放线菌调节抗生素合成的两面性

控制放线菌生产抗生素的一些共同的调节机制，涉及调节基因产物控制抗生素生物合成基因的转录及低分子量信号分子γ-丁内酯家族的相关参与，抗生素正负调控机制相互作用具有两面性。     

响应面法优化他克莫司发酵培养基中无机盐组合#br#

目的 利用响应面法优化发酵培养基中的无机盐成分,提高他克莫司产量。方法 在单因素实验的基础上,利用Plackett-Burman设计筛选对他克莫司产量有显著影响的无机盐因子,利用最陡爬坡试验为响应面分析确定中心区域,利用中心组合(central composite)设计与响应面分析法获得关键因素的最佳浓度组合。结果 磷酸氢二钾、硫酸铜、氯化钠和硫酸镁对他克莫司的产量有显著影响,最优无机盐组成为：磷酸氢二钾2g/L,硫酸铜0.02g/L,氯化钠1.81g/L,硫酸镁0.82g/L,在原有培养基上添加该无机盐最优组合,他克莫司产量从586mg/L上升到1037mg/L。与优化前培养基相比,产量提高了77.0%。结论 经响应面法优化,添加最优无机盐组合使他克莫司产量得到显著的提高。     

绛红色小单孢菌G1008接合转移体系的构建

目的 构建绛红色小单孢菌(Micromonospora purpurea)的接合转移体系,并对该体系进行优化.方法 以绛红色小单孢菌G1008染色体DNA为模板,经PCR扩增甲基化酶基因gntK的上下游序列各2000bp左右作为同源交换臂,并将红霉素抗性基因作为筛选标记插入两交换臂之间.以温敏型质粒pKC 1139作为基本载体,构建重组质粒pFD306.借助接合转移技术,将该质粒导入绛红色小单孢菌G1008.结果 经抗性筛选,得到一株阳性菌株,命名为GK1008,经PCR鉴定和测序,验证了重组质粒已整合到染色体上.GK1008菌株对红霉素和安普霉素的抗性均超过500μg/mL.结论 绛红色小单孢菌接合转移体系的构建达到了预期目的,并实现了对该体系的优化,这为其它小单孢菌的分子遗传学操作提供了借鉴.     

红色诺卡氏菌细胞壁骨架药膜的制备与含量测定

目的:制备红色诺卡氏菌细胞壁骨架(N-CWS)药膜并考察其含量测定方法。方法:以N-CWS为模型药物,壳聚糖、聚乙烯醇为成膜材料,通过溶液浇铸法制备N-CWS药膜;使用扫描电子显微镜(SEM)、红外光谱仪、万能试验机对药膜性能进行表征;采用柱前衍生化高效液相色谱法测定药膜中D-阿拉伯糖的含量,采用Kromasil C₁₈(150 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,以50 mmol·L^-1(pH 7.0)磷酸盐缓冲液-乙腈(80∶20,v/v)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长254 nm,柱温40℃。结果:当壳聚糖与聚乙烯醇质量比为3∶2,膜材与甘油质量比为1∶2时,断裂拉伸应变为136.67%,拉伸应力为2.47 mPa。扫描电镜观察到N-CWS主要分布在膜的底面,呈不对称分布;制备的药膜中D-阿拉伯糖在1.1～220μg·mL^-1范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.5%,测得3批次药膜中D-阿拉伯糖分别为(0.988±0.041)mg·g^-1、(1....