不育男性精子DNA碎片化指数与精液解脲脲原体及人型支原体感染关系的研究

目的:探讨解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)对不育男性精子浓度、活动力、正常形态率及精子DNA碎片化指数(DNA fragmentation index,DFI)的影响.方法:选取169份精液标本,其中129例特发不育者为不育组,40例正常生育者为对照组,计算机辅助精液分析(CASA)系统分析精子浓度和活动力.精子形态分析采用Shorr染色法,吖啶橙试验(acridine orange test,AOT)检测精子DFI.支原体检测采用培养法.结果:与对照组相比无Uu/Mh、Uu或Uu+Mh感染组精子DFI显著增高(P＜0.05),与无Uu/Mh感染组相比,Uu或Uu+Mh感染组DFI亦显著增高(P＜0.05).与正常生育对照组相比无Uu/Mh、Uu或Uu+Mh感染组正常形态率显著降低(P＜0.05),其余组间无统计学差异(P＞0.05).与正常对照组相比,无Uu/Mh、Uu、Mh和Uu+Mh感染组的精子浓度、a级、a+b级和a+b+c级精子百分比均显著降低(P＜0.05),而除无Uu/Mh感染组外,其余各组间无统计学差异(P＞0.05).结论:特发性不育男性的精子浓度、正常形态率、a级、a+b级和a+b+c级精子百分比较正常男性的均显著下降,Uu/Mh感染并非是最主要原因,可能是其他重要因素或综合因素影响的结果.特发性不育男性精子DFI明显增加,Uu是其中的主要因素之一.Uu可能主要通过对精子DNA,而不是常规参数的影响来造成男性生育力的下降.     

人精子形态染色方法的比较

目的 评价不同染色法的精子形态学分析结果.方法 用改良巴氏、Shorr、Diff-Quik 及瑞-吉氏染色法对50例精液涂片染色,分别计算精子形态正常率、头部畸形率、中段畸形率、尾部畸形率及顶体完整率.结果 4种染色方法检测形态正常精子率和头部畸形精子率差异均无统计学意义(P＞0.05).瑞-吉氏染色法检测中段及尾部畸形精子率明显低于其它染色法(P＜0.05).检测顶体完整精子率时,瑞-吉氏及Shorr染色法相对更易区分顶体与核.结论 4种精子形态染色方法均可作为人类精子形态学检测实用方法.其中,Shorr染色法快速、简单,能较好区分精子各部分形态,且适用于顶体完整率判读.     

维生素K2诱导K562细胞凋亡的机制研究

目的 对维生素K2(Vit K2)诱导慢性粒细胞白血病(CML)急变细胞株K562细胞凋亡进行检测.方法 取对数生长期细胞(1×108/L),对照组不加药,实验组分别加入不同浓度(5、10、20和40μmol/L)Vit K2后24、48、72和96 h收集细胞,采用透射电镜技术、流式细胞术、RT-PCR以及化学发光比色法等多参数分析细胞凋亡及其机制.结果 Vit K2作用K562细胞72 h后,电镜下可见典型的凋亡细胞的形态改变;流式细胞仪分析结果显示随着Vit K2浓度的增加和作用时间的延长,凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度、时间依赖性;S期细胞逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多,细胞被阻滞在G0/G1期.随着Vit K2浓度的增高抗凋亡基因bcl-2、survivin表达明显下调,而促凋亡基因bax表达无明显差异,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的活性逐渐增强.结论 Vit K2可能是通过激活caspase-3途径诱导K562细胞发生凋亡,同时抗凋亡基因survivin、bcl-2也参与了凋亡调控过程.     

凋亡相关基因survivin、bcl-2和bax的表达在维生素K2诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的探讨维生素K2(VK2)诱导急性早幼粒细胞白血病(AML)细胞株HL-60细胞凋亡的作用机制。方法采用透射电镜技术观察VK2处理后细胞结构变化;流式细胞术Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡;PI染色分析细胞周期变化;RT-PCR技术检测凋亡相关基因survivin、bc l-2和bax的表达。结果40μmol.L-1VK2作用HL-60细胞72 h后,电镜下可见典型细胞凋亡的形态改变;流式细胞术结果显示随着VK2浓度的增加和作用时间的延长细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度、时间依赖,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);同时S期细胞逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多(P<0.05),细胞被阻滞在G0/G1期;且随着VK2浓度的增加抗凋亡基因survivin、bc l-2表达明显下调(P<0.05),而促凋亡基因bax表达无显著差异(P>0.05)。结论VK2能诱导HL-60细胞发生凋亡,抗凋亡基因survivin和bc l-2 mRNA下调可能是VK2诱导HL-60细胞发生凋亡的机制之一。     

精液常规参数初检合格后不同时间点再分析结果及其与精子DNA损伤的关系

目的:探讨完全液化且常规参数初检合格的精液标本,于不同时间再分析的结果差异,及精子DNA碎片化指数(DFI)与精子活动力改变的相关性。方法:选取127份符合纳入标准的精液标本,分别于取样后15、30、60 min时采用计算机辅助精液分析(CASA)系统进行分析。精子形态分析采用Shorr染色法,吖啶橙试验(AOT)检测DFI。结果:3个时间点精子浓度、a级和b级精子百分率均无统计学差异(P>0.05)。取样15 min时a+b和a+b+c级精子百分率显著高于30和60 min时的结果(P<0.05),后两者间无统计学差异(P>0.05)。不同时间精子活动力各项指标中,至少有1项由"正常组"变为"异常组"的发生率为25.2%,两组间DFI和形态学无统计学差异(P>0.05)。取样后15到60 min变化的精子活动力指标中,a、a+b、a+b+c级下降值与DFI存在正相关性(P<0.05)。结论:取样后15 min内完全液化并初查参数合格的精液标本,30～60 min内复查时,a级和b级精子百分率波动并无显著差异,而a+b级及a+b+c级精子则可能显著下降,精子活动力指标可能出现异常。故应至少进行2次精液分析,综合评估生育力。如2次结果差异较大,尤其是a级精子百分率下降幅度较大,则可能与精子DNA损伤有关,需进一步行精子DNA损伤检测。