从CRTC2/SREBP1调节探讨三七总皂苷改善非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢的作用

目的:研究三七总皂苷对固醇调节元件结合转录因子1(SREBP1)、CREB转录激活因子2(CRTC2)的调节与改善早期非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂质代谢的作用.方法:108只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,非诺贝特组(18 mg/kg),三七总皂苷低、中、高剂量组(9、18、36 mg/kg),灌胃给药(10...     

三七总皂苷调节iNOS-NO-NF-κB信号通路抑制LPS诱导的RAW246.7细胞炎症研究

目的 探讨三七总皂苷（PNS）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞iNOS-NO-NF-κB信号通路相关分子表达及活性的影响。方法 MTT比色法检测PNS对RAW264.7细胞增殖的抑制作用;不同浓度PNS（25、50、100 μg/mL）干预体外培养LPS诱导的RAW264.7细胞24、48 h后,Griess法检测NO变化;PNS干预24 h后,Western blotting检测iNOS、NF-κB、p-NF-κB、IKKα、p-IKKα、p-ΙκΒα蛋白表达量的变化;PNS干预4 h后,激光共聚焦显微镜检测NF-κB转位入核情况。结果 PNS浓度大于150 μg/mL时,才表现出显著抑制细胞增殖的作用。25、50、100 μg/mL PNS作用于RAW264.7细胞24和48 h后,与模型组比较,NO生成量均显著降低（P<0.001）。50、100 μg/mL PNS作用于RAW264.7 24 h后,iNOS、NF-κB蛋白表达量显著降低,磷酸化蛋白p-NF-κB、p-IKKα、p-ΙκΒα表达水平也显著降低（P<0.01、0.001）。与模型组比较,PNS 25、50、100 μg/mL组核因子p65入核荧光强度显著降低（P<0.01、0.001）。结论 PNS能够显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS-NO-NF-κB信号通路的活性,降低细胞炎症反应。     

三七总皂苷对非酒精性脂肪肝大鼠的改善作用及对NO/iNOS/NF-κB通路的影响

目的研究三七总皂苷对非酒精性脂肪肝大鼠的改善作用及对NO/iNOS/NF-κB通路的影响。方法96只雄性SD大鼠随机分为空白组,模型组,辛伐他汀组(2 mg/kg),三七总皂苷低、中、高剂量组(4.5、9、18 mg/kg),每组16只,灌胃给药(10 mL/kg),分别于第8、12周取材,检测2个时间点各组大鼠外周血丙氨酸转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)和肝脏NO、iNOS(诱导型一氧化氮合酶);HE染色观察肝组织病理学形态;免疫组化法检测iNOS在肝脏细胞中的表达情况;Western blot法检测NF-κB(核因子-κB)、p-NF-κB(磷酸化核因子-κB)、IKKα(IκB激酶-α)、p-IKKα(磷酸化IκB激酶-α)、IκBa蛋白表达量。结果与模型组比较,给药8周后,大鼠血清各项生化指标均出现了显著下降(P<0.05);给药12周后,与第8周结果比较,模型组血清生化指标显著增加(P<0.05),而给药组增加趋势并不显著,且三七总皂苷给药剂量在抑制非酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂质沉积方面存在剂量-效应关系。三七总皂苷可显著下调肝组织中NO、iNOS水平及NF-κB信号通路蛋白的表达量(P<0.05)。结论三七总皂苷可有效降低非酒精性脂肪肝大鼠转氨酶水平及血脂指标,同时可以抑制NO/iNOS/NF-κB信号通路,减少肝损伤,是三七总皂苷降脂护肝、减轻炎症反应的可能机制之一。     

三七总皂苷通过ERK/Akt通路改变HepG2/阿霉素细胞耐药性

目的 观察三七总皂苷对人肝癌阿霉素耐药细胞（HepG2/Adr）耐药性及细胞外调节蛋白激酶（ERK）/蛋白激酶B（Akt）通路主要蛋白表达的影响,从ERK/Akt通路探讨三七总皂苷逆转HepG2/Adr细胞耐药的可能作用机制。方法 利用噻唑蓝（MTT）比色法检测三七总皂苷对HepG2/Adr细胞增殖的影响,利用（100,50,25 mg·L^-1）三七总皂苷分别与（20 μmol·L^-1）阿霉素联合处理HepG2/Adr细胞,同时设置空白组,采用高内涵筛选平台检测药物作用40 min,3 h,6 h阿霉素在HepG2/Adr细胞内的积累;采用蛋白免疫印迹法检测P-糖蛋白/多药耐药基因1/ATP家族所介导的ABC家族转运蛋白（P-gp/MDR1/ABCB1）等耐药相关蛋白及ERK/Akt信号通路主要蛋白表达量;激光共聚焦显微镜检测MDR1在细胞膜上分布的改变。结果 与人肝癌细胞HepG2比较,HepG2/Adr细胞MDR1表达量显著升高（P<0.01）;与阿霉素组比较,三七总皂苷（25,50,100 mg·L^-1）与阿霉素（20 μmol·L^-1）联合给药在体外对HepG2/Adr细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）显著降低（P<0.01）,逆转倍数最高为10倍;与阿霉素组比较,联合给药组3,6 h可明显提高阿霉素在细胞内的积累（P<0.05）,呈剂量依赖性;与空白组和阿霉素组比较,三七总皂苷（50,100 mg·L^-1）与阿霉素（20 μmol·L^-1）联合给药组MDR1,ABC半转运蛋白（ABCG2）,多药耐药相关蛋白1（MRP1）,ERK,磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）,Akt,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,磷酸化mTOR（p-mTOR）的表达明显降低（P<0.05）;与空白组比较,阿霉素组与三七总皂苷（25 mg·L^-1）组MDR1在细胞膜上的分布差异无统计学意义;与空白组和阿霉素组比较,三七总皂苷（100,50 mg·L^-1）组可明显减少MDR1在细胞膜上的分布（P<0.05）。结论 三七总皂苷可抑制ERK/Akt通路,降低MDR1的表达,明显提高阿霉素在HepG2/Adr细胞中的积累,可能是三七总皂苷逆转耐药的机制之一。     

CpG ODN联合乙型肝炎疫苗与乙型肝炎疫苗免疫效果对比研究

目的探讨CpG ODN乙型肝炎疫苗与市售乙型肝炎疫苗对Balb/c小鼠的免疫作用效果。方法将乙肝疫苗、乙肝疫苗+100μgCpG ODN分别肌肉注射到4～6周龄,16～18g Balb/c小鼠体内,于第1次免疫后28d以同样剂量加强免疫1次。分别于第1次免疫后28、42、63 d收集小鼠血清,用ELISA方法检测抗HBs IgG抗体。结果实验组产生的抗HBs IgG与对照组HBsIgG相比P<0.05,具有显著性差异。28、42、63 d抗HBs IgG分别是对照疫苗的114倍、4.73倍、5.41倍以上。结论 CpG ODN能够显著增强小鼠对乙肝疫苗的免疫应答,在较短时间内显著的提高乙肝抗体的产生水平,免疫效果是乙肝疫苗的5倍以上。