四川盆地结核分枝杆菌群体遗传学特征研究

目的 探讨四川盆地(重庆、四川地区)流行的结核分枝杆菌(MTB)群体遗传学特征。方法 对413株源自四川盆地的MTB进行长序列多态性(LSP)谱系鉴定, 采用χ²检验分析不同谱系MTB在人群中的分布差异。对菌株进行15位点数目可变串联重复序列基因分型, 评价各位点的分辨力。构建N-J树分析其系统进化;构建最小跨度树以模拟群体菌株的遗传结构;采用分子方差分析不同谱系MTB的群体间遗传分化;采用贝叶斯模型计算菌株最近共祖年代。结果 通过LSP可将413株MTB分为两大谱系, 其中北京谱系占56.2%(232/413), 欧美谱系占43.8%(181/413)。两谱系MTB在人群中的分布(性别、年龄、民族以及菌株耐药性)差异无统计学意义(P>0.05)。北京谱系MTB的N-J树呈放射状分布, 最小跨度树中有72.4%(168/232)的菌株被划分到同一“克隆复合群”;欧美谱系MTB的N-J树呈枝状分布, 最小跨度树中呈现出多个“克隆复合群”。北京谱系MTB在该地区有显著的群体间遗传分化(F_ST=0.018 91, P<0.05), 而欧美谱系MTB群体间遗传分化不显著(F_ST=0.005 19, P>0.05)。欧美谱系MTB中最大菌株复合群的最近共祖年代为723(95%CI:517～946)年。结论 北京谱系和欧美谱系MTB在四川盆地以“互相对抗”形式流行;两谱系MTB的群体间遗传分化存在差异;欧美谱系MTB的侵入可能与一次历史事件(约720年前的战争)有关。     

骨关节结核各类标本进行结核分枝杆菌培养与PCR检测的阳性率结果分析

目的 比较骨关节结核病灶中脓液、干酪、肉芽及死骨组织的结核分枝杆菌培养阳性率,及结核分枝杆菌BACTEC MGIT 960（简称“MGIT 960”）培养、改良罗氏培养基培养、PCR检测的联合阳性率.方法 2011年6月至2012年5月首都医科大学附属北京胸科医院收治的经病理明确诊断为骨关节结核的患者50例,通过手术获取病灶中的脓液（50份）、干酪（42份）、肉芽（48份）及死骨组织标本（43份）,分别进行结核分枝杆菌MGIT 960培养及改良罗氏培养基培养,比较4种组织标本的培养阳性率,计算2种培养方法的联合阳性率;对脓液标本单独通过PCR方法进行了阳性率检测;计算脓液标本3种方法的联合阳性率.结果 4种标本MGIT 960培养的阳性率依次为：死骨组织（41.9％,18/43）＞脓液（40.0％,20/50）＞肉芽（33.3％,16/48）=干酪（33.3 ％,14/42）;4种标本改良罗氏培养阳性率依次为：肉芽（20.8％,10/48）＞脓液（20.0％,10/50）＞死骨组织（16.3 ％,7/43）＞干酪（14.3％,6/42）;脓液的PCR检测阳性率为48.0％（24/50）.MGIT 960和改良罗氏培养2种结核分枝杆菌培养方法的联合阳性率为50.0％（25/50）,而PCR检测、MGIT960和改良罗氏培养3种方法的联合阳性率为68.0（34/50）.结论 骨关节结核患者,应尽可能选择多种标本以提高培养阳性率.MGIT 960培养可以作为首选的细菌学诊断方法,但如果再联合使用改良罗氏培养和PCR扩增技术,能够进一步提高检出阳性率.     

56例第二足趾移植再造手指患者足部的护理

目的：总结56例足趾移植再造手指术患者供足的护理经验。方法：术前做好心理护理及供区的检查与准备，预防血管危象的发生，提高手术成功率；术后密切观察足部供区血液循环，及时发现、处理血管危象。结果：术后随3个月-1年，除2例供足行走有轻度疼痛外，其余病例供足愈合良好，恢复正常行走。结论：做好患者术前身心准备是手术成功的基础，重视术后供足护理及功能锻炼是促进患者早日康复的关键。     

世界卫生组织中国结核病耐药监测的结果评价

目的及时掌握我国各个省份的结核病药物耐药性水平，并且作到国际可比。方法采用WHO推荐的《结核病药物耐药性监测指南》规定的统一方法进行监测设计和操作。根据各省前一年的涂片阳性的病例数，计算出应监测的病例数，采用随机抽样的方法，在各省选择30个监测点（广东为40个监测点），将监测病例平均分配到各个监测点。每个监测点连续选取涂片阳性的病例，收集痰标本，进行分枝杆菌培养及利福平（RFP或R）、异烟肼（INH或H）、链霉素（SM或S）和乙胺丁醇（EMB或E）4种药物的药物敏感性实验。结果河南、山东、浙江、广东、湖北、辽宁、河南省第二轮监测以及内蒙古自治区的初始耐药率分别是：35．0％（226／646）、17．6％（178／1009）、14．8％（120／809）、18．6％（267／1432）、17．5％（150／859）、42．1％（344／818）、29．8％（364／1222）和35．7％（313／876）；获得性耐药率分别为：66．0％（479／726）、50．0％（110／220）、59．3％（86／145）、33．7％（56／166）．44．5％（106／238）、55．8％（48／86）、60．8％（161／265）和65．3％（252／386）。结论从开展耐药性监测的各省耐药监测结果看，我国的耐药状况仍处于很高的水平。应当引起我们的高度重视，采取有力措施，加强结核病控制工作，控制耐药结核病，减少耐药菌株的蔓延。     

应用蛋白芯片技术快速诊断肺结核病的研究

目的评价结核分枝杆菌蛋白芯片在检测临床标本中结核分枝杆菌抗体的应用价值。方法应用结核分枝杆菌蛋白芯片检测117例结核病患者的血清标本、103例肺部其他疾病患者和健康入的血清标本，并与痰涂片镜检法相比较。结果在菌阳肺结核、菌阴肺结核中，结核分枝杆菌抗体芯片检测的阳性率分别是100％（26／26）、49．6％（45／91），在肺部其他疾病患者和健康人中，结核分枝杆菌抗体芯片检测的阴性率是98．1％（101／103）。结论结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片是一种集基因工程技术、芯片技术和免疫学技术的检测一体化的新型结核病快速诊断方法，具有简便、快速、大量、敏感性高和特异性强、检测成本较低的特点，是结核病、尤其是菌阴结核病辅助诊断的有效方法。     

肺结核并发各种类型肺外结核患者的分布及其耐药情况分析

目的 探讨肺结核并发各种类型肺外结核患者的分布及其耐药情况。方法 选取2013年1月至2015年12月在首都医科大学附属北京胸科医院住院治疗的347例肺结核并发肺外结核患者(男199例,女148例)为研究对象,回顾性分析患者的年龄、性别、肺外结核并发感染部位等临床特征,同时对痰菌培养阳性的结核分枝杆菌临床分离株进行药物敏感性试验。比较分析并发不同类型肺外结核患者的耐药情况。结果 347例肺结核并发肺外结核患者中,中位年龄33(24~52)岁,其中高发年龄为20~39岁,占41.8%(145/347)。常见并发肺外结核的类型依次为:骨关节结核112例(32.3%,112/347),淋巴结结核96例(27.7%,96/347),结核性脑膜炎82例(23.6%,82/347),结核性腹膜炎23例(6.6%,23/347),结核性心包炎9例(2.6%,9/347),肠结核8例(2.3%,8/347),泌尿系结核和结核性多浆膜炎各5例(各占1.4%,5/347),肾结核2例(0.6%,2/347),脾结核、女性盆腔结核、肝结核、附睾结核和鼻结核各1例(各占0.3%,1/347)。并发骨关节结核、淋巴结结核、结核性脑膜炎、结核性腹膜炎和其他类型肺外结核患者的中位年龄分别为:47(26~60)岁、26(20~42)岁、34(25~50)岁、26(20~46)岁和47(31~66)岁;上述各组中位年龄之间比较,差异有统计学意义(χ ²=36.25,P=0.000)。347例患者中有189例患者进行了痰培养,对其中70例细菌培养阳性的临床分离株进行的药敏试验结果显示,肺结核并发肺外结核的总体耐药率为44.3%(31/70),单耐药率、多耐药率和耐多药率分别为11.4%(8/70)、2.9%(2/70)和30.0%(21/70)。 结论 肺结核并发肺外结核的累及部位广泛,其中最为常见的累及部位为骨关节、淋巴结和脑膜。肺结核并发肺外结核的总体耐药率高。     

薄层凝胶TLA＋PNB法培养和鉴定结核杆菌的应用评价

目的 通过与L-J固体培养,16SrDNA核酸序列测序方法比较,评价一种快速结核分枝杆菌培养和鉴定方法 （薄层凝胶TLA+PNB）的应用价值。 方法 实验样本来源于北京胸科医院疑似结核病例,包括痰样本和气管分泌物。所有的样本用NaOH/NALC方法 前处理,然后离心用PBS中和后接种于L-J固体培养基和TLA+PNB固体培养基上。对培养阳性的标本,水煮法提取DNA后PCR扩增16S rDNA核酸序列并测序。最后分别计算2种培养基的敏感度,特异度,培养时间,污染率和TLA+PNB菌种鉴定的敏感度,特异度。 结果实验共包含 211份临床样本。对于抗酸染色阳性的标本,培养阳性率为 77.4%,而对于抗酸染色阴性的标本,L-J 和TLA培养阳性率均为 8.2%。TLA 和L-J敏感度均为 84.2%,特异度均为100%。TLA+PNB培养基在 48例培养阳性的标本中发现 8例 NTM,敏感度为88.9%,特异度为100%。污染率TLA 和L-J分别为4.7% 和1.2%。平均报告阳性结果时间 TLA 和L-J分别为10.6-d和22.9-d (P<0.001)。 结论 TLA+PNB 培养和鉴定方法 是一种快速、可靠、廉价的结核分枝杆菌诊断方法 。在基层实验室中,有很好的推广价值。     

我国痰涂片镜检质量控制状况分析与评价

痰涂片镜检质量控制是国家结核病控制规划(NTP)的重要内容。自1994年卫生部结核病控制中心拟定“痰检质控试行方案”以来,不断扩大质控覆盖面,逐步建立了以结核病细菌学实验室网为基础,以“国家级→省级→地(市)级→县级”实验室逐级督导为基本模式的质控系统。本文对1995～1999年全国痰检质控状况进行了分析。5年来痰涂片质控面由最初覆盖20个省98个县发展到1999年的31个省1337个县,痰涂片阳性和阴性符合率以及涂片肉眼观察的各项指标连续保持较高水平。作者就全国质控结果现状以及存在问题进行了分析,提出了自己的观点和相应对策。     

结核分枝杆菌对利福喷汀与利福平交叉耐药的实验研究

目的 观察利福喷汀对结核分枝杆菌的杀菌效力及其与利福平的交叉耐药性，探讨利福喷汀对结核分枝杆菌的实验室耐药界限，为临床应用利福喷汀治疗结核病，包括治疗对利福平耐药的结核病提供依据。方法 用7H9液体培养基、苏通液体培养基、改良罗氏固体培养基测定利福喷汀和利福平对结核分枝杆菌标准株(H37Rv)及临床分离的利福平敏感株、利福平耐药株的最低抑菌浓度(MIC)。结果 在7H9液体培养基上对临床分离的19株利福平敏感株分别测定利福平和利福喷汀的MIC，有80％利福平敏感株利福平的MIC≥0．32μg／ml，而利福喷汀的MIC多分布在0．02～0．32μg／ml之间(占84％)；无论标准株H37Rv、利福平敏感株(19株)或是利福平耐药株(45株)，利福喷汀对结核分枝杆菌的MIC普遍比利福平低2～4倍；利福喷汀敏感株和耐药株的MIC差别较大，在MIC为5～10μg／ml处能最大限度地区分敏感菌和耐药菌。结论 利福喷汀与利福平存在着交叉耐药，但利福喷汀比利福平有更强的杀菌效力，部分结核分枝杆菌对利福平达到临床耐药时，仍未达到利福喷汀临床耐药，对利福平耐药的部分结核分枝杆菌对利福喷汀仍具有一定程度的敏感性，提示临床上对利福平耐药的结核病患者使用利福喷汀可能有一定效果；实验结果对利福喷汀临界耐药界限进行了初步筛查，为利福喷汀常规药敏试验的开展提供了基本试验数据。     

反相斑点杂交快速检测结核分枝杆菌rpoB基因突变

目的建立以聚合酶链反应(PCR)为基础的寡核甘酸探针反相斑点杂交方法快速检测对利福平耐药的结核菌相关的rpoB基因突变，并评价其临床应用价值。方法应用PCR-反相斑点杂交方法对利福平耐药的62株结核菌和对其敏感的40株结核菌进行检测，所得结果与传统药敏试验结果以及102株结核菌的直接测序结果进行比较。结果62株对利福平耐药的菌株中，54株碱基突变被准确鉴定，灵敏度为87．1％(54／62)，阳性预测值为100％；40株对利福平敏感的菌株均被准确鉴定，特异性为100％，阴性预测值为83．3％(40／48)；准确度为92．2％(94／102)。与测序法结果符合率为99％。结论以PCR为基础的反相斑点杂交方法其敏感度和特异性均高，无假阳性结果，因此适用于大批量结核菌对利福平耐药性的初筛。