北柴胡β-香树脂醇合酶基因家族成员鉴定及功能验证

目的 从转录组层面对北柴胡Bupleurum chinense β-香树脂醇合酶（β-amyrin synthase,β-AS）基因家族成员进行鉴定,并对其表达及功能进行分析验证,以期为解析柴胡皂苷的合成和调控提供基础。方法 基于全长转录组数据挖掘北柴胡β-AS基因家族成员（BcBASs）,利用在线软件对各基因进行生物信息学分析,利用大肠杆菌和烟草验证关键基因的功能。结果 从北柴胡转录组数据中挖掘到不冗余的β-AS基因6个,可分为3个亚家族,它们都具有典型保守区域DCTAE、MWCYCR和QW。进化分析表明,BcBAS1、BcBAS2、BcBAS4、BcBAS5、BcBAS6可能为单功能β-AS基因,BcBAS3可能为多功能β-AS基因,表达分析表明各基因在根和叶中的表达模式有差异。在大肠杆菌中成功表达了BcBAS1可溶性重组蛋白,相对分子质量约87 000,烟草瞬时表达表明BcBAS1编码蛋白具有β-AS功能,能促进β-香树脂醇的积累。结论 对北柴胡中6个不冗余的β-AS基因家族成员进行了鉴定和生物信息学分析,获得了BcBAS1可溶性重组蛋白,在烟草中验证了BcBAS1为有功能的β-AS,为柴胡皂苷合成调控机制和生物合成研究奠定了基础。     

乌头简单序列重复区间扩增条件的优化

目的保证乌头ISSR—PCR的稳定性、提高对乌头遗传多样性，亲缘关系分析、种质鉴定的可靠性。方法收集西南地区23个乌头材料，以Mg^2＋，dNTP，引物和聚合酶建立L9（3^4）正交设计，并同时考察模板和甲酰胺浓度及退火温度，建立适宜的ISSR—PCR体系。结果以Mg^2＋2．0mmol／L、dNTP0．25mmol／L、引物0．3μmol／L、rTaq酶1u、模板1．5ng／μl、甲酰胺2％及退火温度（Tm-3）℃的ISSR反应体系最优。结论实验建立的ISSR—PCR体系反应稳定，能用于乌头6^TSSR奔析     

川乌(附子)块根质量与摘心留叶数对附子产量的影响

川乌(附子)是四川道地药材之一,其原植物为毛茛科乌头属植物乌头Aconitum carmichaeliDe-bx[·1-3]。川乌(附子)主产于四川省绵阳地区和陕西汉中地区,其道地性药材最佳产地是四川绵阳地区的江油市[2,4]。川乌(附子)的研究在栽培上包括对生产布局研究[5,6],及主要栽培措施记载[7-9]。江油附子栽培区主要是涪江流域冲击潮土平坝区,其栽培用种则来源于临近的安县、北川、青川等山区的繁殖种,需年年换种,以防病。栽培上还要进行摘心....     

川西北野生九眼独活总香豆素的提取条件优化及含量测定

目的比较不同的样品制备方法 ,建立九眼独活中总香豆素的测定方法 ,并比较川西北不同产地九眼独活中总香豆素的含量。方法采用回流、超声避光浸渍的方法提取总香豆素,以东莨菪素为对照品,用紫外分光光度法,在348nm波长处测定总香豆素的含量。结果不同产地九眼独活总香豆素含量分别为平武0.059%、北川0.074%、青川0.072%、阿坝0.109%、茂县0.061%。结论无水乙醇避光浸渍的提取方法简便,可用于九眼独活中总香豆素的提取。     

基于实时荧光定量PCR分析的北柴胡内参基因的筛选及验证

目的筛选出在北柴胡不同生长时期及不同器官中表达均稳定的内参基因并进行验证。方法利用实时荧光定量PCR获得18个候选内参基因所有Ct值,通过3种不同算法(Bestkeeper、Norm Finder、Ge Norm)的软件对内参基因稳定性进行分析,采用皮尔森相关系数(Pearson correlation coefficient)分析3个软件给出的稳定性排名结果。结果所有候选内参基因的Ct值相对宽泛,ADF1b、ADF5、ADF7、e IF2b和ACT2为最为合适的内参基因,而e IF6被认为稳定性最差的内参基因。3个软件计算结果均呈现显著性相关。结论采用实时荧光定量PCR结合3种不同算法进行北柴胡内参基因的筛选及验证是可行的。在北柴胡柴胡分子遗传研究中,发掘到的内参基因对目的基因进行均一化处理有助于提高目的基因表达分析的精确性及可信度。     

生附片绿色加工及褐变抑制研究北大核心CSCD

目的:针对目前生附片加工过程中褐变明显、双酯型生物碱含量较低问题,探索创新高品质生附片的绿色加工方法。方法:以鲜附子切片化学褐变抑制剂处理后烘干为对照,比较鲜附子阶段升温灭酶切片烘干法、鲜附子切片直接烘干、鲜附子切片自然晒干、鲜附子切片天然褐变抑制剂处理烘干、鲜附子切片后烫漂处理烘干5种绿色加工方式对生附片褐变抑制及双酯型生物碱含量的影响。结果:鲜附子切片自然晒干、鲜附子切片直接烘干和烫漂处理抑制褐变效果较差,天然褐变抑制剂能有效抑制生附片的褐变,而阶段升温灭酶切片法抑制褐变效果和外观最好,双酯型生物碱含量略低于鲜附子切片自然晒干,与其余方法基本相当。结论:阶段升温灭酶切片烘干法用于生附片的绿色加工有较大的应用前景。     

北柴胡侧根发育及影响因素探究

目的探索北柴胡Bupleurum chinense侧根发育过程及影响侧根发育的因素,为北柴胡产量提升及商品性改良提供技术支撑。方法对北柴胡品种川北柴1号主根进行石蜡切片观察侧根原基发育动态图,以及添加不同浓度生长调节物质后进行根系参数考察。结果北柴胡侧根原基起源于中柱鞘细胞,部分内皮层细胞也参与侧根原基发育;施加10μmol/L IAA和Ca2+浓度均最大化促进北柴胡根系发育,而浓度过高则抑制侧根发育;施加0.1μmol/L TIBA和10μmol/L EDTA显著促进柴胡根系发育,浓度过高则起抑制效果。结论本研究方法还可以广泛应用于人参、当归等以根入药的药用植物中,对药用植物栽培及育种工作具有重大意义。     

不同干燥方法对附子提取物中双酯型生物碱的影响

目的:了解不同干燥方法对附子提取物中双酯型生物碱的影响,确定适宜的干燥方法。方法:采用高效液相色谱方法,对冷冻干燥、烘箱干燥、真空干燥和喷雾干燥等不同干燥方法所得附子提取物中的中乌头碱、乌头碱和次乌头碱等3种双酯型生物碱的含量进行测定。结果:不同干燥方法所得附子提取物中的中乌头碱、乌头碱和次乌头碱的损失率为:冷冻干燥分别为7.14%、5.71%、5.41%;烘干分别为56.43%、31.43%、32.43%;真空干燥分别为29.29%、34.29%、10.81%;喷雾干燥分别为14.29%、11.43%、8.11%。结论:喷雾干燥对附子提取物中的中乌头碱、乌头碱和次乌头碱3种双酯型生物碱的影响较小,可低成本地进行工业化生产,是附子合适的干燥方法。     

川附子粗多糖提取工艺的研究

目的：研究川附子粗多糖最佳提取工艺。方法：通过单因素试验和L9（3^4）正交试验，研究了料水比、温度、提取时间、pH、提取次数、醇沉浓度对川附子粗多糖提取率的影响。结果：温度和料水比是影响川附子粗多糖提取率的主要因素，最佳提取工艺为料水比1：40，提取温度90℃，时间2h，pH8，提取1次，醇沉浓度80％。在此条件下，测得川附子粗多糖提取率为13．07％，含糖量为9．11％。结论：本工艺为川附子粗多糖的进一步研究奠定了基础。