百日咳毒素S1亚单位在大肠杆菌中的表达及其生物学特性研究

本文采用PCR技术,以百日咳杆菌染色体DNA为模板,用质粒pCR2.1-TOPO作为载体克隆了编码百日咳毒素S1亚单位（Pertussis toxin S1 subunit)806bp的结构基因,分别在DH5α,和TOP10两株大肠杆菌中进行表达,并分别获得6株和5株表达rS1阳性的重组菌株,rS1的最高表达量分别占细胞总蛋白量的14％（DH2）和24．2％（H13）,重组菌中及粗制的rS1能被抗天然PTS1亚单位的单克隆抗体1B7识别,在小鼠主动免疫实验中,粗制的rS1免疫小鼠后,对百日咳杆菌18323株的脑腔攻击具有免疫保护作用,保护率可达56．3％,粗制的rS1免疫家兔所得血甭,用HP－PT及1B7－PT包被的ELISA测定效价,抗PT抗体的滴度为1：32000。该抗rB1血清在小鼠被动免疫保护实验中,对百日咳杆菌18323株的脑腔攻击的动免疫保护作用达到100％,证明本文获得的rS1亚单位有良好的抗原性和免疫原性,具有与天然S1相同的抗表位,有望成为百日咳基因工程单位疫苗的候选成分。