LXR异常激活上调p27蛋白致胰岛β细胞周期阻滞

目的探讨肝X受体(liver X receptors,LXR)激动剂对小鼠胰岛β细胞系MIN6的作用。方法 LXR激动剂T0901317作用于MIN6细胞后,CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞周期变化;实时定量RT-PCR法检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)和p27 mRNA的表达水平;western blot检测Skp2和p27蛋白的表达情况。结果与control组相比,1、5和10μmol/L药物处理后的细胞存活率分别为(98.54±0.94)%、(87.03±0.93)%和(75.57±1.85)%,各组间差异有统计学意义(F=301.90,P0.01)。与control组G1期(35.93±2.25)%和S期(52.87±1.19)%相比,1、5和10μmol/L药物处理组G1期细胞比例分别为(38.45±0.91)%、(45.46±1.34)%和(53.28±1.14)%,差异有统计学意义(F=80.83,P0.01)。S期细胞比例分别为(48.65±0.85)%、(36.31±1.37)%和(31.45±1.22)%,差异有统计学意义(F=221.30,P0.01)。10μmol/L T0901317处理组p27蛋白表达水平(2.84±0.14)明显高于control组(2.28±0.10),差异有统计学意义(t=4.54,P0.05)。但两组间p27 mRNA水平差异无统计学意义(t=0.28,P0.05)。10μmol/L T0901317下调Skp2 mRNA(0.52±0.02,t=29.22,P0.01)和蛋白质水平(相对灰度值为0.98±0.12,control组为1.89±0.01,t=10.98,P0.01)。以对照组(100%)为参照,转染组、药物处理组和干扰组的细胞存活率分别为(100.97±1.08)%、(75.03±1.83)%和(86.67±2.45)%,与对照组比较,转染组间差异无统计学意义(t=1.542,P0.05),药物处理组细胞活力下降(t=23.58,P0.01);药物处理组和干扰组间差异亦有统计学意义(t=7.77,P0.01)。结论 LXR异常激活可导致胰岛β细胞增殖抑制,p27蛋白表达量增加,其机制可能为降解调控p27蛋白的Skp2 mRNA和蛋白质表达水平下降。     

免疫化学发光法、酶联免疫吸附法测定25羟维生素D在常见甲状腺相关疾病诊断中的应用价值

目的：采用免疫化学发光法（CLIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）检测25羟维生素D[25（OH）D3]在常见甲状腺相关疾病患者外周血中的表达水平,并对两种检测方法的结果进行比较。方法应用CLIA及ELISA法同时测定97例健康人群（ NC组）、57例 Graves 病（ GD 组）、69例桥本甲状腺炎（ HT 组）及73例亚急性甲状腺炎（ SAT 组）患者血清中的25（ OH） D3水平,同时检测四组人群中的血钙、血磷水平及甲状腺功能相关指标。结果 CLIA法及ELISA法检测结果均显示,四组甲状腺相关疾病患者血清间25（ OH） D3水平差异存在统计学意义,两两组间比较示NC组血清中25（ OH） D3的水平最高（63．46±17．28 ELISA法及57．28±16．36 CLIA法, P＜0．05）,GD组大于HT、SAT组（47．26±13．63 ELISA法及46．86±11．64 CLIA法, P＜0．05）。 ELISA法检测的25（OH）D3值高于CLIA法,但差异无统计学意义（P＞0．05）。 GD及HT组中,25（OH）D3与血清游离三碘甲状腺原氨酸（ FT3）及游离甲状腺素（ FT4）存在正相关性与促甲状腺激素（ TSH）及抗甲状腺过氧化物酶体（ TPOAb）存在负性相关,而NC组及SAT组中25（ OH） D3与甲状腺功能指标间不相关。结论与健康人群相比,甲状腺相关疾病各组患者血清中25（ OH） D3水平明显降低,CLIA法及ELISA法检测25（ OH） D3结果相关系数高,均适用于临床检测外中血中25（ OH） D3。