报告基因方法监测重金属汞及其化合物的早期毒性

目的：基于热休克信号响应和分泌型碱性磷酸酶（SEAP）报告基因,建立HSE-SEAP-HeLa细胞模型,预测重金属（汞及其化合物）的早期毒性。方法：将pHSE-SEAP质粒转染到人子宫颈癌HeLa细胞中,建立瞬时HSE-SEAP响应模型。热休克（42 ℃,1 h）或重金属化合物（CdCl₂,5 μmol·L^-1,4 h）处理后,在完全DMEM培养基中恢复48 h后,检测细胞上清液中的分泌型碱性磷酸酶的含量（表示该状态下细胞中的热休克蛋白表达量）,同时用MTT方法检测对应浓度下的细胞活性,以验证模型的有效性和重复性。并用亚致死浓度（由MTT实验确定）的无机和矿物汞（HgCl₂,HgS和朱砂）和柳硫汞钠处理细胞,检测诱导的细胞热休克响应。结果：热休克和CdCl₂作用HSE-SEAP-HeLa细胞模型后,细胞上清液中的分泌型碱性磷酸酶的含量显著升高；热休克蛋白表达早于Cd²⁺对细胞活性的降低。4种汞化合物在亚致死浓度均诱导细胞内热休克蛋白的变化,但4种化合物的作用时间和浓度效应不同,显示不同类型的汞化合物早期毒性存在差异。结论：HSE-SEAP-HeLa细胞模型可有效检测重金属诱导的热休克应激作用,并具有良好的重复性,可应用于重金属有关的早期毒性预测或药物毒性评估。     

对用于包被冠状动脉支架的抗CD34单克隆抗体的生物学指标的质量控制研究

目的:对鼠源抗CD34单克隆抗体的结合活性以及包被在冠状动脉支架上的抗体量和牢固度等技术指标进行评价。方法:采用流式细胞术测定抗CD34单克隆抗体结合KG-1 a细胞的活性;酶联免疫显色方法测定支架上抗体包被量;体外模拟冲刷方法测定支架上抗体牢固度;采用显微镜计数方法测定包被抗CD34抗体支架体外捕获CD34(+)细胞的能力。结果:在抗CD34 M cAb浓度为1μg.mL-1时,细胞平均阳性率为96.34%;支架上抗体含量为50.97 ng.cm-2,而且体外模拟冲刷后支架上抗体含量无显著变化;包被抗CD34单抗的冠状动脉支架捕获细胞数为4万个.cm-2。结论:该方法可用于体外检测抗CD34单克隆抗体包被冠状动脉支架的生物学参数。