中医药系统评价实践中的常见问题及应对思路——以附子为例

随着循证医学在我国的逐步发展,循证医学理念深入人心。中医药领域在吸收借鉴循证医学循证及其相关学科的研究方法和成果,并结合中医药自身特点的基础上,逐步形成了循证中医药学并取得了显著发展。中医药系统评价作为循证中医药学的主要任务之一,也正受到越来越多的关注。虽然每年发表的中医药系统评价也不断增加,但研究质量参差不齐,仍需进一步提高。鉴于中医药诊治过程的复杂性,疗效评价指标的主体性,并结合现实需要,本文就以常用有毒中药附子为例,探讨在中医药系统评价的实践过程中可能面临的问题及可能的应对办法,为开展中医药系统评价提供借鉴,推动循证中医药学的发展。     

补气活血生发酊对小鼠雄激素性脱发的影响

目的观察补气活血生发酊对小鼠雄激素性脱发的影响。方法利用丙酸睾酮注射KM小鼠建立雄激素性脱毛模型,小鼠随机分为空白组、模型组、米诺地尔擦剂组及补气活血生发酊低、中、高剂量组,每日涂抹相应药物1次,连续30 d。肉眼及毛发镜观察小鼠毛发脱落情况,HE染色观察小鼠病理组织及毛囊相关指标,测定小鼠血清睾酮、雌二醇以及HGF水平,免疫组化及Western blot法检测HGF蛋白表达。结果补气活血生发酊可使雄激素性脱毛模型小鼠毛发脱落减少,降低血清睾酮水平(P<0.01),升高E2、HGF水平(P<0.05)。结论补气活血生发酊具有一定促进毛发生长的作用,其育发机制可能与调节雄性激素水平有关。     

罗汉果苷的药理和毒理作用研究进展

目的 概述罗汉果苷的药理和毒理作用,为后续研究提供科学依据。方法 查阅中国知网、万方数据、SinoMed及PubMed数据库中罗汉果苷相关的各类科研文献200余篇,经主题筛选后进行分类总结,并用关联性文献进行进一步支撑,最终选用45篇文献作为本文的参考。结果 罗汉果苷基本无毒,且具有抗氧化、调节血糖等多种生物活性。结论 罗汉果苷是一种安全性较高的天然活性物质。但现阶段研究多以罗汉果提取物中的总苷为主,因此对罗汉果苷的分离纯化以及其单体的药理/毒理作用分子机制的研究尤为迫切。     

DNA碱基切除修复基因与化疗敏感性的研究

抗癌药物作用后,肿瘤细胞的DNA损伤修复是耐药性产生的重要机制。目前,碱基切除修复(BER)已被证实与DNA损伤型化疗药物的敏感性有关。鉴于国内这方面的研究较少,且缺乏系统的文献综述,本文重点介绍BER过程的最新研究进展以及BER中的关键基因与化疗敏感性及耐药性之间的关系。     

四川省雅安市大学生膳食营养状况调查

目的了解四川省雅安市大学生膳食营养状况,为提高大学生营养水平提供理论依据。方法分层整群随机抽取雅安市2所高校一至三年级学生655人,采用24 h膳食回顾记录表和营养与健康认知KAP问卷进行调查。结果大学生摄入水果和蛋类偏低,摄入蔬菜、水产品和奶及奶制品不足,摄入油和盐偏高,摄入钠严重偏高,摄入维生素B1、硒和男生摄入锌不足。调查学生有98人偏瘦,其中女生80人,占81.63%。男生比女生花费更多时间运动,差异有统计学意义(t=-2.238,P0.05)。营养专业学生的各营养知识正确率普遍高于非营养专业学生,差异具有统计学意义(P0.05),且营养专业学生的早餐行为较好,每日摄入不重复的食物种数超过12种和每日食物类型以动植物均等的人数均比非营养专业学生多。结论雅安市大学生膳食结构有待改善,部分营养物摄入不均衡。建议学校向学生普及膳食营养知识及加强健康营养教育,提倡大学生饮食多样化。     

凋亡诱导因子AIF基因真核表达载体的构建及表达

目的 利用TA克隆法构建凋亡诱导因子(AIF)的真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),并研究其在人肺腺癌A549细胞中的表达.方法 根据GenBank上AIF的mRNA序列设计特异性引物,以A549细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增AIF基因.并用TA克隆法,将AIF目的基因连接到pUC-T载体,行双酶切和DNA测序鉴定;回收目的片段并将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)构建重组质粒AIF-pcDNA3.1(+).最后,将A IF-pcDNA3.1(+)转染A549细胞,RT-PCR和Western blot检测转染细胞AIF基因的表达.结果 成功扩增617 bp的AIF目的基因片段并连接pUC-T载体,测序后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,DNA序列分析显示,连接在真核表达载体上的基因片段与GenBank中的AIF序列完全吻合.RT-PCR和Western blot检测结果显示,转染了AIF-pcDNA3.1(+)的A549细胞AIF mRNA和蛋白表达水平均高于未转染细胞(P＜0.05).结论 成功构建了真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),转染后能够在A549细胞中表达.     

DNA聚合酶β对细胞生物学特性及DNA损伤的影响

目的 探讨DNA聚合酶β(pol β)的表达水平对细胞的生物学特性及重铬酸钾诱导的DNA损伤效应的影响.方法 以pol β野生型(pol β+/+)、pol β缺陷型(pol β-/-)及pol β 高表达型(pol β oe)小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色法绘制3种细胞的生长曲线;群体倍增实验观察3种细胞的倍增时间;HGPRT基因突变实验检测细胞的自发突变频率;同时用单细胞凝胶电泳实验分析3种细胞的自发DNA损伤和重铬酸钾诱导的DNA损伤效应的差异.结果 3种细胞生长曲线和群体倍增时间基本一致,细胞自发突变频率和自发DNA损伤差异也无统计学意义(P0.05);随着重铬酸钾浓度的增加,3种细胞的拖尾率和尾长均增加,在相同重铬酸钾染毒浓度下pol β缺陷型细胞的DNA损伤明显大于pol β野生型和高表达型细胞, 且以pol β高表达型细胞的DNA损伤效应最弱.结论 pol β表达水平对细胞的生长特征无明显影响,也不会造成细胞自发突变的增加;pol β基因缺陷使细胞对重铬酸钾诱导的DNA损伤更敏感,而高表达则对DNA损伤具有一定保护作用.     

亚砷酸钠对DNA损伤修复的抑制实验

[目的]探讨砷化物的毒作用机制. [方法]MTT实验检测亚砷酸钠对A549细胞的细胞毒性,彗星实验观察其单独作用时细胞的DNA损伤效应;然后以3因素析因设计的彗星实验分析亚砷酸钠对苯并(a)芘(BaP)所致的DNA损伤效应的影响. [结果]随着亚砷酸钠浓度的增加,细胞存活率下降;在彗星实验中,当亚砷酸钠单独作用时,各浓度组细胞拖尾率与阴性对照组相比无统计学差异;联合BaP染毒,当BaP浓度一定时,亚砷酸钠浓度越高细胞拖尾率也越高,显著增强了BaP所致的DNA损伤效应.且亚砷酸钠预作用24 h后观察到的DNA损伤较同时染毒和BaP预作用24 h观察到的DNA损伤更为严重. [结论]亚砷酸钠不直接损伤DNA,能降低细胞DNA损伤的修复,从而增强另一种基因毒物所致的DNA损伤作用.     

竹叶花椒提取物诱导BRL 3A细胞产生DNA损伤和凋亡的机制研究

目的 探讨竹叶花椒甲醇提取物(ZADCM)对大鼠肝细胞BRL 3A的DNA损伤和凋亡的潜在作用机制。方法 体外培养大鼠正常肝细胞(BRL 3A),CCK-8法测量细胞毒性,荧光探针测定ROS变化,微核实验检测细胞染色体损伤,彗星实验检测DNA损伤,流式细胞术测定细胞凋亡情况,Western blot测定DNA损伤相关蛋白以及凋亡相关蛋白表达量。结果 随着ZADCM浓度增加,细胞存活率下降,具有时间-剂量关系;ZADCM可以剂量依赖方式诱导细胞内ROS累积,导致染色体损伤与DNA损伤,表现为微核细胞率、细胞尾长、尾部DNA含量、OTM值以及γH2AX、p-ATM和p-Chk2表达量升高;并进一步诱导细胞凋亡。结论 竹叶花椒甲醇提取物可导致细胞存活率下降,直接诱导细胞内ROS升高,进一步引起细胞染色体损伤和ATM介导的DNA损伤,最终导致细胞凋亡。     

香烟烟雾对人支气管上皮细胞的氧化损伤研究

目的 探讨香烟烟雾对人支气管上皮细胞氧化损伤的影响,评价氧化损伤效应在香烟烟雾致肺癌中的作用.方法 体外培养人支气管上皮细胞(HBE),以DMSO作为吸收液采集香烟主流烟雾,MTT比色法测量香烟烟雾对HBE细胞的毒性,彗星实验和微核实验分别检测细胞DNA链断裂和细胞染色体损伤,同时使用荧光探针测定细胞内活性氧(ROS)的含量.结果 随着香烟烟雾浓度的增加,HBE细胞存活率逐渐下降;随着染毒时间的延长,香烟烟雾对HBE细胞的半数抑制浓度(IC50)逐渐降低,显示明显的剂量-效应和时间-效应关系.香烟烟雾可以诱导HBE细胞DNA链断裂,表现为细胞拖尾率增加,同时尾长、尾部DNA含量和Olive尾距均随香烟烟雾浓度增加而增大.香烟烟雾亦可诱导HBE细胞染色体损伤,当香烟烟雾浓度≥1支/L时,实验组微核率与对照组比差异均有统计学意义(P＜0.05).此外,HBE细胞ROS生成量与香烟烟雾浓度呈剂量-效应关系.结论 香烟烟雾可以直接诱导人支气管上皮细胞ROS增加,从而造成细胞毒性增加、染色体损伤和DNA链断裂,提示氧化损伤是香烟烟雾致肺癌的重要机制.