复方甘草酸单铵和异甘草酸镁对化学损伤人肝细胞的保护作用

目的:研究2 类甘草甜素药物对半乳糖胺( D-GalN)和四氯化碳(CCl4)损伤培养人肝细胞(L-02)的保护作用及差异.方法:培养L-02, 用复方甘草酸单铵(compoundammonium glycyrrhizin, CAG)和异甘草酸镁(magnesium isoglycyrrhizinate, MI)分别进行保护后, 再经D-GalN或CCl4处理. 观察肝细胞生长状态、测定AST、LDH酶活力、及细胞内谷胱甘肽(GSH)含量. 从而评价CAG和MI对D-GalN和CCl4损伤L-02的保护作用差异.结果:浓度为1 g/L的CAG和MI均能提高细胞的存活率, 显著抑制D-GalN和CCl4所致的AST及LDH释放. CAG抑制D-GalN和CCl4所致的AST与LDH效果显著好于MI(均P<0.05);浓度为1 g/L的CAG和MI均能显著抑制2种化学损伤细胞内的GSH降低(CCl4损伤:7.59±1.27, 5.23±0.70 vs 3.33±0.40; D-GalN损伤:7.93±0.36, 5.40±0.52 vs 3.77±0.45, P<0.01或0.05), CAG效果明显好于MI.结论:1 g/L的CAG和MI 2种药物对D-GalN和CCl4致人肝细胞损伤均有保护作用, 其机制与抑制GSH降低相关. 2种甘草甜素药物相比较,CAG保护肝细胞效果好于MI.     

两种不同肝纤维化相关细胞因子shRNA重组质粒的构建

目的 构建以大鼠结缔组织生长因子(CTGF)和金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因为靶点的短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法 根据前期筛选出的对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,各设计一对有短发夹结构的RNA干扰(RNAi)靶点序列,退火形成双链DNA,克隆到质粒载体psiRNA-h7SK...     

细胞因子与肝纤维化的基因治疗

肝纤维化（hepatic fibrosis）是各种原因（如病毒、乙醇、寄生虫、铜铁沉积等）引起的慢性肝损伤所共有的病理改变．其特征是以胶原为主的细胞外基质（ECM）各成分因合成增多、降解相对不足而在肝内过量沉积。肝纤维化为一动态过程,属可逆性病变。但若进一步发展致肝小叶结构改建、假小叶和结节形成（肝硬化阶段）则不可逆。因此,阻断抑制或逆转肝纤维化是治疗慢性肝病的一个十分重要的目标。     

核苷(酸)类似物治疗的慢性乙型肝炎患者HBV RT区突变序列分析

目的 分析使用过核苷(酸)类似物(NA)治疗的慢性乙型肝炎患者体内HBV RT区基因耐药特点.方法 收集229例接受过核苷类似物治疗的慢性乙型肝炎患者的血清,应用snPCR法扩增HBV全长RT区,纯化snPCR产物直接测序后分析11个经典耐药位点的氨基酸变异情况.结果 229例患者中基因B和C型各占14.41％ (33/229)和85.59％ (196/229).且C型患者较B型更易发生耐药变异(x2=2.95,P＜0.05).共有63例检出HBV耐药变异,在rtI169、rtT184、rtA194和rtS202位点上均未检出耐药变异.在63个耐药变异株中rtM204V/I变异株检出率最高(40/63,63.49％),共有11种耐药突变模式.其中rtM204I以与rtL80I/V或rtL180M联合变异为主,而rtM204V变异常伴有rtL180M变异.结论 使用过核苷(酸)类似物(NA)治疗的慢性乙型肝炎患者体内HBV RT区基因耐药呈现出复杂的变异类型,rtM204V/I突变最为常见.     

结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1shRNA表达质粒对肝星状细胞细胞因子表达及细胞外基质分泌的影响

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的短发夹RNA(shRNA)表达质粒分别及共转染肝星状细胞(HSC)对CTGF、TIMP-1、I型前胶原(PCI)mRNA表达及细胞外基质(ECM)分泌的影响. 方法 筛选并成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1有效RNA干扰靶位的shRNA表达质粒,分别及共转染转化生长因子β1刺激活化的大鼠HSC-T6细胞,荧光定量PCR检测各组细胞中CTGF、TIMP-1、PCI mRNA的表达;放射免疫法分析细胞上清液中Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN)的含量.组间比较采取方差分析;多组间两两比较采用SNK-q检验. 结果 CTGFshRNA转染和双质粒共转染HSC-T6的CTGFmRNA相对表达量分别为0.59±0.03、0.62±0.01,与空白对照组、CTGFshRNA转染组的1和1.00±0.07比较,CTGF mRNA表达量均明显下降,F=66.515,P值均＜0.05,差异有统计学意义;而TIMP-1 shRNA组和双质粒共转染组的TIMP-1 mRNA相对表达量分别为0.66±0.04、0.68±0.03,与空白对照组、CTGFshRNA转染组的1和1.05±0.03比较,TIMP-1 mRNA表达量均明显下降,F=83.835,P值均＜0.05,差异有统计学意义;CTGFshRNA转染、TIMP-1shRNA转染和共转染组的PCI rnRNA相对表达量分别为0.55±0.02、0.57±0.02和0.41±0.01与空白对照组的1比较,PC I mRNA表达量均明显下降,F=709.905,P值均＜0.05,差异有统计学意义;双质粒联合转染对CTGF、TIMP-1、PC I的mRNA表达量抑制作用优于单质粒转染.CTGF shRNA转染、CIGF shRNA转染和双质粒共转染组的PCⅢ含量分别为(78.02±6.50) ng/ml、(79.03±5.47) ng/ml、(53.91±4.01)ng/ml,与空白对照组的(113.79±15.88)比较,PCⅢ含量均明显下降,P值均＜0.05,差异有统计学意义; CTGF shRNA转染、CTGF shRNA转染和双质粒共转染组的HA含量分别为(127.36±8.33)ng/ml、(116.55±3.37) ng/ml、(82.84±9.03) ng/ml,与空白对照组的(163.10±7.01)ng/ml比较,HA含量均明显下降,P值均＜0.05,差异有统计学意义CTGFshRNA转染、CTGF shRNA转染和双质粒共转染组的LN含量分别为(55.41±9.37)ng/ml、(49.77±6.70) ng/ml、(30.72±1.22) ng/ml,与空白对照组的(83.99±4.67) ng/ml比较,LN含量均明显下降,P值均＜0.05,差异有统计学意义.CTGF shRNA与TIMP-1 shRNA双质粒联合转染对PCⅢ、HA、HA分泌的抑制作用优于单质粒转染.结论 CTGF shRNA.TIMP-1 shRNA可明显抑制HSC的CTGF、TIMP-1、PCI基因表达及ECM的分泌,且shRNA联合干扰效果更显著,有望成为抗肝纤维化基因治疗的有效方法.     

结缔组织生长因子和金属蛋白酶组织抑制因子-1 RNA干扰靶位的筛选

目的筛选能有效抑制肝纤维化形成的结缔组织生长因子（CTGF）和金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的RNA干扰靶位。方法根据大鼠CTGF和TIMP-1基因序列,分别设计3个RNA干扰候选靶位,化学合成双链RNA（dsRNA）,各自转染或不同组合后转染经TGF-β1刺激活化的大鼠肝星状细胞（HSC）,48h后抽提RNA并逆转录成cDNA,采用荧光定量PCR法测定并计算CTGF和TIMP-1、Ⅰ型前胶原（procol-α1）mRNA的相对表达量与抑制率,采用RIA法检测HSC培养上清液肝纤维化指标。结果在进行单独针对CTGF基因干扰时,CTGF-3组对CTGF mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳（抑制率分别达68.09%与65.03%）,在单独针对TIMP-1基因干扰时,TIMP-1-3组对TIMP-1 mRNA及其下游产物Procol-α1 mRNA的转录抑制作用最佳（抑制率分别达68.55%与62.84%）;在联合干扰时,CTGF-3/TIMP-1-3组联合对CTGF mRNA和TIMP-1 mRNA的抑制最强（抑制率分别达76.60%与79.03%）,而以CTGF-2/TIMP-1-3组联合对Procol-α1 mRNA的抑制作用最强（抑制率达85.79%）。结论成功筛选出针对CTGF和TIMP-1最有效的RNA干扰靶位,联合干扰较单独干扰效果更强。     

中药直肠滴入联合乳果糖治疗热扰心神型肝性脑病的临床疗效及对血清内毒素、血氨和肠黏膜屏障功能的影响

目的中药直肠滴入联合乳果糖治疗热扰心神型肝性脑病( HE)的临床疗效及对血清内毒素、血氨和肠黏膜屏障功能的影响。方法选取 2021年 4月至 2022年 3月秦皇岛市第三医院收治的 126例 HE病人按随机数字表法分为乳果糖组、中药直肠滴入组和乳果糖联合中药直肠滴入组(联合组),每组各 42例,均给予常规支持治疗后,乳果糖组采用单一乳果糖治疗,中药直肠滴入组采用单一中药直肠滴入治疗(大黄、黄连、黄芩各 20 g,加水 800 mL煎至 150 mL)联合组采用乳果糖联合中药直肠滴入治疗,均治疗 1周,观察三组病人治疗前后血清内毒素水平、血氨水平、肝功能指标［天冬氨,酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨(ALT)、总胆红素(TBil)］水平、炎症因子［肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、白细胞介素 -6(IL-6)］水平、肠黏膜屏障功能［二胺氧化酶(D酶AO)、D-乳酸( D-LA)］水平和中医症状评分等变化情况,并评估三组病人精神状态改善时间、临床疗效和不良反应。结果三组病人精神状态改善时间联合组( 5.84±0.87)d<中药直肠滴入组( 6.15±1.05)d<乳果糖组( 8.24±1.21)d(P<0.001);三组病人临床治疗总有效率比较联合组 95.24%>中药直肠滴入组 92.86%>乳果糖组 73.81%(P=0.005);治疗后,三组病人血清内毒素、血氨水平、 TNF-α、IL-6、DAO、D-LA、AST、ALT、TBil水平水平,面赤、谵语、惊悸、失眠多梦、口干咽燥、心烦易怒等中医症状评分比较差异有统计学意义(均 P<0.001)。结论三黄汤保留灌肠联合乳果糖治疗 HE型肝性脑病疗效确切,可有效调节肠道内毒素,降低血氨水平,修复肠黏膜屏障,缩短神志恢复时间,改善肝功能,降低中医症状评分,且安全性高。