甲基硝基亚硝基胍诱导的一种全核γH2AX染色的特性研究

目的：明确甲基硝基亚硝基胍（MNNG）诱导的全核γH2AX所代表的DNA损伤的性质。方法：利用免疫荧光方法观察人羊膜FL细胞中MNNG诱导的γH2AX焦点的形成，中性彗星实验检测DNA双链断裂的形成，碱性彗星实验检测DNA单链、双链及其他类型损伤。结果：MNNG在10mg／L时能诱导一种特殊的全核染色，1mg／L时能在一部分细胞中诱导这种全核染色，但作用比较微弱。在这类细胞中中性彗星实验不能检测到明显的DNA双链断裂的形成，而碱性彗星实验能显示有DNA损伤的存在。结论：尽管γH2AX焦点被认为是DNA双链断裂的特异性标志，这种全核染色可能代表着另外类型的DNA损伤。     

γH2AX的检测方法简介

DNA损伤有许多不同的形式，如碱基修饰，DNA单链断裂（DNA single stranded breaks，SSBs），DNA链内和链间交联以及DNA双链断裂（DNA double stranded breaks，DSBs）等，其中DSBs被认为是DNA最严重的损伤。细胞在DSBs发生后，产生一系列的应激反应，其中一个主要的反应就是毛细血管共济失调突变基因（ataxia telangiectasia mutated，ATM）起始的信号级联反应，它使细胞周期停顿直到损伤修复。H2AX是这一信号级联反应中的一个主要成员，它能被ATM磷酸化（称为γH2AX，或ganunaH2AX），并在随后的损伤修复过程中发挥着重要的作用。     

2-乙酰氨基芴诱导γH2AX焦点的形成

目的探讨DNA损伤剂2-乙酰氨基芴(2-AAF)是否可诱导γH2AX焦点的形成及γH2AX作为检测DNA损伤的一个新的特异指标的可能性。方法用2-AAF处理中国仓鼠CHL细胞,应用免疫荧光方法检测γH2AX焦点的形成,并通过中性彗星实验验证DNA损伤的程度。结果0.1,1,5和20mg·L-1的2-AAF都可使细胞核内γH2AX焦点数量及有γH2AX焦点生成的细胞数量增加,但只有20mg·L-12-AAF处理的细胞才出现明显的彗尾增长及有彗尾的细胞数量增加。另外,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)家族抑制物渥曼青霉素可抑制2-AAF诱导的γH2AX焦点形成。结论2-AAF可通过激活PI3K家族成员使H2AX磷酸化,进而诱导γH2AX焦点的形成。γH2AX检测DNA损伤的敏感性优于彗星实验,因此,γH2AX有可能成为衡量DNA损伤程度的良好指标。     

γH2AX:DNA双链断裂的标志

γH2AX是目前国内外研究细胞DNA损伤应激反应的热点之一。细胞在电离辐射或其他因素作用下直接诱导或是通过复制压力诱导形成的双链断裂(DSBs) ,以及细胞自身调控的程序性DSBs和逆转录病毒转染细胞过程中产生的DSBs均可诱导H2AX的磷酸化(γH2AX)和簇集。本文对H2AX及其组蛋白家族,以及γH2AX与DSBs之间的关系及可能作为一个探测DNA损伤的新分子探针来利用作一简要综述。     

甲基硝基亚硝基胍诱导CHL细胞中γH2AX焦点的形成

背景与目的： 研究甲基硝基亚硝基胍(MNNG)是否可诱导中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)中γH2AX焦点的形成,以及是否有细胞系依赖性。 材料与方法： 应用MTT试验检测不同浓度MNNG对鼠CHL细胞的生存率的影响;应用免疫荧光实验检测细胞中γH2AX焦点的形成。 结果： MTT检测表明MNNG对CHL细胞的细胞毒性有明显的时间和剂量效应;免疫荧光实验发现1 mg/L MNNG处理2 h、8 h、24 h的CHL细胞中含有γH2AX焦点的细胞比例及焦点数均较对照组显著增加(P<0.05),含有超过30个γH2AX焦点的细胞比例分别达到56％,92％和91％。 结论： MNNG可以诱导CHL细胞中γH2AX焦点的形成,并且有明显的时间效应。