疏水蛋白HFBI融合标签能显著提高外源基因在植物中的表达水平

目的针对植物生物反应器中外源基因表达水平普遍较低的问题,探索和评价丝状真菌瑞氏木霉（Trichoderma reesei）编码
的小分子疏水蛋白（Hydrophobin, HFBI）作为融合标签在植物生物反应器中提高系统表达量的应用潜力;分析其提高外源基因
表达水平的可能机制。方法以绿色荧光蛋白（GFP）为报道基因,采用基因体外合成技术和亚克隆技术构建GFP和GFP-HFBI
融合植物表达载体。利用农杆菌渗滤技术接种植物本明烟（Nicotiana benthamiana）。通过GFP荧光观察,荧光显微镜镜检,
Western blot,ELISA和RT-PCR等实验手段测定报告基因GFP在植物中的表达情况,探明HFBI融合标签在植物中表达外源基
因的作用效果和特点并分析其可能的作用机制。结果HFBI融合标签对植物细胞无明显的细胞毒性;GFP-HFBI融合蛋白在植
物中的积累水平显著高于对照;GFP-HFBI融合蛋白在细胞内形成致密的蛋白质颗粒。结论HFBI融合标签能够显著提高外源
基因在植物中的积累水平。推测形成的蛋白质颗粒隔绝了细胞内源性蛋白酶对目的表达产物的降解,进而提高了外源基因产
物在细胞中的积累。
     

在烟草叶片中瞬时表达具有生物活性的重组人纤溶酶原激活剂

目的探索在植物中瞬时高效表达重组人纤溶酶原激活剂（rhPA）的可行性,探寻低成本rhPA表达新途径。方法构建表 达rhPA的烟草花叶病毒（TMV）表达载体pTMV rhPA-NSK和Zera融合标签植物表达载体pJ Zera-rhPA;农杆菌渗滤接种受体 植物Nicotiana benthamiana和N. excelsiana叶片;观察叶片接种部位表型变化;Western blot和ELISA测定和分析rhPA在受体 烟草中的表达情况及表达产物特点;纤维蛋白琼脂糖平板法评价rhPA的体外生物活性。结果病毒载体实验结果显示,pTMV rhPA-NSK病毒载体在N. benthamiana和N. excelsiana叶片接种部位产生不同程度的坏死症状;在坏死组织中依然存在完整的 rhPA蛋白;N. benthamiana中rhPA的表达量略高于N. excelsiana（P<0.05）,约占接种叶片可溶性总蛋白的0.6%;表达的rhPA具 有体外溶栓活性。Zera融合标签实验结果显示,pJ Zera-rhPA表达载体在烟草叶片接种部位未造成坏死;Zera标签与其融合蛋 白rhPA之间可能存在着易断裂位点;Zera标签蛋白微粒的形成是一种逐步积累聚集的过程;在微粒形成过程中,部分可溶性多 肽可能被包裹进了微粒。结论在烟草中可以快速地表达具有生物学活性的rhPA,植物病毒表达系统为低成本rhPA的生产提 供一种富有潜力的新平台。     

经皮肝穿刺胆管引流术并胆道支架植入治疗恶性梗阻性黄疸(附36例分析)

经皮肝穿刺胆管引流术(PDCT)并胆道支架植入一种针对梗阻性黄疸患者术前减轻黄疸和姑息性治疗的有效方法.恶性梗阻性黄疸常由胰腺癌、胆囊癌、胆管癌以及转移性肿瘤如胃癌胆道转移等所引起[1].以皮肤、巩膜黄染为主要表现,随着病情加重可引起肝、肾功能衰竭甚至多器官功能衰竭(multiple organ failure,MOF),严重影响患者生活质量,因此对不宜手术或无手术机会的患者实施姑息治疗十分必要.减轻梗阻性黄疸(减黄)是治疗的首要问题[2].目前国内外减黄治疗有手术或介入2种治疗方法[1].本院36例不宜手术的恶性梗阻性黄疸患者,行经皮经肝胆管引流术(percutaneous transhepatic cholangiodrainage,PTCD)并胆道内支架植入术,疗效满意,报道如下.     

CT与MRCP对肝胆管结石并发肝胆管癌的诊断效果比较

目的 比较CT、磁共振胰胆管造影(MRCP)对肝胆管结石并发肝胆管癌的诊断效果。方法 选取该院2012年12月至2014年12月收治的62例肝胆管结石并发肝胆管癌患者分别行CT、MRCP、B超联合CT、B超联合MRCP检查,记录并比较各种方法对肝胆管结石并发不同类型肝胆管癌的诊断率。结果 CT总诊断阳性率[69.4%(43/62)]低于MRCP[85.5%(53/62)],差异有统计学意义(χ2=4.613,P<0.05)。MRCP对肝胆管结石并发结节型、团块型和胆管乳头型肝胆管癌的诊断率略高于CT,但差异无统计学意义(P>0.05);MRCP对肝胆管结石并发胆管增厚型肝胆管癌的诊断率明显高于CT,差异有统计学意义(P<0.05);B超联合MRCP检测的诊断率明显高于B超联合CT,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CT和MRCP对肝胆管结石并发肝胆管癌均具有较高诊断准确率,并且B超分别与CT、MRCP联合使用可明显提高对肝胆管结石并发肝胆管癌的准确率。