上调Klotho基因表达对心肌梗死大鼠心功能及心肌纤维化的影响

目的 探讨上调Klotho基因表达对心肌梗死大鼠心功能及心肌纤维化的影响.方法 60只雄性SD大鼠,按随机数字表法分为假手术组、模型组、空白质粒组和Klotho转染组,制备大鼠急性心肌梗死模型,Klotho转染组分别于左心室游离壁上、下、左、右四个部位进行局部注射携带Klotho基因的质粒,模型组和空白质粒组则分别将等量的生理盐水和空白质粒进行局部注射.各组14 d后,利用超声心动图对存活51只大鼠心功能进行检测,TTC法检测大鼠心肌梗死面积,采用免疫组织化学和Masson三色染色法检测各组大鼠心肌组织病理学和纤维化,利用实时荧光定量PCR技术和Western blot法分别对各组大鼠心肌组织中Klotho、转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)基因和蛋白表达进行检测.结果 模型组左心射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)、心室收缩末期内径(LVDs)和左心室舒张末期内径(LVDd)分别为(49.82±3.41)％、(48.07±2.36)％、(6.09±0.80)mm和(8.39±0.47)mm,空白质粒组则分别为(52.20±2.55)％、(29.95±2.39)％、(6.17±0.82)mm和(8.30±0.62)mm,与模型组和空白质粒组相比,Klotho转染组大鼠LVEF和FS[(68.67±3.76)％、(40.08±3.83)％]均升高,而LVDs和LVDd[(5.51±0.59)mm、(6.74±0.50)mm]均降低(F=306.935、117.659、24.530、58.090,P<0.001);假手术组大鼠心肌梗死面积为0.00％,模型组和空白质粒组大鼠心肌梗死面积分别为(37.34±0.52)％、(36.51±0.48)％,两组均高于Klotho转染组的(24.82±0.24)％(F=44.195,P<0.001);与模型组和空白质粒组相比,Klotho转染组间质纤维化面积(21.62±2.38)％减少(F=52.942,P<0.001);模型组大鼠心肌组织中Klotho、TGF-β1、CTGF基因和蛋白相对表达量分别(1.31±0.12)和(0.52±0.07)、(1.98±0.17)和(0.86±0.09)、(2.38±0.09)和(0.92±0.11),空白质粒组则分别为(1.33±0.16)和(0.54±0.13)、(1.96±0.16)和(0.85±0.11)、(2.43±0.10)和(0.88±0.14),与模型组和空白质粒组相比,Klotho转染组大鼠心肌组织中Klotho基因和蛋白相对表达量[(1.80±0.16)、(0.68±0.07)]升高(F=110.443、26.336,P<0.001),而TGF-β1、CTGF基因和蛋白相对表达量[(1.52±0.12)和(0.50±0.05)、(1.89±0.12)和(0.70±0.13)]均降低(F=94.409和125.076、362.350和74.300,P<0.001).结论 上调Klotho基因表达可有效改善心肌梗死大鼠心功能,减轻心肌纤维化,其机制可能与抑制TGF-β1、CTGF基因表达有关.     

shRNA 沉默趋化素对小鼠主动脉平滑肌细胞增殖能力的影响及可能的机制

目的 探讨shRNA 沉默趋化素（Chemerin）对小鼠主动脉平滑肌细胞增殖能力的影响及可能的 机制。方法 构建Chemerin 基因RNA 干扰慢病毒载体，培养小鼠主动脉平滑肌细胞（ASMC），分成4 组： Sham 组、PDGF 组、对照序列组和Chemerin 沉默组。Chemerin 沉默组和对照序列组分别转染携带Chemerin 干扰基因和对照基因序列的慢病毒，分别向PDGF 组、对照序列组和Chemerin 沉默组细胞中加入PDGFBB， Sham 组则加入等量的PBS。利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞中Chemerin 基因表达，细胞计数实验和BrdU 掺入法测定各组细胞增殖能力，Western blot 法检测各组细胞中Chemerin、 ERK1/2、p-ERK1/2、JNK 和p-JNK 蛋白表达。结果 Chemerin 沉默组细胞中Chemerin 基因和蛋白相对表 达量分别为（0.35±0.09）和（0.32±0.09），与其他3 组比较，差异有统计学意义（P <0.05），均低于其他3 组， 且对照序列组和PDGF 组均高于Sham 组；Chemerin 沉默组细胞数和吸光度A 值分别为（34.27±3.08）×103 个/cm2 和（1.26±0.07），与其他3 组比较，差异有统计学意义（P <0.05），均低于其他3 组，且对照序列组和 PDGF 组均高于Sham 组；Chemerin 沉默组细胞中ERK1/2 和JNK 蛋白相对表达量高于对照序列组和PDGF 组， 低于Sham 组，Chemerin 沉默组细胞中p-ERK1/2 和p-JNK 蛋白相对表达量低于其他3 组，而对照序列组和 PDGF 组高于Sham 组，均差异有统计学意义（P <0.05）。结论 特异性沉默Chemerin 基因可阻止ASMC 的 增殖作用，其机制可能与抑制ERK1/2 和JNK 信号通路有关。     

右美托咪定联合胸椎旁神经阻滞应用于开胸食管癌根治术术后镇痛效果分析

目的 探讨右美托咪定联合胸椎旁神经阻滞(TPVB)应用于开胸食管癌根治术对术后镇痛的影响。方法 102例行开胸食管癌根治术患者按随机数字表法分为联合组和单用组,每组51例,麻醉诱导前,两组患者均行超声引导下TPVB,联合组给予含0.75 μg·kg-1右美托咪定的0.5%罗哌卡因20 mL,单用组给予0.5%罗哌卡因20 mL,30 min后行全麻诱导。术后镇痛:两组患者均于手术结束时行椎旁自控镇痛,泵内含0.5%罗哌卡因100 mL,联合组同时使用微量注射泵泵入右美托咪定0.1 μg·kg-1·h-1。分别于首次TPVB前(T₀)、给药后30 min(T₁)、气管插管后(T₂)、切皮(T₃)、肿块切除(T₄)时,记录两组患者平均动脉压(MAP)、心率(HR)、脑电双频谱指数(BIS)、血氧饱和度(SpO₂),分别于术后2 h(T₅)、6 h(T₆)、12 h(T₇)、24 h(T₈)和48 h(T₉)时,利用视觉模拟评分法(VAS)评分系统对患者疼痛进行评分,记录两组患者术后24 h内吗啡追加次数、咪达唑仑追加次数,以及不良反应发生情况。结果 与T₀时相比,联合组MAP在T1～4时先降低后升高,HR在T₁时降低,BIS在T1～4时降低,单用组MAP和HR在T2～4时升高,与单用组相比,联合组MAP和HR在T1～4时降低,BIS在T1～2时降低,SpO₂在T₃时升高,差异有统计学意义(P<0.05);联合组患者T5～9时VAS评分均低于单用组,差异有统计学意义(P<0.05);联合组患者术后24 h内吗啡追加次数和咪达唑仑追加次数均少于单用组,联合组患者术后总不良反应发生率低于单用组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 右美托咪定联合罗哌卡因行TPVB应用于开胸食管癌根治术可显著提高麻醉质量,改善术后镇痛效果,减少不良反应的发生。