EdU标记兔外周血单个核细胞的体外增殖北大核心

背景:外周血单个核细胞群中含有外周血干细胞,其体外增殖情况仍不清楚,体内移植也缺乏良好的标记物。目的:以EdU作为标记物,观察外周血单个核细胞在干细胞培养基中的增殖情况,以及探讨EdU标记外周血干细胞的可行性。方法:分离新西兰兔外周血单个核细胞,在加入EdU的干细胞培养液中培养1-5 d;于不同的时间点观察细胞形态和进行细胞计数;收获细胞,进行EdU染色,观察EdU阳性细胞并检测阳性率。结果与结论:(1)刚分离出的外周血单个核细胞为类圆形,轮廓清晰;经过1 d培养时,大部分细胞仍悬浮在培养液中,球形或类圆形,有细胞团出现,也见少量细胞散在贴壁,呈现三角形或多边形;培养2 d时,可见较多细胞碎片,大多数细胞仍为类圆形;培养3-5 d时,细胞碎片增多,细胞团体积变小,细胞密度明显降低;(2)随着培养时间的延长,细胞计数逐渐降低;(3)在培养1 d时,有散在EdU红色标记细胞;在培养2 d时,EdU红色标记细胞明显增多,并在培养三四天时维持不明显的变化;在培养5 d时,EdU红色标记的细胞明显减少;培养2 d时,EdU阳性细胞率最高,为(2.38±0.10)%;(4)结果表明,外周血单个核细胞群中增殖细胞率很低,EdU能标记外周血单个核细胞中有增殖能力的细胞。     

碱烧伤后角膜新生淋巴管的实验研究

目的动态检测大鼠角膜碱烧伤后的角膜新生淋巴管和血管的变化,并阐明二者之间的关联。方法制备大鼠角膜碱烧伤模型,于碱烧伤后1周、2周行角膜组织电镜检查,检测角膜新生淋巴管与新生血管。5’核苷酸酶-碱性磷酸酶(5’-nase-alkaline phos-phatase,5’-NA-ALP)双重酶组织化学染色及全角膜免疫荧光染色分别检测碱烧伤后6h、1d、3d、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周的角膜新生淋巴管和新生血管的动态变化,并进行淋巴管计数(lymphatic vessels counting,LVC)和血管计数(blood vessels counting,BVC)比较。结果电镜观察结果:角膜碱烧伤后1周,角膜基质层出现新生血管,未见淋巴管;碱烧伤后2周,新生血管和新生淋巴管均出现。酶组织化学染色结果显示:碱烧伤后6h有新生血管,1周时角膜基质层存在新生淋巴管,2周时LVC和BVC均达到高峰,分别为(16.41±1.00)个和(50.40±1.56)个;以后逐渐下降,5周时LVC为(0.33±0.50)个,BVC为(12.52±2.51)个;8周时均为0。碱烧伤后,新生淋巴管和新生血管呈显著性正...     

角膜移植后患者角膜新生淋巴管与新生血管和炎症的关联

目的:研究角膜移植后角膜新生淋巴管与新生血管和炎症的关联。方法:人角膜取自行二次角膜移植的患者19例。淋巴内皮细胞受体(lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor,LYVE-1)和内皮细胞黏附因子-1(platelet endothelial celladhesion modecule-1,PECAM-1)双重免疫组化法标记角膜中的新生血管和淋巴管,进行淋巴管计数(lymphatic ves-sels counting,LVC)和血管计数(blood vessels counting,BVC),比较BVC、炎症指数(inflammation index,IF)、移植历史(transplantation history,TH)与LVC之间的关联。结果:角膜移植后BVC,IF与LVC间均呈显著性正相关,而TH与LVC间呈显著性负相关。角膜移植后新生淋巴管、血管、眼表炎症间大致成平行发展,新生淋巴管最先退化,其次是眼表炎症,新生血管最后消退。结论:人角膜移植后角膜新生淋巴管与新生血管、眼表炎症之间存在着极为密切的关联。     

角膜移植后角膜新生淋巴管与新生血管间的关联

目的:研究角膜移植后角膜新生淋巴管与新生血管间关联。方法:人角膜取自行二次角膜移植的19名患者。5核苷酸酶-碱性磷酸酶(5-nase-Alkaline phosphatase,5-NA-ALP)双重酶组织化学染色及淋巴内皮细胞受体(lymphatic vessel endothelial receptor,LYVE-1)、内皮细胞黏附因子-1(platelet endothelial cell adhesion modecule-1,PECAM-1)双重免疫组化法标记角膜中的新生血管和淋巴管,并进行淋巴管计数(lymphatic vessels counting,LVC)和血管计数(blood vessels counting,BVC),比较BVC与LVC之间的关联。结果:角膜中存在角膜新生血管12例(63%),存在角膜新生淋巴管5例(26%)。角膜新生淋巴管仅出现在血管化角膜中。角膜移植后BVC与LVC间呈显著性正相关(r=0.725;P<0.01)。结论:人角膜移植后角膜新生淋巴管与新生血管之间存在密切关联。     

角膜新生淋巴管和新生血管在高危角膜移植免疫排斥中的作用比较

目的 比较角膜新生淋巴管和血管在高危角膜移植免疫排斥反应中的作用. 方法 选取30只SD大鼠为正常对照组(A组),将90只角膜碱烧伤大鼠随机分为3组,分别于碱烧伤后第2周(B组)、5周(C组)、8周(D组)行穿透性角膜移植.比较各组角膜植片的平均存活时间;角膜移植术后第3、7 、10天,对各组大鼠角膜植片做组织学检查,并运用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测角膜中γ-IFN、IL-2的蛋白变化,CD31全角膜免疫荧光标记角膜中的新生血管. 结果 角膜移植后A、B、C、D组的植片平均存活时间(MST)分别为(13.33±1.37)d、(5.00±0.63)d、(9.50±1.05)d、(10.00±0.89)d.与其余各组相比,B组MST显著性缩短(P＜0.05),但C、D两组相比MST差异无统计学意义(P＞0.05).角膜移植后各时间段C、D两组角膜中γ-IFN、IL-2蛋白含量、血管面积的差异均无统计学意义(均为P＞0.05). 结论 角膜新生血管和淋巴管均加速高危移植后的免疫排斥反应.相比新生血管,角膜新生淋巴管起着更为重要的作用.     

玻璃体腔注射对裸小鼠视网膜组织形态学的影响

目的观察单纯的玻璃体腔注射对裸小鼠视网膜组织形态学的影响,为建立简单的制作视神经损伤动物模型奠定实验基础。方法在全身麻醉配合眼部局部麻醉情况下,利用微量注射器往裸小鼠玻璃体腔内迅速注入10μL生理盐水,然后在不同的时间点取注射眼进行固定、切片和HE染色,观察视网膜特别是视神经节细胞的变化。结果正常对照组视网膜层次清晰,各层排列整齐而致密,视网膜神经节细胞呈单层排列,大小不一,染色质分布均匀。实验组于注射后第1天、第3天和第5天视网膜神经节细胞减少的情况不明显,十层结构仍相对清晰。但于第7天,视网膜神经节细胞出现细胞明显缺失的现象,第14天为最严重,第30天和第60天与第14天相比无明显差别。结论玻璃体腔注射过量的生理盐水能够损伤视网膜组织,造成神经节细胞减少,有可能成为一种简单的制作视神经损伤动物模型的方法。     

3种滴眼液对麻醉小鼠可逆性白内障的保护作用

目的:探讨3种不同的滴眼液在麻醉小鼠晶状体浑浊中的保护作用.方法:将20只6周龄C57BL/6j小鼠分为4组,A组为自然暴露组(对照组),B组为滴用透明质酸钠组,C组为滴用甲基纤维素滴眼液组,D组为滴用生理盐水组.分别于麻醉后10,20,30,45和60 min观察小鼠晶状体浑浊情况.结果:与A组相比,3种滴眼液均不同程度地延长小鼠晶状体浑浊的时间;30 min时,4组小鼠浑浊发生率分别为90%,50%,50%和10%,并延缓晶状体浑浊的进展;60 min时,4组小鼠3级浑浊的发生率为30%,10%,10%和0,其中生理盐水的作用效果最优,可以明显延迟晶状体变浑浊的时间.结论:麻醉小鼠的晶状体浑浊程度可以被相关滴眼液延缓,适用于短时间的眼科检查和处理,又因其经济易得,可广泛应用于小鼠活体的眼科检查中.     

强力霉素抑制角膜移植后的新生血管

背景:角膜移植后40%～60%的患者发生了角膜新生血管,移植后的角膜新生血管加速了角膜免疫排斥反应的发生.抑制角膜移植后的角膜新生血管有利于延长植片的存活时间,提高角膜移植手术的成功率.目的:探讨强力霉素对角膜移植后角膜新生血管的抑制作用.设计、时间及单位:随机对照,动物实验观察,于2007 03/08在中山大学中山眼科中心(眼科学国家重点实验室,2006DA1050541)完成.材料:健康清洁级SD大鼠48只作为角膜移植受体,Wistar大鼠24只作为供体,受体眼为右眼,供体眼为双眼.CD31-PE荧光抗体由美国Sigma公司提供,VEGF ELISA试剂盒由美国RapidBio公司提供.方法:建立大鼠同种异体角膜移植模型,48只受体鼠随机分为2组:盐水对照组和强力霉素用约组,24只/组.术前20min以1%阿托品滴眼液散瞳,植片直径为2.75 mm,植床直径为2.5 mm.术后盐水对照组右眼结膜囊内滴用生理眼水,3次/d;强力霉素用药组右眼结膜囊内滴用1%强力霉素眼药水,3次/d:直至术后30d.主要观察指标:全角膜免疫荧光法检测角膜移植后角膜新生血管的发展,ELISA动态检测角膜组织中VEGF蛋白的表达.结果:①强力霉素用药组植片存活(20.67±3.01)d,比盐水对照组(9.67±9.73)d明显延长(P＜0.01).②角膜移植后3,7,14d盐水对照组新生血管面积相对百分比分别为(4.00±1.00)%,(14.33±4.04)%,(31.33±3.51)%;强力霉素用药组新生血管面积相对百分比分别为(1.67±1.15)%,(4.67±1.53)%,(18.33±1.53)%.其中7,14d时两组比较差异显著(P＜0.05).③角膜移植后强力霉素用药组血管内皮生长因子蛋白水平均低于盐水对照组(P＜0.01),.角膜移植后3,7,14d,盐水对照组血管内皮生长因子蛋白水平为(541.00±75.44),(960.00±90.14),(976.00±130.41)ng/g:强力霉索用药组为(115.33±9.29),(239.00±41.62),(361.00±65.20)ng/g,各时间段比较差异显著(P＜0.05).结论:强力霉素能抑制角膜移植后角膜新生血管的生长,延长植片的生存时间.