lncRNA IGF2-AS调控IGF2对骨髓间充质干细胞 心肌样分化的影响

目的 探讨长链非编码RNA胰岛素样生长因子2反义转录物（lncRNA IGF2-AS）调控胰岛素样生长因子2 （IGF2）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）心肌样分化的影响。方法 分离培养SD大鼠的BMSCs,倒置显微镜观察原代 细胞、第3代细胞的形态;流式细胞仪检测BMSCs表面抗原CD29、CD90、CD45的表达。将第3代生长良好的BMSCs 分为对照组、空载体组（转染pLVX-IRES-Zs Green1载体）、lncRNA IGF2-AS组（转染pLVX-IRES-Zs Green1-IGF2- AS）、5-氮杂胞嘧啶（5-AZA）组（8 μmol/L 5-AZA 处理）、si-NC 组、si-IGF2-AS 组、si-IGF2 组、lncRNA IGF2-AS+siNC 组及 lncRNA IGF2-AS+si-IGF2 组。实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测 IGF2-AS 表达;MTT 法检测细胞活力; Western blot检测IGF2、间隙连接蛋白43（Cx43）、心肌肌钙蛋白T（cTnT）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）蛋白表达;RNA下拉 和RNA免疫沉淀（RIP）检测IGF2-AS与IGF2蛋白结合情况。结果 原代细胞在培养初期呈悬浮状态,大多数呈圆 形,培养48 h后开始贴壁生长;第3代细胞呈长梭形,排列不整齐,相邻细胞间紧密连接,呈成纤维细胞样。第3代 BMSCs 高表达 CD29（98.21%）、CD90（92.54%）,低表达 CD45（3.67%）。过表达 IGF2-AS 或 5-AZA 处理均可促进 BMSCs 中 Cx43、cTnT、cTnI 蛋白表达,并降低细胞活力,且 5-AZA 组相应指标明显低于 lncRNA IGF2-AS 组（P＜ 0.05）。沉默IGF2-AS或抑制IGF2表达均可降低BMSCs中Cx43、cTnT、cTnI蛋白表达,并降低细胞活力（P＜0.05）; lncRNA IGF2-AS可靶向上调IGF2蛋白的表达（P＜0.05）;沉默IGF2逆转了过表达IGF2-AS对BMSCs心肌样分化的 促进作用。结论 过表达IGF2-AS通过上调IGF2促进BMSCs心肌样分化。     

糖尿病人围术期的麻醉处理(附9例报告)

糖尿病人男性1例,女性8例,年龄35～69岁,择期手术7例,急诊手术2例,病史2～10年。经服用降糖灵、消渴丸治疗,血糖控制在10mmol/L以下(有1例除外),除急诊手术外,酮体均为阴性。手术前停用降糖药,改皮下注射胰岛素,禁食期输注葡萄糖150～200g/日,按1～2u/10g(葡萄糖)比例应用胰岛素。麻醉全部选用硬膜外阻滞,血压和呼吸平稳。术中根据血糖监测静滴葡萄糖、胰岛素和氯化钾(GIK)溶液,使血糖维持在11～14mmol/L,尿酮阴性水平。     

柴葛解肌汤加减联合西药治疗亚急性甲状腺炎的疗效研究

目的 观察柴葛解肌汤加减联合西药治疗亚急性甲状腺炎（SAT）的疗效及对复发的预防效果。方法将82例急性期SAT患者按随机数字表法分为对照组与观察组各41例。对照组给予西药治疗,观察组在此基础上口服柴葛解肌汤加减方治疗,疗程均为2周。比较两组临床症状改善时间、临床疗效及不良反应,治疗前后检测甲状腺功能指标[促甲状腺激素（TSH）、游离三碘甲状原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）]、氧化应激指标[超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力（TAOC）和丙二醛（MDA）]、炎症指标[超敏C反应蛋白（hs-CRP）、白介细胞素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和血沉（ESR）水平变化。结果 观察组与对照组总有效率相当（P> 0.05）,但观察组的临床控制率46.34%,高于对照组的21.95%(P <0.05);观察组中医证候疗效总有效率100.00%,高于对照组的90.24%(P <0.05)。两组治疗1周与2周后临床证候评分均显著下降,且观察组的评分下降程度均明显低于对照组（P <0.05）,且观察组的退热时间、疼痛消失时间、肿胀消失时间及ESR复常...     

硬膜外麻醉中应用咪唑安定和哌替啶对呼吸功能的影响

硬膜外麻醉中应用咪唑安定和哌替啶对呼吸功能的影响刘洪洋４崔健君５蒋征文４１浙江省金华市中心医院神经外科急诊科麻醉科（３２１０００）２本院急诊科３本院麻醉科４盘锦市妇婴医院麻醉科（１２４０００）５中国医科大学附属第二临床学院麻醉科教研室，沈阳市选择２０...     

HPV31型L2保守中和表位可诱发广谱中和抗体

目的研究人乳头瘤病毒31型(HPV31)次要外壳蛋白L2保守中和表位的免疫活性及诱发抗体的中和范围。方法合成法获得HPV31 L2 aa.17-40多肽,用EDC法偶联KLH,联合弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,用假病毒中和实验检测免疫血清对来自α4、α7、α9、α10及β1亚属的多个HPV型别的中和抗体。结果 HPV31 L2-KLH偶联肽可在新西兰大白兔体内诱发针对至少17种HPV型别的广谱中和抗体,其中HPV31的中和抗体滴度最高,HPV5/45/57的次之。结论首次发现HPV31 L2保守中和表位免疫血清具有广谱中和活性,为基于该表位的广谱HPV疫苗研发奠定了基础。     

HPV31 L1 C端截短基因可在昆虫细胞表达体系中高水平制备L1 VLP疫苗

目的利用昆虫细胞表达体系制备人乳头瘤病毒(HPV)31 L1病毒样颗粒(VLP)疫苗。方法化学合成法获得昆虫Sf9细胞偏性密码子优化的、C端删除27个氨基酸编码序列的HPV31 L1截短基因(HPV31 L1MΔC),构建重组杆状病毒,感染Sf9细胞进行表达;分别采用超声破碎、含离子型表面活性剂(1%SDS等)或含非离子型表面活性剂(0.5%TritonX-100)的裂解缓冲液,制备细胞裂解上清;氯化铯超速离心法纯化后经动态光散射及透射电子显微镜鉴定;0.1μg的HPV31 L1MΔC VLP于第0和2周肌肉免疫BALB/c小鼠,第4周采集血清分析中和活性。结果 3种裂解方法制备的上清均显示HPV31 L1MΔC蛋白的特异表达,其表达量约占裂解上清总蛋白的10%;采用非离子型表面活性剂获得的裂解上清纯化后,目的蛋白纯度高,产量达11.5 mg/L;纯化蛋白的水化分子直径为103.3 nm,均一性好;电镜分析为直径50～60 nm的VLP。免疫血清中HPV31中和抗体滴度为1 440。结论 HPV31 L1MΔC在昆虫细胞表达体系制备的VLP产量高、免疫原性好,可用于生产含HPV31 L1 VLP的多价疫苗。     

微小RNA-22-3p调控Kruppel样因子6表达对骨髓间充质干细胞心肌样分化的影响

目的 探究微小RNA-22-3p(miR-22-3p)调控Kruppel样因子6(KLF6)表达对骨髓间充质干细胞(BMSC)心肌样分化的影响。方法 分离并培养大鼠BMSC,将第3代BMSC分为对照组、5-氮杂胞苷(5-AZA)组、模拟物阴性对照组、miR-22-3p模拟物组、miR-22-3p模拟物+空载质粒组、miR-22-3p模拟物+KLF6过表达质粒组；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-22-3p及KLF6表达；免疫荧光化学染色法检测细胞结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白T(cTnT)、间隙连接蛋白43(Cx43)表达；Western blot检测Desmin、cTnT、Cx43、KLF6蛋白表达；流式细胞术检测BMSC凋亡情况；采用双荧光素酶报告基因实验分析miR-22-3p和KLF6的靶向关系。结果 与对照组比较，5-AZA组BMSC中miR-22-3p(q=7.971,P<0.001)、Desmin(q=7.876,P<0.001)、cTnT(q=10.272,P<0.001)、Cx43表达(q=6.256,P<0.001)以及细...