体外细胞色素P450同工酶对银杏叶水提取物抗血小板聚集作用的影响

目的应用体外肝细胞模型研究中草药银杏叶提取物的代谢途径,即细胞色素P450酶(CYP450)药物代谢酶系对银杏叶拮抗血小板聚集效应的影响。方法制备人超低温冷冻肝细胞,通过与银杏叶提取物预孵育,评估肝脏CYP450药物代谢酶系(CYP1A2、CYP286、CYP2C19、CYP2E1、CYP3A4)对银杏叶水提取物拮抗血小板活化因子(PAF)激活的血小板聚集作用。富含血小板血清(PRP)和少含血小板血清(PPP)与不同质量浓度(25、50、100、200和1000μg·L~(-1))PAF孵育,建立PAF激活血小板聚集的体外模型。银杏叶水提物与人超低温冷冻复苏肝细胞预孵育后,与PRP和PAF培养,观察银杏叶水提物的体外效应(抗PFA血小板聚集激活作用)是否受人肝细胞代谢的影响。CYP450药物代谢酶的特定抑制物伊曲康唑(CYP3A4)、α-萘黄酮(CYP1A2)、奥芬那君(CYP286)、奥美拉唑(CYP2C19)、4-甲基吡唑(CYP2E1)与人肝细胞预孵育后、与银杏叶水提物和PRP和PAF孵育,评估银杏叶水提物的体外效应与何种CYP450药物代谢同工酶有关。结果PAF激活血小板聚集作用遵循米-曼氏动力学方程,其K_m为98μ·L~(-1)。银杏叶水提物抑制PAF的血小板聚集激活作用,其半数抑制剂量为33μg·L~(-1)。人肝细胞与银杏叶水提物预孵育后,其体外效应(抗PAF血小板聚集激活作用)增强30%,差异有统计学意义(P<0.05)。人肝细胞与细胞色素CYP450同工酶CYP286、CYP2C19、CYP2E1、CYP3A4抑制剂预孵育后,银杏叶水提物的体外效应不受影响。人肝细胞与CYP1A2抑制剂预孵育后,人肝细胞对银杏叶水提物体外效应的增强作用基本消失,差异有统计学意义(P<0.05)。结论银杏叶水提物在体外能抑制PAF的血小板聚集作用,人肝细胞能显著增强这一体外效应,CYP450药物代谢酶CYP1A2可能参与银杏叶的这一体外效应的代谢活化。