水痘-带状疱疹病毒膜抗原荧光抗体试验的建立与评价

目的  建立用于检测血清中水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV)特异性抗体的膜抗原荧光抗体（fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA）试验并对其进行验证和评价。方法  用VZV感染细胞作为抗原制备抗原载玻片,以异硫氰酸荧光素标记的羊抗人IgG为二抗建立FAMA试验。对试验的灵敏度、特异性和重复性进行验证。用FAMA试验和市售ELISA试剂盒对200份血浆样品中的抗VZV抗体进行检测。采用Spearman秩相关检验对两种方法的检测结果进行比较。结果 FAMA试验的灵敏度为0.04 IU/ml,与常见的人疱疹病毒（单纯疱疹病毒1和2型、人巨细胞病毒）没有交叉反应且重复性良好。经FAMA试验检测,200份血浆样品的抗体阳性率为93.5%,抗体几何平均效价为1:18.1,检测结果与市售ELISA试剂盒的符合率为90.0%。两种方法的检测结果具有相关性,Spearman秩相关系数为0.49,P<0.000 1。结论  建立的方法具有良好的灵敏度、特异性和重复性,可用于血清中抗VZV抗体的检测。     

脑膜炎球菌fHBP的克隆表达与免疫原性研究北大核心CSCD

目的选用pET蛋白表达系统重组表达A、B两个亚家族的fHBP蛋白(fHBP-A和fHBP-B),制备脑膜炎球菌蛋白疫苗,并对其进行免疫原性检测,评价该蛋白疫苗抵抗脑膜炎球菌感染的保护作用。方法以脑膜炎球菌Nm048(A家族)与Nm035(B家族)菌株裂解液为模版扩增目的基因fHBP-A与fHBP-B,与原核表达载体pET-24b连接,构建重组质粒pET-24b-fHBP-A和pET-24b-fHBP-B。分别用pET-24b-fHBP-A和pET-24b-fHBP-B转化大肠埃希菌,通过Western blot检测目的蛋白表达情况并用Ni^(2+)柱层析和凝胶过滤层析进行纯化。将家兔随机分为4组,fHBP-A实验组、fHBP-B实验组、fHBP-A+fHBP-B实验组用相应重组蛋白免疫,对照组注射PBS。采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测免疫家兔抗血清与靶菌的结合情况,通过血清杀菌力试验(serum bactericidal assay,SBA)评价该疫苗诱导的免疫保护效果。结果 PCR扩增出约760 bp的目的基因片段,经双酶切和测序鉴定重组质粒pET-24b-fHBP-A与pET-24b-fHBP-B构建成功.重组菌经IPTG诱导后采用Ni^(2+)柱层析和凝胶过滤层析纯化获得2个蛋白,纯度均>90%。分别用fHBP-A、fHBP-B及其混合产物免疫家兔制备的抗血清,滴度分别为1.8×10~4、4.9×10~5、4.8×10~5。经流式细胞术检测,不同抗原组合免疫抗血清均能与靶菌结合,血清杀菌力试验检测相应的杀菌效力均SBA>1∶8,其中fHBP-A+fHBP-B免疫抗原组抗血清的杀菌滴度较高且具有交叉反应。结论 2个亚家族的fHBP蛋白疫苗能诱导家兔产生较强的体液免疫,fHBP-A+fHBP-B具有较好的免疫原性,为脑膜炎球菌蛋白疫苗的研发奠定了基础。     

水痘减毒活疫苗病毒的单核苷酸多态性分析

水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）是引起水痘和带状疱疹的主要病原体,Oka株水痘减毒活疫苗（V-Oka）能有效预防水痘发生。V-Oka株与Oka亲本株之间存在至少42个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点差异,部分位点与V-Oka株的减毒特性有关。目前已知有6个SNP位点为疫苗型位点,可用于区分V-Oka病毒与野生型病毒。近期研究发现某些SNP位点与疫苗相关皮疹有关。此文对水痘减毒活疫苗的重要SNP位点做一综述。