代谢组学在类风湿关节炎诊断和治疗中的研究进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种致残率高且病因不明的慢性自身免疫性疾病,早诊断、早治疗对于预防该疾病进一步发展至关重要。近年来,代谢组学技术因其具有整体性、动态性、高灵敏度和高通量等优势广泛应用于生命科学的各个领域,该文就代谢组学技术在RA早期诊断、疾病分型、药物疗效预测与评价研究等方面的进展进行综述,以期从代谢调控角度为RA的临床诊断和治疗提供新的思路。     

华蟾素通过调控基质金属蛋白酶抑制人胃腺癌细胞MGC-803侵袭与迁移

目的:探讨华蟾素对人胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移的影响及其分子机制。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测华蟾素(10,20,40,80,160,320 mg·L~(-1))对人胃腺癌MGC-803细胞增殖的抑制影响;transwell小室法检测华蟾素对MGC-803细胞侵袭与迁移能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测经华蟾素作用后的MGC-803细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2),基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1),基质金属蛋白酶抑制因子-2(tissue inhibitors of metalloproteinases-2,TIMP-2)的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测经华蟾素处理后的MGC-803细胞中MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2的mRNA表达情况。结果:(1)MTT比色法结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40,80,160,320 mg·L~(-1))对胃腺癌MGC-803细胞的增殖具有显著抑制作用(P0.01),并且华蟾素对MGC-803细胞的抑制作用呈浓度和时间依赖。(2)transwell实验结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40 mg·L~(-1))对胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移能力具有不同程度的抑制作用(P0.05)(3)Real-time PCR和Western blot实验结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40 mg·L~(-1))能够下调MMP-2,MMP-9蛋白和mRNA的表达,上调TIMP-1,TIMP-2蛋白和mRNA的表达。结论:华蟾素能明显抑制胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移,其机制可能与上调TIMP-1,TIMP-2的转录水平,进而下调MMP-2,MMP-9蛋白水平有关。     

南蛇藤提取物通过破坏线粒体结构促进胃癌AGS细胞凋亡的机制

目的 观察南蛇藤提取物（COE）对胃癌细胞的抑制作用，探讨COE通过影响线粒体结构和功能促进胃癌凋亡的一种全新的作用机制，为南蛇藤的进一步开发和临床应用提供实验依据。方法 5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）染色联合流式细胞实验用来检测不同质量浓度COE （20、40、80 mg·L^-1）对胃癌细胞增殖的影响。通过膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）染色实验联合流式细胞术检测COE对胃癌细胞凋亡的影响，用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位的变化，通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测COE对胃癌细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-xL（Bcl-xL）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶-3（Caspase-3）表达的影响，用透射电镜检测COE处理后的胃癌细胞线粒体微观结构的变化，包括线粒体膜完整性和内部嵴的变化。COE处理后，Western blot检测胃癌细胞线粒体标志蛋白超氧化物歧化酶1（SOD1）、电压依赖性阴离子通道蛋白（VDAC）、抗增殖蛋白1（PHB1）和热休克蛋白60（HSP60）水平的变化。结果 Brdu染色显示，与空白组比较，COE组（40、80 mg·L^-1）胃癌细胞的增殖比例明显下降（P<0.05）。AnnexinV-FITC染色显示，与空白组比较，COE组（40、80 mg·L^-1）胃癌细胞的凋亡数量明显增加（P<0.05）。JC-1线粒体膜电位检测显示，COE处理后组胃癌细胞的线粒体膜电位水平明显降低。Western blot结果显示，与空白组比较，COE组（20、40、80 mg·L^-1）促进胃癌凋亡的相关蛋白Bax和Caspase-3表达明显增加（P<0.05，P<0.01），COE组（40、80 mg·L^-1）胃癌细胞凋亡抵抗相关蛋白Bcl-2和Bcl-xL表达显著降低（P<0.01）。透射电镜结果显示，与空白组比较，COE组胃癌细胞的微观结构发生了明显变化，细胞膜内出现了很多空泡，线粒体结构出现破坏，线粒体内出现空泡。Western blot结果显示，与空白组比较，COE组（20、40、80 mg·L^-1）胃癌细胞中与应激反应有关的蛋白SOD1表达增高（P<0.05，P<0.01），COE组（80 mg·L^-1）与线粒体稳定和通透性相关的蛋白VDAC、PHB1和HSP60表达均显著下降（P<0.01）。结论 COE能够显著抑制胃癌细胞的增殖，促进胃癌细胞的凋亡，其机制可能与COE破坏胃癌细胞线粒体结构和功能从而激活细胞线粒体凋亡途径有关。     

南蛇藤提取物通过Cofilin1抑制胃癌BGC-823细胞转移的机制

目的:探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抑制胃癌侵袭转移的作用及其机制。为胃癌的中医药预防与治疗寻求新的靶点,为开发有效的抗胃癌中药奠定理论和实验基础。方法:利用前期蛋白质二维电泳技术,在胃癌中筛选出COE作用于胃癌的差异大的靶点蛋白。然后利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE(20,40,80 mg·L~(-1))干预后细胞中丝切蛋白1(Cofilin 1,CFL1)水平的表达情况。最后利用分子克隆技术,将胃癌细胞株BGC-823中的CFL1表达抑制,然后联合COE进行干预,检测COE是否能影响胃癌细胞的侵袭转移。结果:在前期实验基础上经过细胞水平的验证,CFL1能够在胃癌细胞中稳定高表达;Western blot结果显示,COE能抑制胃癌细胞中CFL1的表达,经不同质量浓度COE(20,40,80 mg·L~(-1))处理24 h的BGC-823细胞,其CFL1的水平受到了不同程度的抑制。随着COE的浓度递增,CFL1的表达逐渐减弱。与空白组比较,COE40,80 mg·L~(-1)组CFL1表达显著减少(P0.01);利用小干扰RNA(siRNA)技术干扰胃癌BGC-823细胞株后,CFL1表达受到明显抑制,与空白组比较,siRNA-CFL1慢病毒转染组BGC-823细胞中CFL1受到显著抑制(P0.01);细胞侵袭实验(transwell)显示COE能显著减少胃癌BGC-823细胞敲低表达后细胞的透膜细胞数(P0.01)。结论:COE能明显抑制胃癌BGC-823细胞的转移,其机制可能与抑制CFL1的过度表达有关。     

金龙胶囊对胃癌细胞MGC-803和BGC-823侵袭转移能力的影响

目的:探讨金龙胶囊对人胃癌MGC-803,BGC-823细胞侵袭和迁移能力的影响并对其具体机制进行探讨。方法:体外培养胃癌MGC-803,BGC-823细胞,分为金龙胶囊组(0.1,0.2,0.4,0.8 g·L~(-1)),空白组和5-氟尿嘧啶(5-FU)组,采用噻唑蓝(MTT)比色法分别检测金龙胶囊对MGC-803,BGC-823细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制率(IC50);采用细胞侵袭(transwell)小室法和划痕实验检测金龙胶囊处理MGC-803和BGC-823细胞24 h后,细胞侵袭和迁移能力发生改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测金龙胶囊处理MGC-803,BGC-823细胞24 h后E-钙黏素(E-cadherin),基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况。结果:金龙胶囊能明显抑制MGC-803,BGC-823细胞的增殖,呈一定的浓度及时间依赖性;与空白组比较,金龙胶囊能明细减少MGC-803,BGC-823细胞的穿膜细胞数目,可明显影响2种胃癌细胞的侵袭与迁移能力,并呈明显浓度依赖性(P0.05);金龙胶囊组的划痕距离较空白组明显降低,影响MGC-803,BGC-823细胞迁移,并呈浓度依赖性(P0.05);与空白组比较,金龙胶囊组能够提高MGC-803和BGC-823细胞中E-cadherin蛋白表达,降低MMP-2,MMP-9蛋白表达水平,且呈一定的量效关系(P0.05)。结论:金龙胶囊能够抑制人胃癌MGC-803,BGC-823细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与上调E-cadherin表达,抑制MMP-2,MMP-9表达水平有关。本研究证实了金龙胶囊对胃癌MGC-803,BGC-823细胞抗侵袭转移的部分机制。