及培养上清在约24ku处均有强反应条带显示,其大小与预测相符;对照组未见相应条带显示。结论采用Western blot检测到新的杀菌肽分子J-HNP-1在细胞内得到表达并分泌到细胞外.为进一步研究J-HNP-1杀菌肽的抗菌活性奠定了基础。 相似文献
4.
为探讨烧伤后回肠粘膜的病理变化,肠粘液及其中IgA成分的变化及这些变化与肠源性感染的关系,我们利用小鼠制作TBsA25%Ⅲ度烧伤模型,分别于伤后0.5、1、6、12、24小时观察;①小肠末端的病理病变;②测定小肠粘液层厚度及粘液中蛋白、己糖、唾液酸的含量;③检测粘液IgA血清IgA及粘膜固有层中分泌IgA浆细胞数;④各时相小肠系膜淋巴结的细菌培养。结果表明:伤后小肠出现病理改变,粘液成分有变化,粘液中IgA含量持续下降且与肠源性感染发生关系密切。 相似文献
5.
目的:观察特异IgA抑制白色念珠菌(白念菌)粘附的作用.方法:首先建立肠上皮细胞IEC-6在玻片表面生长模型;将特异IgA阳性肠粘液、阴性肠粘液以及抗IgA血清中和后的肠粘液分别作用白念菌,收集菌并与上述细胞共同孵育.计数粘附数,并换算出抑制率.结果:含有特异抗白念菌IgA的肠粘液抑制白念菌优于其它肠粘液.结论:特异IgA在肠粘液中起重要的抗粘附作用. 相似文献
6.
一种改良的质粒DNA的快速提取方法 总被引:8,自引:0,他引:8
目的:建立一种确实有效的更实用的小量质粒DNA的提取方法。方法:将一含有目的质粒的大肠杆菌扩增后采用改良后的方法提取质粒DNA,然后采用紫外分光光度计测定含量,并且进行酶切。结果:每毫升原细菌培养物质粒DNA的产量明显增高,且酶切效果极好。结论:改良后的质粒DNA提取法具有速度快、收获量多、纯度高、经济又方便等优点,适合于应用与推广。 相似文献
7.
目的:观察特异IgA抑制白色念珠菌(白念菌)粘附的作用:方法:首先建立肠上皮细胞IEC-6在玻片表面生长西式,将特异IgA阳性肠粘液、阴性肠粘液以及抗IgA血清中和后的肠粘液分别作用白念菌,收集菌并与上述细胞共同孵育。计数粘粘数,并换算出抑制率。结果:含有特异抗白念菌IgA的肠粘液抑制白念菌优于其它肠粘液。结论:持异IgA在肠粘液中起重要的抗粘附作用。 相似文献
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目的 本实验拟建立一种更经济、实用、简便又快速的RNA制备方法。方法 利用改进后的方法及试剂盒提取烧伤后小鼠小肠潘式结组织中的RNA,紫外分光光度计测定Dλ值、电泳、然后进行RT-PCR。结果 1紫外分光光度计测定所提RNA D260/D280比值均在2.0左右。第1g小鼠小肠潘氏结组织RNA的平均产量为300~500μg。(2)RNA甲醛变性琼脂糖凝胶电泳显示所提总RNA完整性好。(3)RT-P 相似文献
10.
目的 探讨前臂远端贵要静脉转位建立自体血管内瘘的方法.方法 自2007年12月至2010年3月,对维持性透析29例进行前臂远端贵要静脉转位建立自体血管内瘘手术治疗.29例中有18例为原桡动脉-头静脉内瘘因并发症失去功能,11例初次行血管内瘘手术.手术方式采用贵要静脉转位与肱动脉端侧吻合10例;贵要静脉转位与桡动脉端端吻合13例;贵要动脉与尺动脉端侧或端端吻合6例,吻合口直径为5.0~8.0 mm.结果 29例中,1例术后血肿压迫闭塞,2例术后内瘘成熟不良,其余手术一次取得成功,术后血流量达200~350 ml/min.对心功能未造成不良影响,未出现严重并发症.结论 前臂远端贵要静脉转位建立自体血管内瘘手术,是尽量利用自身血管条件,建立内瘘的一种行之有效的方法. 相似文献