编码霍乱肠毒素B亚单位基因植物表达载体的构建

目的：构建含霍乱肠霉素B亚单位（CTB）基因的植物双元表达载体。方法：采用高保真PCR方法调出CTB基因，定向克隆到中间载体pRTL2，经测序证实核酸序列正确后，再亚克隆到含植物双元表达载体pBI121上，采用电击法，将含CTB的植物表达载体转入根癌农杆菌中，并进行酶切证实。结果：PCR扩增的CTB片断亚克隆到中间载体，得到pRTB和pRCTBK，测序证实CTB核酸序列正确；再与根癌农杆菌双元载体pBI121连接，获得含CTB基因的植物双元表达载体pBI-CTB和pBI-CTBK，转入根癌农杆菌的载体，酶切证实正确，结论：采用正确技术路线，构建了含CTB基因的植物表达载体，为下一步的转基因植物表达研究打下了坚实的基础。     

编码霍乱肠毒素B亚单位基因植物表达载体的构建

目的构建含霍乱肠毒素B亚单位(CTB)基因的植物双元表达载体。方法采用高保真PCR方法调出CTB基因,定向克隆到中间载体pRTL2,经测序证实核酸序列正确后,再亚克隆到含植物双元表达载体pBI121上;采用电击法,将含CTB的植物表达载体转入根癌农杆菌中,并进行酶切证实。结果PCR扩增的CTB片断亚克隆到中间载体,得到pRCTB和pRCTBK,测序证实CTB核酸序列正确;再与根癌农杆菌双元载体pBI121连接,获得含CTB基因的植物双元表达载体pBI-CTB和pBI-CTBK,转入根癌农杆菌的载体,酶切证实正确。结论采用正确技术路线,构建了含CTB基因的植物表达载体,为下一步的转基因植物表达研究打下了坚实的基础。     

固液相转移催化反应合成丙戊酸类抗癫痫药物

我厂生产丙戊酸钠和丙戊酰胺的原工艺路线是分别以丙二酸二乙酯和氰乙酸甲酯为起始原料,经双烷基化、水解、脱羧、成盐或水解酰胺化四步反应而得。关键中间体二丙基化合物,是以乙醇钠为烷基化缩合剂,需在无水条件下反应,反应速度慢,副产物多,成本高。自从相转移催化反应新技术广泛应用于有机合成后,促进了烷基化的研究工作。苏联学者 Babayan将丙二酸二乙酯用氯代烷在季铵盐和40％氢氧化钾水溶液存在下进行烷基化反应获得成功。六十年代后,很多研制的产物大多为单烷基化物或以单烷基化物为主的单双     

军队干休所离休干部医疗服务保障实践与体会

本文针对“两高期”军队离休老干部医疗服务保障特点,从创新为老干部医疗保障模式、完善为老干部医疗保障条件、增强为老干部医疗保障实效等方面,全面总结了做好军队干休所离休干部医疗保障工作的实践经验与体会,以期为其他单位做好老干部医疗服务保障工作提供借鉴。     

不同亚型的滤泡辅助性T淋巴细胞在类风湿关节炎中的临床意义

目的：检测类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）患者外周血中滤泡辅助性T（T follicular helper, Tfh）淋巴细胞亚型以及效应型滤泡辅助性T（T follicular helper effector memory, Tfhem）细胞的表达,并探讨二者作为活动性RA患者血液标志物的价值。方法： 流式细胞术分别检测41例RA患者和32例健康受试者的外周血中Tfh（CD3+CD4+CXCR5+CD45RA-）细胞亚型 Tfh1（CXCR3+CCR6-Tfh）、Tfh2（CXCR3-CCR6-Tfh）、Tfh17（CXCR3-CCR6+Tfh）和Tfhem （CD4+CXCR5+CCR7lowPD-1high）的水平。收集入组RA患者的临床资料及实验室指标,分析上述细胞亚型表达水平与RA疾病活动和实验室指标的相关性,酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent, ELISA）检测相关血清细胞因子。结果： RA患者外周血中Tfhem细胞的表达率明显高于正常对照组（12.8%±5.7% vs. 8.7%±2.0%, P=0.001）。Tfhem细胞表达水平与RA患者疾病活动指数（disease activity score in 28 joints, DAS28）及红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate, ESR）存在显著相关性（r(DAS28)=0.205, r(ESR)=0.141,P<0.05）,与抗角蛋白抗体（anti-keratin antibody,AKA）、抗核周因子（anti-perinuclear factor, APF）及IgM型类风湿因子（immunoglobulin M rheumatoid factors,IgM-RF）、IgA、IgM及IgG等临床指标则无明显相关性。Tfh2表达水平在RA组显著高于正常对照组（3.002%±0.408% vs. 1.730%± 0.160%, P=0.013）。Tfh2-high组RA患者的IgA［（3.045±0.261）g/L vs.（3.963±0.815） g/L,P=0.172］、IgG［（13.800±0.862）g/L vs.（16.980±0.224） g/L,P=0.161］和IgM［（1.135±0.083）g/L vs.（1.731±0.380） g/L,P=0.140］高于Tfh2 low组,但差异尚无统计学意义（P>0.05）。与Tfh低表达组相比,Tfh2高表达组血清中IL-4［（2.322±0.214）ng/L vs. （3.994±0.751） ng/L, P=0.056］和IL 10［（1.898±0.105） ng/L vs. （3.125±0.880） ng/L, P=0.140］升高,差异无统计学意义（P>0.05）。结论： Tfhem细胞的表达与RA患者病情活动有关,可能在RA的发病过程中有预警作用,并可能成为将来治疗RA的靶细胞;Tfh2及其相关细胞因子在RA患者中明显增加,可能参与了RA的发生和发展。