结核DNA疫苗宿主蛋白残留检测方法的建立

目的 建立结核DNA疫苗中大肠杆菌宿主蛋白残留量检测的方法。方法 采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)建立结核DNA疫苗中宿主蛋白残留量检测的方法,对方法的准确度、专属性、线性范围和耐用性等进行验证,并采用建立的方法对结核DNA疫苗原液进行测定。结果 大肠杆菌宿主蛋白含量在2～24ng·L^-1范围内,相关系数R²>0.990,线性关系良好;该法宿主蛋白含量在高中低浓度范围内,回收率在70%～120%之内,准确度良好;该法不易受辅料、核酸、孵育温度和孵育时间影响,专属性和耐用性较好;三批原液的宿主蛋白残留量(HCP)均<1μg·mg^-1。结论 此方法有较好的准确度、专属性、重复性、中间精密度和耐用性,可用于结核DNA疫苗的宿主蛋白残留量的检测。     

治疗性结核DNA疫苗SDS含量检测

目的 应用吖啶橙法来检测治疗性结核DNA疫苗中的十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)的残留量.方法 将SDS标准液与吖啶橙混合后,经甲苯萃取处理后在波长499 nm测定吸光度值,根据标准曲线计算供试品中SDS的含量.结果 SDS浓度在0.005～0.32 mg·mL-1的范围内,相关系...     

基于离子交换色谱法检测结核治疗性DNA疫苗纯度的方法建立

目的 建立并验证结核治疗性DNA疫苗纯度的高效液相色谱测定方法。方法 采用TSK gel DNA-NPR（4.6 mm ×75 mm, 2.5 µm）色谱柱,流动相：以20 mmol·L^-1 三羟甲基氨基甲烷（pH=9）为流动相A,以20 mmol·L^-1三羟甲基氨基甲烷-1 mol·L^-1 氯化钠（pH=9）为流动相B,梯度洗脱,柱温：25 ℃;流速：0.5 mL·min^-1;检测波长：260 nm。结果 质粒DNA在0.5～2.5 µg的范围内与峰面积呈良好线性关系,R²=0.999 8,该法专属性、精密度和耐用性良好,检测限为0.001 mg·mL^-1,供试品在 24 h内稳定。结论 该方法符合检测结核治疗性DNA疫苗纯度的要求,适用于该产品的质量控制。