Survivin反义核酸对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

Survivin是凋亡抑制蛋白（IAP）家族的一个成员，具有强大的抗细胞凋亡功能，在几乎所有肿瘤组织中特异性表达，而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达。本研究针对Survivin mRNA序列设计了反义寡核甘酸，RT—PCR检测表明，该序列反义寡核苷酸可明显降低细胞中survivin基因的mRNA含量；Western印迹显示Survivin蛋白水平也被降低。MTT比色实验法检测结果说明人Survivin反义寡核苷酸抑制SMMC-7721细胞增殖，抑制率为43％，远高于无义寡核苷酸组和空白对照组。反义寡核苷酸还显著增强SMMC-7721细胞对于抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性，TUNEL法检测结果显示，在较低高三尖杉酯碱浓度下，反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组。本研究结果提示，survivin表达的靶向抑制有望应用于肿瘤的辅助治疗之中。     

ERK1/2信号转导途径在低切应力上调人脐静脉内皮细胞IL-8基因表达中的作用

血管内皮细胞位于血流和血管壁之间,除受化学因素的调节外还受力学因素的影响。切应力可通过刺激相应的力学感受系统来调节内皮细胞某些基因的表达,其中包括诱导内皮细胞表达IL- 8。为了阐明MAPK信号途径中的ERK1/ 2信号通路是否参与调控低切应力上调人脐静脉内皮细胞IL- 8基因表达,采用Western blot分析了低切应力(4.2 0 dyne/ cm2 )处理不同时间内皮细胞ERK1/ 2的磷酸化水平及TPK抑制剂Genistein,MEK抑制剂PD980 5 9对其磷酸化的影响;采用定量RT- PCR检测内皮细胞经低切应力刺激或给予阻断剂后再行切应力刺激等处理后IL- 8基因的表达。结果显示:(1)低切应力处理可引起内皮细胞ERK1/ 2蛋白磷酸化水平上调,其磷酸化水平与切应力作用时间有关,具有快速、双向性的特点(在刺激10 min时达到高峰,2 h左右降至未刺激水平) ,阻断剂Genistein和PD980 5 9处理后,ERK1/ 2磷酸化水平与低切应力刺激10 min比较明显降低;(2 )阻断剂Genistein,PD980 5 9可显著抑制低切应力所致的内皮细胞IL- 8m RNA上调。结果表明低切应力可通过ERK1/ 2信号途径上调人脐静脉内皮细胞IL- 8基因的表达。     

慢性心功能不全时经主动脉移植干细胞的可行性研究

心肌梗死或/和慢性心功能不全时,心脏干细胞移植是一项颇有应用前景的新的治疗技术。但是,对于非缺血性心脏病所致的慢性心功能不全,目前所采用的移植路径有一定的局限性。本试验拟研究慢性心功能不全时,封堵主动脉窦上部经主动脉根部移植干细胞是否可行。阿霉素所致的慢性心功能不全兔模型,采用双球囊封堵主动脉窦上部经主动脉根部自体移植骨髓单核细胞,4周后评价心功能。在封堵主动脉窦上部经主动脉根部移植干细胞时,无1例因移植手术死亡。双球囊充盈时造影显示,主动脉窦显影良好,大部分情况下,左、右冠状动脉可显影。骨髓单核细胞移植4周后,左室射血分数改善明显(P=0 .0 34)。所以,慢性心功能不全时,封堵主动脉窦上部经主动脉根部移植干细胞安全可行。     

生物电阻抗法评估干体质量对维持性血液透析患者残余肾功能的影响

目的应用生物电阻抗方法评估维持性血液透析(MHD)患者干体质量,观察精确评估干体质量对MHD患者残余肾功能的保护。方法 40例MHD患者入选,24 h尿量≥400 mL,随机分成试验组和对照组,试验组用生物电阻抗分析仪确定干体质量,对照组临床评估干体质量。随访4个月,对比基线及随访结束的24 h尿量、体质量、平均动脉压、透析超滤量、透析间期体质量增长百分率,BNP、心脏彩超EF值、左室质量指数等以及透析相关急性并发症。结果试验组的平均动脉压低于对照组[(92.0±9.3)vs(96.5±8.5),P0.05];试验组BNP低于对照组[(280.3±410.5)vs(471.7±786.0),P0.05];试验组24 h尿量高于对照组[(649.2±289.3)vs(562.5±224.8),P0.05]。结论应用生物电阻抗技术精确评估干体质量,可延缓因过度超滤导致的尿量减少,对残余肾功能具有保护作用,同时能够改善平均动脉压。增加检测频率可能进一步降低透析相关并发症。     

非甾体类抗炎药Celecoxib对人卵巢癌细胞环氧合酶2表达的影响

目的探讨非甾体类抗炎药Celecoxib对人卵巢癌环氧合酶2(COX-2)表达的影响,以及其抗卵巢癌作用与COX-2表达之间的关系。方法采用流式细胞技术(FCM)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western免疫印迹法,检测不同浓度Celecoxib(COX-2特异性抑制剂)加入人卵巢癌SKOV3细胞株中共同培养24h后,SKOV3细胞COX-2的蛋白表达和mRNA水平变化,同时与非选择性COX-2抑制剂Aspirin相比较。采用免疫组化法检测Celecoxib对人卵巢癌裸鼠移植瘤组织中COX-2表达的影响。结果RT-PCR显示,随药物浓度增加,COX-2mRNA表达逐渐下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);FCM显示,Celecoxib(5×10-5mol/L)和Aspirin(7×10-3mol/L)组COX-2的平均荧光强度明显低于对照组(P<0.05),尤以Celecoxib(5×10-5mol/L)组更显著;Westernblot检查结果相同;免疫组化发现,Celecoxib不同剂量(10、25、50mg/kg·d)用于人卵巢癌裸鼠移植瘤后,其COX-2的IOD值均明显低于对照组(P<0.05),且随药物剂量的增大,其IOD减小。结论Celecoxib对人卵巢癌的抗肿瘤效应与COX-2表达下降有关,可能存在COX-2依赖和非依赖途径,值得进一步研究。     

非甾体类抗炎药对卵巢癌细胞生长的抑制作用

目的 比较2种非甾体类抗炎药Celecoxib和Aspirin对人卵巢癌SKOV3细胞生长和凋亡的影响,以及Celecoxib对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤成瘤性的影响.方法 不同浓度Celecoxib和Aspirin作用于卵巢癌细胞不同时间后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法检测卵巢癌细胞的增殖;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞技术(FCM)测定卵巢癌细胞凋亡;裸鼠皮下移植瘤实验检测卵巢癌细胞体内成瘤性.结果 Celecoxib和Aspirin均对卵巢癌细胞的增殖有抑制作用,呈剂量依赖关系,且24 h就已表现出较强的抑制SKOV3细胞增殖效应,以Celecoxib作用最显著,24 h肿瘤细胞半数抑制剂量(IC50)所需Celecoxib浓度为5×10-5 mol/L,而所需Aspirin浓度约为7×10-3 mol/L; Celecoxib和Aspirin作用后,部分细胞出现形态不规则、细胞浆空泡化,尤以Celecoxib更明显;5×10-5 mol/L Celecoxib和7×10-3 mol/L Aspirin组癌细胞凋亡率分别为47.1%、15.7%,均高于对照组(4.8%,P均＜0.05);3种不同剂量的Celecoxib对裸鼠皮下移植瘤的抑瘤率分别为25.20%、33.00%、38.60%,尤以Celecoxib 50 mg/(kg·d)组更为明显,且对裸鼠肝肾胃肠等重要脏器无明显影响.结论 Celecoxib和Aspirin均能抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖和诱导其凋亡,且Celecoxib作用强于Aspirin.     

胎盘生长因子在冠状动脉血运重建中的意义

目的 探讨胎盘生长因子(placental growth factor, PlGF)在冠状动脉血运重建中的意义.方法 2006年5月-2007年3月,对61例以胸痛为主要表现的患者行冠状动脉造影检查,记录Gensini冠脉病变积分.其中男53例,女8例;平均年龄61岁.对冠脉病变严重的26例患者行经皮经腔冠状动脉成型术(percutaneous transluminal coronary angioplasty, PTCA)及支架置入术,术后观察不良心血管事件发生情况.另取28例健康志愿者作为对照组,所有观察对象均抽静脉血测定血浆PlGF水平.结果 根据冠状动脉造影结果,胸痛患者可分为冠心病组(n=45)与非冠心病组(n=16).冠心病组血浆PlGF水平为(10.70±0.49)ng/L,明显高于非冠心病组(4.53±0.64)ng/L和对照组(3.64±0.36)ng/L,且差异均有统计学意义(P<0.001),非冠心病组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05).相关分析显示,血浆PlGF水平与Gensini冠状动脉病变积分成强正相关(r=0.918,P<0.01).PTCA及支架置入患者术后30d随访,4例发生不良心血管事件,其PlGF水平为(13.98±3.39)ng/L,明显高于未发生心血管事件的患者(7.25±2.96)ng/L,且差异有统计学意义(P<0.01).结论 检测血浆PlGF水平在不明原因胸痛的鉴别诊断中具有一定意义,有助于冠心病的早期诊断;血浆PlGF水平越高,提示冠状动脉病变程度越严重;血浆PlGF水平对冠状动脉血运重建术后不良心血管事件的发生有潜在预测价值.     

慢性充血性心力衰竭心脏干细胞移植后心肌电生理学特性的变化

研究慢性充血性心力衰竭(简称心衰)时,干细胞移植对心肌电生理学特性的影响。日本大耳白兔分为健康对照(8只)和心衰两大组,后者包括骨髓间充质细胞移植组(8只)、骨骼肌成肌细胞移植组(6只)和假手术组(8只)。慢性心衰模型由阿霉素制成。干细胞移植采用经双球囊封堵主动脉窦上部灌注自体骨髓间充质细胞或骨骼肌成肌细胞。比较干细胞移植前后心功能有无变化。测定多部位的有效不应期(ERP)及离散度(ERPd);右室流出道、左室心尖部或室间隔连续刺激(S1S1)或早搏刺激时,其它各部位的兴奋传导时间(AT)和兴奋传导时间离散度(ATd),比较各组间有无差异。结果:骨髓间充质细胞移植4周后,左室射血分数有改善的趋势。各组间ERP及ERPd无差异。与健康对照组和假手术组相比,骨骼肌成肌细胞移植组和骨髓间充质细胞移植组的AT和ATd有增加,在骨骼肌成肌细胞移植组更加明显。AT和ATd的变化在左室心尖部刺激时最为显著。在骨髓间充质细胞移植组,出现1例自发性室性心动过速,并猝死。结论:慢性充血性心衰时,干细胞自体心脏移植后,心肌组织的电传导能力下降,离散度增大。     

高糖对人腹膜间皮细胞纤维连接蛋白及纤溶酶原激活物抑制剂-1的影响

目的 研究高糖对人腹膜间皮细胞（HPMC）纤维连接蛋白（FN）及纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的影响。方法 利用HPMC体外培养模型，HPMC分别经含1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖的1640培养基培养6、12、24、48h后，用ELISA法检测HPMC分泌FN及PAI-1的情况。结果 ①1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖作用于HPMC，使培养上清中的FN明显高于对照组（P〈0．05），且FN增高的程度与葡萄糖浓度和作用时间呈依赖关系。②2．5％、4．25％的葡萄糖作用于HPMC，使培养上清中PAI-1明显高于对照组（P〈0．05），且增高的程度与葡萄糖浓度和作用时间呈依赖关系，1．5％葡萄糖液与对照相比没有差别（P〉0．05）。结论 高糖促使HPMC分泌FN、PAI-1增加，在腹膜纤维化的进程中起一定作用。     

丁酸钠诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察丁酸钠对体外培养的HT－29细胞的促凋亡作用。方法；采用流式细胞仪、DNA电泳及透射电镜观察经丁酸钠作用的漂浮细胞是否发生了凋亡。结果：丁酸钠可诱导HT－29细胞凋亡，且具有时间和剂量依赖关系，经1mmol/L,3mmol/L,5mmol/L丁酸钠48,HT-29细胞凋亡率分别为5．7％、7．8％、12．1％，对照细胞仅为2．8％，差异显著（P＜0．05）。结论：丁酸钠可诱导HT－29细胞凋亡。这可能是丁酸钠对结肠肿瘤有预防作用的机制之一。