沉默干扰素诱导跨膜蛋白3可抑制肝癌细胞HepG2增殖和侵袭

目的研究干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）在原发性肝癌中的异常表达,探讨沉默IFITM3表达对肝癌细胞系HepG2生
物学特征的影响。方法通过Western blot和免疫组织化学染色法检测60例肝癌组织及对应癌旁组织中IFITM3的表达情况及
相关性;构建IFITM3小干扰RNA片段（IFITM3 si-RNA）,采用脂质体介导转染肝癌细胞（HepG2细胞系）,同时设置无义序列组
和空白对照组,实时荧光定量PCR检测转染后IFITM3 mRNA的表达;CCK8（cell counting kit 8）检测转染后细胞增殖能力;
Western blot检测IFITM3在蛋白水平的表达;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结果和癌旁组织相
比,IFITM3在肝癌组织中的明显高表达。与无义序列组和空白对照组比较,IFITM3 si-RNA转染组细胞IFITM3表达和细胞增
值率降低,穿膜细胞数也明显减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。划痕实验也表明迁移能力降低。结论IFITM3在原发性肝
癌中高表达;IFITM3在肝癌细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,有望成为原发性肝癌基因治疗的侯选靶点。
     

野黄芩素FVB/NCrlVr小鼠磺酸化代谢特征研究

 目的 野黄芩素在机体内被吸收后迅速发生Ⅱ相代谢结合反应。本实验研究野黄芩素主要的Ⅱ相代谢磺酸化代谢反应特征。方法 采用FVB/NCrlVr (FVB)小鼠肠灌流模型及FVB/NCrlVr小鼠肝脏S9体外反应体系,HPLC-MS/MS及HPLC-UV测定汉黄芩素及其代谢产物,研究汉黄芩素主要的Ⅱ相代谢之一磺酸化代谢反应的特征。结果 小鼠在体灌流实验中,野黄芩素的磺酸化代谢产物在小肠的外排速率与葡萄糖醛酸化代谢产物的外排速率无显著性差异（P=0.435）,且结肠灌流液中仅检测到野黄芩素磺酸化代谢产物。野黄芩素在肠道吸收后原型药物与代谢产物均有部分经胆汁排泄。体外FVB/NCrlVr小鼠肝脏S9孵育实验中,20 μmol·L^-1的野黄芩素的磺酸化代谢反应速度显著高于10,40 μmol·L^-1时的反应速率(P<0.05)。结论 本实验首次发现磺酸化代谢是野黄芩素在肠道内的主要代谢方式之一,野黄芩素经肠道吸收后存在肝肠循环。体外肝脏S9孵育的野黄芩素磺酸化反应可能存在底物抑制现象。     

KLF4与原发性肝细胞癌关系的研究进展

KLFs家族是一类具有锌指结构的转录因子,参与多个生理活动的调控,在细胞增殖、凋亡、分化以及胚胎发育等过程中扮演了关键的角色,与真核基因转录调控密切相关.Kruppel样因子4(Kruppel like factor 4,KLF4)作为KLFs家族中重要的一员,KLF4在原发性肝癌组织中呈现高表达,但是KLF4在原发性肝细胞癌的作用机制仍需要进一步的探讨,本文就KLF4在原发性肝细胞癌中的生物学功能进行综述.     

IFITM3在原发性肝癌中的表达及其对MMP-9调控效应

目的:探讨干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)在原发性肝癌中的表达及作用。方法:用免疫组化与Western blot检测60例肝癌组织及对应癌旁组织中IFITM3以及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达;构建IFITM3小干扰RNA片段(psilencer3.1-sh IFITM3)转染肝癌Hep G2细胞,用实时荧光定量PCR及Western blot法、CCK8法、Transwell试验和划痕试验分别检测细胞转染后IFITM3和MMP-9 m RNA及蛋白表达、增殖能力以及侵袭与迁移能力的变化。结果:与癌旁组织比较,肝癌组织中IFITM3与MMP-9的蛋白的阳性表达率与表达量均明显升高(81.67%vs.13.33%;88.33%vs.8.33%,均P0.05);psilencer3.1-sh IFITM3转染后,Hep G2细胞IFITM3和MMP-9的m RNA与蛋白表达水平、细胞增值率均明显降低,穿膜细胞数明显减少,划痕融合速率明显减慢。以上定量指标间的差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:原发性肝癌中IFITM3表达增高,高表达的IFITM3可能通过调控MMP-9的表达而促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

汉黄芩素在FVB小鼠体内的磺酸化代谢特征研究

目的探讨汉黄芩素Ⅱ相代谢中主要的磺酸化代谢反应特征。方法采用FVB小鼠肠灌流模型及FVB小鼠肝脏S9体外反应体系,通过采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS/MS)和高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)测定汉黄芩素及其代谢产物,研究汉黄芩素主要的Ⅱ相代谢反应之一磺酸化代谢反应的特征。结果汉黄芩素在FVB小鼠小肠均发生葡萄糖醛酸化与磺酸化代谢反应,其中磺酸化代谢产物的排出速率为[(3.46±0.16)nmol/30 min/10 cm]。而汉黄芩素在结肠中只检测出磺酸化代谢产物,其排出速率为[(1.40±0.24)nmol/30 min/10 cm]。体外试验显示,汉黄芩素的磺酸化代谢符合双相酶代动力学特征,由两种磺酸化转移酶(Sult)亚型介导。结论汉黄芩素的磺酸化代谢反应是汉黄芩素肠道代谢的重要组成部分,其在肝脏的磺酸化代谢由两种Sult酶催化完成。     

AGR2调控IFITM3的表达促进肝癌细胞的增殖

目的:探讨重组人前梯度同源蛋白2(anterior gradient homolog 2,AGR2)的表达对肝癌细胞增殖能力的影响及其可能的作用机制.方法:通过实时荧光定量PCR、Western blot、免疫组织化学检测40例肝癌患者癌组织和对应癌旁组织中AGR2基因、干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)的表达情况,构建AGR2的过表达质粒pcDNA3.1-AGR2,并将其转染至肝癌细胞中,运用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测AGR2 mRNA和蛋白的表达,CCK-8(cell counting kit 8)法检测细胞的增殖能力,利用流式细胞技术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测IFITM3的表达.结果:在原发性肝癌组织中AGR2,IFITM3呈现高表达;成功构建AGR2的过表达质粒pcDNA3.1-AGR2,成功构建稳定高表达AGR2的肝癌HepG2细胞.pcDNA3.1-AGR2转染组HepG2细胞中AGR2 mRNA和蛋白的表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组.与阴性对照组比较,pcDNA3.1-AGR2转染组HepG2细胞的体外增殖能力和克隆形成能力明显升高,IFITM3蛋白的表达水平也随之升高.结论:上调AGR2可以增加IFITM3的表达,促进肝癌细胞的增殖.     

KLF4调控 MMP9对原发性肝癌的侵袭迁移能力的影响

目的：研究Krüppel 样因子4(KLF4)和基质金属蛋白酶9(MMP9)在原发性肝癌中的表达情况,探讨 KLF4调节MMP9对原发性肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法收集原发性肝癌手术患者癌和癌旁组织标本,通过免疫组织化学、实时荧光定量 PCR 和免疫印迹试验(Western blot)检测50例肝癌组织及对应癌旁组织中 KLF4和 MMP9的表达情况;构建重组质粒,上调肝癌细胞(HepG2细胞系)的 KLF4表达,检测 MMP9 mRNA 及蛋白水平的表达情况;转染后的 HepG2细胞运用 Tran-swell 侵袭试验和划痕试验观察侵袭和迁移能力的变化。结果相比癌旁组织,KLF4在肝癌组织中的表达明显降低(P <0.05),而 MMP9的表达明显增高(P <0.05)。通过构建重组质粒,上调 KLF4的表达,发现 MMP9的 mRNA 和蛋白表达均降低,并影响 HepG2细胞的侵袭和迁移能力。结论在原发性肝癌中,KLF4低表达,而 MMP9高表达。在肝癌细胞中上调 KLF4表达可引起 MMP9表达下降,进而抑制肝癌细胞的侵袭和迁移。     

抗核抗体谱的检测在自身免疫性疾病中的应用价值

目的探讨用间接免疫荧光法(IIF)抗核抗体(ANA)与免疫印迹法(LIA)特异性抗核抗体谱(ANAs)的联合检测在自身免疫性疾病(AID)中的应用价值。方法 436例患者,其中自身免疫病患者271例,非自身免疫病患者165例,所有患者同时检测血清ANA和ANAs,两种检测方法产生4种检出模式:IIF(+)/LIA(+)、IIF(-)/LIA(-)、IIF(+)/LIA(-)和IIF(-)/LIA(+)。结果 436份标本中IIF(+)/LIA(+)占40.15%,IIF(-)/LIA(-)占25.52%,IIF(+)/LIA(-)占15.27%,IIF(-)/LIA(+)占9.81%,IIF与LIA检测ANA的结果总体符合率为65.67%,ANA和ANAs在自身免疫病患者中的阳性率分别是65.3%和57.9%,显著高于非自身免疫病患者的17.6%和20.0%;ANA和ANAs在自身免疫病组和非自身免疫病组间阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。两检测结果仅在MCTD和SLE患者中存在相关性(P<0.01),在其他观察组中不存在相关性(P>0.05)。结论 IIF检测ANA容易导致AID患者部分具有临床意义的ANA特异性抗体漏检,而ANAs检测因其测定的抗体数量有限也容易导致AID患者的ANA漏检。IIF-ANA和LIA-ANAs检测不能相互代替,对需要通过检测ANA来排除AID的患者标本应同时进行IIF-ANA和LIF-ANAs的检测,以避免仅采用一种方法进行检测时导致AID患者漏诊。ANA的IIF法易导致以抗-SSA、抗-SSB和抗-Ro52为主要抗体的患者ANA假阴性,而LIA法特异性ANAs的检测因检测的抗体不全面也无法取代ANA的IIF法检测。在临床实际工作中两种ANA的检测方法不能相互取代,应联合应用。     

肝段切除术治疗左肝外叶结石21例临床分析

目的 探讨肝Ⅱ段或Ⅲ段切除术治疗左肝外叶结石的临床效果。方法 回顾性分析南昌大学第二附属医院2013年6月至2016年2月收治的21例左肝外叶结石病人的临床资料,肝内胆管结石均局限于肝Ⅱ段或Ⅲ段。手术方法为解剖性肝Ⅱ段或Ⅲ段切除。结果 病人均康复出院。21例病人随访18（2~32）个月,1例左肝结石残余,其余病例通过B超、CT或MRI检查未发现胆管炎及结石复发迹象。结论 对于肝内结石局限于肝Ⅱ段或Ⅲ段胆管,而其他肝段胆管未见原发性结石及狭窄,应行解剖性肝Ⅱ段或Ⅲ段切除,不应该盲目切除左肝外叶。