应用同源重组技术快速构建乙型流感M蛋白通用疫苗的表达载体

【摘要】 目的 应用同源重组技术快速构建pUC57和乙型流感M基因的表达载体。方法 分析2006～2016年世界卫生组织在北半球推荐使用乙型流感病毒疫苗株的变化趋势和云南省内的优势流行病毒株,筛选4株典型毒株做实验毒株。提取病毒RNA基因组,进行RT PCR后,胶回收后与线性化的载体pUC57后,在37℃同源重组30min,即完成一步法重组。通过转化大肠杆菌筛选阳性克隆,并对阳性质粒进行PCR、酶切和测序鉴定。将表达产物进行初步纯化后免疫小鼠,经过三次加强免疫后,通过中和实验评价表达产物的免疫效果。结果 平板菌落数计数法获得的同源重组阳性率833%,PCR阳性质粒能获得大小正确的目的片段,使用EcoRⅠ单酶切后,其大小正确,测序后发现质粒碱基没有发生突变或缺失,序列正确,同源重组技术共计耗时34h。中和实验结果显示,相同谱系内的抗原保护效价在1024,并在不同谱系间的交叉保护在256～512。结论 同源重组技术能在流感通用疫苗的上游开发环节中快速、高效的构建重组质粒,表达产物能够诱导小鼠产生良好的免疫保护效果。     

生物制品生产中6种常用液体培养基高压灭菌前后的pH变化特征分析

目的：建立注射用右旋雷贝拉唑钠细菌内毒素动态浊度法检测方法。方法：按照《中国药典》2010年版二部相关附录，用动态浊度法进行干扰试验。结果：0.06mg?ml-1右旋雷贝拉唑钠无干扰作用，内毒素回收率均在50%~200%之间。结论：本品可用动态浊度法进行细菌内毒素定量检测，建议其内毒素限值为每1mg右旋雷贝拉唑钠中含内毒素的量应小于10.0EU。     

Sabin IPV基础免疫后不同时间的中和抗体水平研究

目的 探讨不同剂量配比的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin IPV)基础免疫后中和抗体的持续时间及加强免疫前后中和抗体水平的变化.方法 用不同配比的Ⅰ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备两批Sabin IPV,并使用GSK制备的DTaP-w IPV作为阳性对照组,对18只Wistar大鼠进行3针基础免疫后,每间隔3个月采血直到加强免疫前,并同时于加强免疫后1个月采血,并对血清中抗脊髓灰质炎病毒3个型别的中和抗体效价进行初步研究.结果 大鼠采用0、1、2月免疫程序进行3针免疫后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体的几何平均滴度随着时间的变化均有所下降,但绝大部分组大鼠的血清中和抗体阳转率仍维持在100％,在加强免疫后,各组的三个型别的中和抗体水平在短期内明显升高.结论 Sabin IPV有良好的免疫持久性,并在加强免疫后,可产生更高水平的中和抗体.     

血清对Ⅱ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度检测结果的影响

目的 比较6种不同血清对Ⅱ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度（CCID₅₀）检测结果的影响。方法 分别采用6种未处理血清和6种预处理血清组（免疫吸附法）进行Ⅱ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度检测（微细胞病变法）,检测了不同组血清中Ⅱ型脊髓灰质炎病毒中和抗体滴度,并使用处理血清组进行促细胞生长试验。最后分析不同血清对感染性滴度的影响。结果 6种未处理血清组病毒感染性滴度检测结果差异有统计学意义（P<0.01）,6种处理血清组病毒感染性滴度差异无统计学意义（P>0.05）。未处理组2号血清的中和抗体滴度为1：4,6号血清的中和抗体滴度为1：8,其余各组血清的中和抗体滴度均<1：4。6种处理血清组的中和抗体滴度均为1：2。血清促细胞生长试验显示6种处理组血清细胞生长趋势正常。结论 Ⅱ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度检测前使用免疫吸附对血清进行预处理,可降低血清中存在的中和抗体对检测的影响,为比较不同实验室数据提供可能。