微藻异养产生二十碳五烯酸的新进展

二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid简写EPA)是一种长链多不饱和脂肪酸，在营养强化、防治心血管疾病、减轻炎症等方面起着十分重要的作用。目前EPA主要来源于鱼油，很难满足市场对EPA日益增长的需求，必须寻求替代生产EPA的资源。一些微藻可在不需要光的条件下以廉价的有机物为原料异养生长，在异养条件下，可以很好地控制培养模式，有可能大规模地生产EPA。工业上用微藻生产EPA研究包括：筛选高EPA产量的微藻株，通过基因工程改善藻株，优化培养条件以及建立有效的培养体系。本文综述了近几年微藻在异养条件下生产EPA的最新进展，着重阐明硅藻是一种能在异养条件下生长且具有高EPA产率的模式藻株。     

杜氏盐藻基因组文库的构建

目的　构建杜氏盐藻基因组文库,旨在进一步分离和研究杜氏盐藻基因的结构和功能。方法　采用改进的SDS裂解法提取杜氏盐藻基因组DNA ,通过限制性内切酶Sau3AI进行部分酶切,用T4DNA连接酶将目的片段与噬菌体EMBL3载体臂进行连接后转染大肠杆菌LE3 92。结果　体外包装构建了杜氏盐藻基因组文库,得到重组子数为2 .2×10 4,经测定文库滴度为2 .2×10 5pfu/mL。结论　构建了杜氏盐藻基因组文库,为进一步筛选盐藻重要基因及其序列分析奠定基础。     

铜绿微囊藻抗性株与野生株对铜离子的富积效应

目的：分离筛选高铜离子抗性的铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa),并研究其抗性机制及对铜离子的富积效果。方法：将抗性株与野生株分别加入不同浓度铜离子的BG11培养基中,在不同时间段取样过滤,分析过滤液中铜离子的残留量。结果：在相同时间内,抗性株比野生株产生类金属硫蛋白(MTL)的量要大,培养基中Cu^2 减少主要发生在培养后24h以前。抗性株在24h之前对Cu^2 富积较快,24h的去除率为48．87％,96h的去除率为80．77％;而野生株在24h之前对Cu^2 富积相对较慢,24h去除率为20．88％,96h的去除率为34．29％。结论：利用抗性株铜绿微囊藻治理高铜离子污染源具有较大的应用前景。     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白小分子干扰RNA对食管鳞癌细胞中mTOR-p70S6K信号通路及裸鼠移植瘤生长的影响

目的 检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)小分子干扰RNA(siRNA)对食管鳞癌中mTOR-p70S6K信号通路的阻断作用以及对裸鼠移植瘤生长的影响.方法 以食管鳞癌细胞株EC9706为研究对象,采用siRNA干扰、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、流式细胞术及CCK-8等方法,观察mTOR-p70S6K信号通路被阻断后,通路中各因子蛋白及mRNA表达的变化,及其对细胞增殖和凋亡的影响.进行裸鼠成瘤实验,观察mTOR siRNA对肿瘤生长的影响.结果 与未转染细胞相比,转染mTOR siRNA的细胞中mTOR和磷酸化p70S6K的表达水平降低(P<0.05),而pTOS6K的表达水平升高(P<0.05).转染mTOR siRNA后,细胞凋亡增加,细胞增殖能力降低,且对顺铂的敏感性增高,细胞被阻滞在G,期(P<0.05).mTOR siRNA能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,siRNA组和siRNA+顺铂组的肿瘤抑制率分别为50.9%和62.3%.结论 mTOR siRNA能有效抑制mTOR-pTOS6K信号通路,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,在裸鼠体内能显著抑制肿瘤的生长.mTOR-pVOSSK信号通路在食管鳞癌发生发展中起重要作用.     

干扰mTOR表达增强食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性

目的：观察哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性小干扰RNA（mTOR-siRNA）干扰mTOR表达后,食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素(rapamycin)敏感性的变化。方法：mTOR-siRNA转染EC9706细胞, RT-PCR检测干扰效果。mTOR-siRNA转染前后的EC9706细胞用雷帕霉素处理,Western blotting检测EC9706细胞中mTOR及其下游p70S6K蛋白的表达;流式细胞术检测EC9706细胞的周期及凋亡,CCK-8试剂盒检测EC9706细胞的增殖。结果：mTOR-siRNA下调EC9706细胞中mTOR mRNA的表达（P<0.05或P<0.01);雷帕霉素抑制EC9706细胞中mTOR和p-p70S6K蛋白的表达（P<0.05),并促进p70S6K蛋白表达(P<0.01),且mTOR-siRNA转染后此作用更明显（P<0.05）。雷帕霉素可诱导EC9706细胞凋亡(P<0.01)、抑制EC9706细胞增殖(P<0.05或P<0.01)、使EC9706细胞阻滞于G1期(P<0.01),且mTOR-siRNA转染后这些作用更强（P<0.05）。结论：mTOR-siRNA能特异性下调食管鳞癌EC9706细胞中mTOR表达,提高EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性。     

锌指转录因子Snail及E-钙黏附素在食管鳞癌中的表达及意义

目的：检测锌指转录因子Snail及E-钙黏附素（E-cadherin）蛋白在食管鳞癌中的表达,分析其与食管鳞癌侵袭、转移的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测Snail及E-cadherin在62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中的表达,并分析其与临床病理参数的关系。结果：食管鳞癌组织中Snail及E-cadherin蛋白表达均与癌的组织学分级、浸润深度及淋巴结转移密切相关（P<0.05);在食管鳞癌癌变过程中Snail蛋白表达在癌组织、癌旁不典型增生组织及正常黏膜组织中的表达率依次降低,分别为79.0%（49/62）、48.4%（15/31）、17.7%（11/62）,组间比较差异有统计学意义（χ²=50.129,P<0.01）;而E-cadherin蛋白在癌组织、癌旁不典型增生组织及正常黏膜组织中的表达率依次升高,分别为40.3%（25/62）、71.0%（22/31）、95.2%（59/62）,组间比较差异有统计学意义（χ² =48.426,P<0.01）。进一步相关性分析表明：Snail和E-cadherin蛋白在食管鳞癌组织中的表达呈负相关。结论：Snail及E-cadherin蛋白的异常表达可能与食管鳞癌的发生、发展密切相关,二者的联合检测有可能作为食管鳞癌侵袭、转移的重要生物学标志。     

小鼠canstatin cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的:从小鼠肝脏组织克隆canstatin cDNA并在大肠杆菌(E.coli)中表达, 为进一步研究其抗肿瘤血管生成活性奠定基础。方法: 用Trizol试剂提取小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增小鼠canstatin(m canstatin)的cDNA,克隆到pMD18-T载体中并进行序列分析。将小鼠canstatin cDNA 定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中, 在大肠杆菌E.coli BL21中经IPTG诱导表达。结果:小鼠canstatin的cDNA长度为684bp,编码227个氨基酸,与已知的人canstatin的cDNA同源性为89%,氨基酸的同源性为96%。IPTG诱导原核表达载体pET30a(+)/m canstatin在大肠杆菌E.coli BL21中表达。结论: 首次成功克隆了小鼠canstatin的cDNA, 其原核表达载体pET30a(+)/m canstatin在大肠杆菌E.coli BL21中高效表达,小鼠canstatin抗肿瘤血管生成活性有待进一步研究。     

PCR法扩增盐藻叶绿体atpA基因

目的：克隆杜氏盐藻叶绿体atpA基因片段。方法：把GenBank中近10种藻类的atpA全基因的氨基酸序列进行比较,设计简并引物,利用PCR方法从盐藻叶绿体DNA中扩增atpA基因片段,然后胶回收所扩片段并与T—vector相连,转化大肠杆菌JM109,挑阳性克隆鉴定,并测序,再将序列与所选藻类有关序列比较同源性。结果：从盐藻叶绿体基因组中扩增出约400bp的片段。测序结果显示此片段长405bp,推导的氨基酸序列与莱茵衣藻的同源性为920k,,普通小球藻为88％,,原始绿藻为87％,卵形肾藻为86％,Cyanidioschyzon merolae为85％。结论：本实验中所克隆的序列为杜氏盐藻的叶绿体atpA基因片段。     

多西紫杉醇或伊立替康联合顺铂、5-氟尿嘧啶治疗进展期胃癌的疗效及安全性

目的 比较多西紫杉醇(Doc)或伊立替康(CPT-11)联合顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)治疗进展期胃癌的近远期疗效以及安全性.方法 采用前瞻性随机对照的临床研究方法,将符合标准的病例随机分为Doc、DDP联合5-Fu方案(DCF)组和CPT-11、DDP联合5-Fu方案(ICF)组,其中DCF组16例,ICF组15例,DCF组:Doc 60 mg/m2,静脉滴注,第1天；DDP 75 mg/m2,分3d静脉滴注；5-Fu500 mg/ m2,静脉滴注,第1天至第5天.ICF组:CPT-11 65 mg/m2,静脉滴注,第1、8天；DDP、5-Fu用量用法同DCF组.如应用CPT-11后出现乙酰胆碱能综合征,则下一个周期滴注前预防性给予阿托品0.5 mg皮下注射.每3周重复,直至患者疾病进展或出现不可耐受的不良反应,最多6个周期.每2个周期评价疗效.化疗结束后每月随访一次,用Kaplan-Meier法分析主要终点指标无进展生存(PFS)期及总生存(OS)期.结果 DCF组与ICF组有效率分别为40.00％(6/15)和38.46 ％(5/13)(x2=0.007,P=0.934).DCF组与ICF组中位生存期分别为9.5个月和10.0个月(t=0.39,P=0.5334).1年生存率为30.68％和26.43％.结论 两种方案治疗的近远期疗效相近,主要不良反应是骨髓抑制和腹泻等,经对症处理后均缓解,未出现治疗相关死亡,是晚期胃癌的一线有效治疗方案,值得临床继续观察疗效.     

食管鳞状细胞癌组织中Survivin与Caspase-3蛋白的表达

目的:检测人食管鳞状细胞癌组织中Survivin与Caspase-3蛋白的表达情况.方法:采用免疫组织化学SP法检测60例食管鳞状细胞癌及60例正常食管黏膜组织中Survivin及Caspase-3蛋白的表达情况,分析其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系及2者表达的关联性.结果:食管鳞状细胞癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率为51.7%(31/60),高于正常食管黏膜组织的8.3%(5/60)(χ2=26.825,P<0.001);且食管鳞状细胞癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率与浸润深度(χ2=8.721,P=0.003)和淋巴结转移情况(χ2=13.158,P<0.001)有关.食管鳞状细胞癌组织中Caspase-3蛋白的阳性表达率为40.0%(24/60),低于正常食管黏膜组织的81.7%(49/60)(χ2=21.860,P<0.001);且食管鳞状细胞癌组织中Caspase-3蛋白的阳性表达率与浸润深度(χ2=6.123,P=0.013)和淋巴结转移情况(χ2=5.884,P=0.015)有关.食管鳞状细胞癌组织中Survivin与Caspase-3蛋白的表达有关联(χ2=5.384,rP=0.300,P=0.020).结论:Survivin蛋白高表达、Caspase-3蛋白低表达可能参与食管鳞状细胞癌的发生发展.