hBcl-2和hVEGF165双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建hBcl-2和hVEGF165双基因共表达的重组腺病毒载体,为后续基因转染和动物实验提供实验基础。方法通过RT-PCR从A549细胞中分别获得hBcl-2和hVEGF165基因片段,并克隆到pMD-19T载体。将目的基因hBcl-2、IRES元件和hVEGF165依次定向克隆到腺病毒穿梭载体质粒pAd-Track-CMV上。线性化重组穿梭质粒后通过电穿孔转化含有腺病毒骨架质粒pAd-easy-1的感受态大肠杆菌BJ5183构建重组腺病毒载体质粒。脂质体转染线性化的重组腺病毒载体质粒于HEK293细胞以包装制备重组腺病毒。重组腺病毒经PCR鉴定之后进一步扩增、纯化。通过荧光计数确定病毒感染滴度。结果克隆的hBcl-2和hVEGF165基因测序正确,酶切重组穿梭载体质粒和腺病毒载体质粒得到特异酶切产物,重组腺病毒载体质粒转染HEK293细胞3 d后观察到GFP的表达,重组腺病毒的PCR得到hBcl-2和hVEGF165基因的PCR产物,滴度测定为5×109pfu/mL。结论成功构建制备了高滴度的hBcl-2和hVEGF165双基因共表达的重组腺病毒载体,为联合基因治疗心肌梗死的研究提供实验基础。     

高容量连续性血液净化联合机械通气治疗严重乳酸酸中毒

目的 探讨高容量连续性血液净化联合机械通气在严重乳酸酸中毒抢救中的作用.方法 回顾性分析11例严重乳酸酸中毒的临床资料.观察分析在常规治疗的基础上应用高容量连续性血液净化联合机械通气治疗前及治疗后24、48 h患者血乳酸、二氧化碳结合力(CO2CP)、pH值的变化,并统计这组患者的病死率.结果 治疗后24 h与治疗前比较,血乳酸下降、CO2CP和pH值升高,差异均有统计学意义(P<0.01);治疗后48 h与治疗后24 h比较血乳酸下降、CO2CP和pH值升高,差异均有统计学意义(P<0.05);本组患者的病死率为9.09%(1/11).结论 应用高容量连续性血液净化联合机械通气能明显降低严重乳酸酸中毒患者的乳酸水平,维持酸碱平衡,减少病死率.     

hBcl-2和hVEGF165双基因重组腺病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

目的 将hBcl-2和hVEGF165双基因共表达重组腺病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测目的 基因的表达及表达产物的生物学效应.方法 贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞;重组腺病毒转染BMSCs,用PCR法验证目的 基因mRNA在间充质干细胞中的表达;用ELISA及Western Blot检测双...     

高容量连续性血液净化在多器官功能障碍综合征患者治疗中的应用

目的 探讨高容量与常规容量连续性血液净化(CBP)治疗多器官功能障碍综合征(MODS)的疗效.方法 选择MODS患者38例,随机分为高容量CBP组(治疗组)18例、常规容量CBP组(对照组)20例,观察并比较两组治疗后24、48 h平均动脉压(MAP)、多巴胺剂量、PaO2/FiO2、APACHEⅡ评分、血乳酸、ICU住院时间、ICU病死率.结果 治疗后24、48 h,治疗组MAP、PaO2/FiO2升高,多巴胺剂量、APACHEⅡ评分、血乳酸减少,与对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05);与对照组比较,治疗组ICU住院时间缩短[ (8.54±4.15)d与(11.82±5.76)d]、ICU病死率明显降低(22.5％与35.0％)(均P＜0.05).结论 高容量连续性血液净化较常规容量连续性血液净化治疗MODS可降低病死率.     

早期连续性血液净化在老年严重脓毒症治疗中的作用

目的 探讨早期连续性血液净化(continuous blood purification,CBP)对老年严重脓毒症的治疗效果.方法 选择老年严重脓毒症患者48例,分成CBP组25例、对照组23例,两组都根据脓毒症治疗指南行集束治疗,CBP组进行集束化治疗的同时使用CBP治疗,在治疗前,治疗24、72 h检测患者血气分析、乳酸、血生化和血常规,应用APACHEⅡ评分对患者进行评估,记录患者机械通气时间、ICU住院时间、28 d的病死率.结果 CBP组的机械通气时间(5.56±3.46) d,ICU住院时间(9.14±3.12)d,28 d病死率32%;对照组的机械通气时间(8.04±5.26)d,ICU住院时间(11.62±4.83)d,28 d病死率52%;CBP组与对照组比较,机械通气时间、ICU住院时间减少,28 d病死率降低,差异有统计学意义(P＜0.05).CBP组治疗24、72 h后APACHEⅡ评分与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).CBP组治疗24、72 h后血乳酸值与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 早期CBP治疗老年严重脓毒症患者能够缩短机械通气时间和ICU住院间时,降低病死率.