S腺苷甲硫氨酸对肝癌细胞急性缺血/缺氧过程中的生物学作用

目的：研究S腺苷甲硫氨酸（SAMe）在急性缺血/缺氧过程中对肝癌细胞HepG2的生物学作用,并通过检测自噬的变化探讨其可能机制。方法：real time-PCR检测自噬特异性基因（Beclin 1）表达的变化;吖啶橙染色后,采用荧光显微镜定性观察自噬;CCK-8法检测HepG2细胞的成活率;用AnnexinⅤ/PI流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果：SAMe可诱导HepG2细胞的自噬,在单纯缺血和缺血/缺氧处理因素下,HepG2自噬在荧光强度和Beclin 1基因水平分别比空白对照组增强约3.2倍和3.5倍。细胞成活率分别比空白对照组增加了约20%和30%。SAMe对HepG2细胞具有显著的抑制作用,这种抑制作用在缺血/缺氧环境中更加明显,SAMe单独处理组和SAMe预处理结合缺血/缺氧组,其细胞成活率与空白对照组相比分别下降了约30%和70%。随着细胞成活率下降,细胞凋亡比例相应增加,与空白对照组相比,细胞经SAMe处理后凋亡比例增加约18%;细胞经SAMe预处理后再予以缺血/缺氧,凋亡比例增加约30%。结论：在SAMe抑制HepG2细胞生长过程中,自噬起着重要作用。     

let-7a调控自噬对缺氧状态下原发性肝癌HCCLM3细胞增殖的影响*

目的 探讨let-7a调控自噬对缺氧状态下原发性肝癌HCCLM3细胞增殖的影响。方法 将HCCLM3细胞分为常氧组、缺氧组和缺氧let-7a组,分别给予不同的处理。各组设6个平行孔,培养72 h。采用吖啶橙染液法测定HCCLM3细胞自噬率,采用MTT法检测HCCLM3细胞活力,使用流式细胞仪分析HCCLM3细胞周期G1,采用酶联免疫吸附法测定培养上清let-7a、细胞周期D1蛋白（cyc D1）和血管内皮生长因子（VEGF）水平。结果 缺氧let-7a组细胞存活率为（49.7±9.5）%,显著低于常氧组或缺氧组的（100.0±0.0）%或（119.1±13.1）%（P<0.05）,缺氧组细胞存活率显著高于常氧组（P<0.05）;缺氧let-7a组细胞周期G1期和细胞自噬率分别为（89.6±16.1）%和（49.3±7.4）%,显著高于常氧组或缺氧组的（56.3±11.0）%和（13.2±8.1）%或（69.7±14.1）%和（23.5±5.5）%（P<0.05）,缺氧组细胞周期G1期和自噬率显著高于常氧组（P<0.05）;缺氧let-7a组细胞let-7a蛋白水平为（96.1±9.3） μmol/L,显著高于常氧组或缺氧组的（33.4±7.1）μmol/L或（65.3±5.2）μmol/L（P<0.05）,cyc D1和VEGF水平分别为（72.3±8.8）μmol/L和（56.3±6.3）μmol/L,显著低于常氧组或缺氧组的（124.1±7.2）μmol/L和（114.1±5.2） μmol/L或（98.2±6.7） μmol/L和（85.2±8.1）μmol/L（P<0.05）,缺氧组let-7a蛋白显著低于常氧组（P<0.05）,cyc D1和VEGF显著高于常氧组（P<0.05）。结论 上调let-7a在肝癌HCCLM3细胞的表达能诱发细胞自噬,使得细胞在G1期往S期的分化过程发生障碍,抑制细胞在缺氧环境中的增殖,其机制可能与细胞CYC D1和VEGF表达下调有关。     

急性缺血缺氧诱导肝癌细胞自噬及其相关机制

目的:研究急性缺血/缺氧时肝癌细胞HepG2增殖率及自噬的变化,探讨自噬的作用及机制。方法 :以Western印迹法检测缺氧诱导因子-1(hypoxia induced factor-1,HIF-1)表达并确定体外模拟模型的可靠性;吖啶橙染色后采用荧光显微镜定性观察自噬;以自噬特异性蛋白LC3及P62(P62/SQSTM1)信号蛋白的变化表明自噬的诱导和可能的调控机制;以CCK8检测3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬前后急性缺血/缺氧下HepG2细胞的增殖率变化。结果:急性缺血/缺氧2 h后,HepG2细胞显著表达HIF-1α蛋白,表明体外急性缺血/缺氧模型的可靠性。急性缺血/缺氧可快速诱导肝癌细胞HepG2产生自噬,继而出现HepG2细胞显著增殖活跃;3-MA抑制自噬后,可特异性抑制急性缺血/缺氧所诱导的HepG2细胞增殖;急性缺血/缺氧条件下HepG2细胞P62信号蛋白表达显著下调,自噬抑制后逐渐恢复正常表达水平。结论:自噬在肝癌体外急性缺血/缺氧过程中对肿瘤起到保护作用,其机制可能与P62蛋白的清除有关;抑制自噬可显著降低肝癌细胞增殖率。自噬可能成为肝癌治疗的新靶点。     

3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲对不同p53状态肝癌细胞中生长抑制及DNA损伤诱导基因45β的诱导差异及其机制

目的 探讨3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲(Triapine)对不同p53状态肝癌细胞的生长抑制及DNA损伤诱导基因45β(GADD45β)诱导差异及其调控机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B+p53;体外合成GADD45β近端6个启动子序列群(-618 ～-314),构建荧光素表达质粒,转染肝癌细胞株HepG2、Hep3B和Hep3B+p53;以实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)比较Triapine对GADD45β表达诱导及其近端启动子活性影响差异;进一步比较对DNA合成和细胞克隆形成能力抑制差异;并通过半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达变化测定细胞凋亡的发生和发展.结果 Triapine对Hep3B中GADD45诱导并不明显,Hep3B+p53对Triapine敏感性明显增加,2.5、5.0μmol/L剂量下GADD45/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)比值分别为0.0425和0.0704,并呈现出剂量-效应的正相关关系.荧光素分析提示Triapine作用Hep3B+p53后的启动子核因子(NF)-κB(-618/+6)和E2F-1(-470/+6)活性较Hep3B明显增强约1.3倍和0.7倍.Triapine能够更加明显地抑制Hep3B +p53的DNA合成能力和细胞克隆形成能力,5μmol/L Triapine对Hep3B +p53DNA合成的抑制率为40.89％,对细胞克隆形成能力的抑制率达到68.16％,与Hep3B比较差异有统计学意义(P＜0.05).Triapine作用后Hep3B+p53的Caspase-3能迅速激活,活性高峰提前出现于6h.结论 p53在核糖核苷酸还原酶抑制剂化疗药物对肝癌细胞的GADD45诱导中具有重要作用,其作用机制可能是增强转录调节因子的表达水平.     

let-7a调控自噬对缺氧状态下原发性肝癌HCCLM3细胞增殖的影响

目的探讨let-7a调控自噬对缺氧状态下原发性肝癌HCCLM3细胞增殖的影响。方法将HCCLM3细胞分为常氧组、缺氧组和缺氧let-7a组,分别给予不同的处理。各组设6个平行孔,培养72 h。采用吖啶橙染液法测定HCCLM3细胞自噬率,采用MTT法检测HCCLM3细胞活力,使用流式细胞仪分析HCCLM3细胞周期G1,采用酶联免疫吸附法测定培养上清let-7a、细胞周期D1蛋白(cyc D1)和血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果缺氧let-7a组细胞存活率为(49.7±9.5)%,显著低于常氧组或缺氧组的(100.0±0.0)%或(119.1±13.1)%(P0.05),缺氧组细胞存活率显著高于常氧组(P0.05);缺氧let-7a组细胞周期G1期和细胞自噬率分别为(89.6±16.1)%和(49.3±7.4)%,显著高于常氧组或缺氧组的(56.3±11.0)%和(13.2±8.1)%或(69.7±14.1)%和(23.5±5.5)%(P0.05),缺氧组细胞周期G1期和自噬率显著高于常氧组(P0.05);缺氧let-7a组细胞let-7a蛋白水平为(96.1±9.3)μmol/L,显著高于常氧组或缺氧组的(33.4±7.1)μmol/L或(65.3±5.2)μmol/L(P0.05),cyc D1和VEGF水平分别为(72.3±8.8)μmol/L和(56.3±6.3)μmol/L,显著低于常氧组或缺氧组的(124.1±7.2)μmol/L和(114.1±5.2)μmol/L或(98.2±6.7)μmol/L和(85.2±8.1)μmol/L(P0.05),缺氧组let-7a蛋白显著低于常氧组(P0.05),cyc D1和VEGF显著高于常氧组(P0.05)。结论上调let-7a在肝癌HCCLM3细胞的表达能诱发细胞自噬,使得细胞在G1期往S期的分化过程发生障碍,抑制细胞在缺氧环境中的增殖,其机制可能与细胞CYC D1和VEGF表达下调有关。     

超“UCSF标准”肝细胞癌肝移植术前经肝动脉化疗栓塞的疗效

目的: 评估经肝动脉化疗栓塞（TACE）在超“UCSF标准”肝细胞癌（HCC）肝移植术前治疗的安全性及疗效。方法: 回顾性分析2003年1月至2013年3月在本院行肝移植治疗的83例超“UCSF标准”的成年HCC病人临床资料,根据术前是否采取TACE治疗分为TACE治疗组（63例）与对照组（20例）。比较两组病人术后急性排异、胆道并发症和血管并发症发生率、无瘤生存率及总生存率。结果: TACE治疗组在肝移植术前平均进行了（2.0±1.3）次TACE疗程,末次治疗至肝移植的平均时间为（15.7±8.4） d。TACE治疗组与对照组相比,在肝移植术后急性排异、肝动脉栓塞和胆道并发症发生率差异无统计学意义（P>0.05）。TACE治疗组无瘤生存率及总生存率明显优于对照组（P<0.05）。分层分析表明,TACE治疗后获得完全反应或部分反应的HCC病人行肝移植1、3、5年无瘤生存率及总生存率明显高于TACE治疗后无反应组（P<0.05）。TACE治疗后肿瘤降期至“UCSF标准”的HCC病人行肝移植1、3、5年无瘤生存率及总生存率明显高于降期治疗后未达到“UCSF标准”的病人（P<0.05）。结论: 肝移植术前TACE治疗可延长病人无瘤生存及总生存时间。肝移植术前TACE降期治疗安全,仅1例发生肝动脉栓塞并发症。     

颈椎骨折脱位合并颈髓损伤的围手术期护理

[目的]探讨急性颈椎骨折脱位合并颈髓损伤患者的围手术期护理方法.[方法]对56例急性颈椎骨折脱位合并颈髓损伤的患者进行术前训练,心理护理,呼吸道准备,术后实施体位护理,严密观察生命体征和脊髓神经功能的改善情况,指导功能锻炼及防治并发症.[结果]所有病例均获得6～31个月随访,平均随访17.6个月,按照日本骨科学会JOA评分法评分,术前0～13分,平均7.76分;术后JOA评分为6～17分,平均10.3分,改善率为68.5%,优良率为74.1%.[结论]加强急性颈椎骨折脱位合并颈髓损伤的围手术期护理是保证手术效果,预防和减少术后并发症,促进患者康复的重要环节.     

自噬在肿瘤治疗中的研究进展

自噬是广泛存在于真核细胞内的一种溶酶体依赖性的降解途径,细胞质内形成空泡为其特征.近年来研究发现,肿瘤细胞面对自身新陈代谢或外部人为干预诱导的应激反应时,自噬表达升高并对细胞有保护作用,这可能有助于发现新的肿瘤治疗方法.本文对自噬与肿瘤发生发展的关系及其在肿瘤治疗中的作用进行综述.     

重症手足口病预警指标及早期干预治疗的临床研究

目的:通过分析重症手足口病患儿的临床特点,探讨手足口病患儿的预警指标,积极干预及时阻断病情进展的有效方法。方法:总结本院收治的215例重症手足口病患儿的相关信息进行分析。结果:重症手足口病患儿的高危因素,主要表现为:年龄小于3岁,体温大于39℃,精神差,呕吐,肢体无力,肌阵挛,抽搐,呼吸、心率增快,出冷汗,末梢循环不良,高血压或低血压,外周血白细胞计数明显增高,血糖增高,胸片异常动态变化较快者。结论:重症手足口病病情进展快,病死率高。临床医生发现重症高危因素时应高度重视,密切观察,早期筛查出高危因素的患儿,应给予积极治疗,提高好转率,减少重症病死率。     

背最长肌肌红蛋白mRNA表达与肉色表观性状之间的相关

选用肥育期苏太猪100头,屠宰后取背最长肌.采用相对定量RT-PCR法测定肌红蛋白(Myoglobin,Mb)mRNA表达水平;分光光度分析法测定肌红蛋白浓度;用色度仪分别测定肌肉色度参数,包括L值、a*值、b*值、C值和Hue值;此外用畜牧学常规方法对肉色进行评分,并分析上述指标之间的相关.结果显示:肉色评分与色度参数L值(r=-0.235,P=0.018)和a*值(r=0.459,P=0.002)间存在显著相关;Mb浓度与肉色评分(r=0.407, P=0.0002),与a*值(r=0.406,P=0.0002),与Mb mRNA水平(r=0.364,P=0.008)均存在显著相关;Mb mRNA与肉色评分(r=0.426,P=0.002),与a*值(r=0.379,P=0.006)显著相关.